收藏本站
《湖南农业大学》 2002年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)乙烯受体基因(etr1)的克隆及表达分析

张桂和  
【摘要】: 巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)是一种重要的热带经济林木,其胶乳是目前工业用天然橡胶的唯一来源,由于具有特殊而重要的用途,在热带地区被广泛种植。提高胶乳产量一直是橡胶栽培及生产的主要目标。自从1968年乙烯利被首次作为化学刺激剂而应用于提高胶乳产量以来,不仅胶乳增产效果明显,而且创造了一整套以乙烯利为刺激手段的刺激割胶新制度,带来了显著的经济效益。但是,由于乙烯利应用的普及,乙烯利刺激割胶引起橡胶树发生死皮病及加速胶树衰老,缩短胶树寿命等副作用也越来越明显。为了克服这些副作用,使乙烯利能更有效地刺激增产,长期以来,人们在细胞水平、膜水平和乳管细胞内含物的生理生化层面上进行了大量的研究,但仍未完全了解乙烯对胶树的作用机制。本研究从分子水平入手,克隆橡胶树的乙烯受体基因(etr1),并在转录水平和蛋白质翻译水平上研究etr1基因在乳管细胞中的表达及与乙烯刺激的关系,取得了以下结果: 1.通过对GenBank登录的已克隆的植物etr1基因序列进行核苷酸同源性分析,设计特异引物。以胶乳总RNA为模板,反转录成cDNA第一链,又以cDNA第一链为模板进行PCR扩增,得到特异扩增片段。 2.把扩增得到的特异片段连接到pGEM-T Easy载体上,用Cohn法转化大肠杆菌DH5α,经过筛选、鉴定,得到阳性克隆子。 3.从阳性克隆子中提取克隆片段,经序列测定分析,结果表明,克隆片段的cDNA大小为816bp,编码的蛋白质包含272个氨基酸。基因序列通过Blast 2.0 Network Service软件对GenBank,EMBL,DDBJ,PDB四个大型数据库中记录的1 337 978条核酸和蛋白质序列进行序列相似性检索,结果表明与芒果、 一 西番莲、波斯梅、草毒、葡萄、西洋梨等15种已报道的植物的etrl基因cDNA g 的同源率为75%~88%;蛋白质氨基酸序列的同源率为90%~95%,表明本研究 确实克隆到了橡胶树 e tri基因的 cDNA序列。 4.从橡胶树 PR107品系的嫩叶提取基因组 DNA,用限制性内切酶 EcoR、Hinofll 分别酶切,琼脂糖凝胶电泳分离并转膜后,用克隆的橡胶树 e tri基因的 cDNA 片段作探针进行 Southern杂交分析,结果表明,EcoR酶切在约 3.okb处有 一条杂交带出现,HI。ofll酶切在约4.skb处有一条杂交带出现。对cDNA进行 酶切位点分析,该 cDNA内部不含 ECOR和 Hinofll酶切位点,表明 e tri基因 在橡胶树基因组中只有1个拷贝,为低拷贝基因。 5.用橡胶树PR107、RRIM600、GTI三个品系的基因组洲A分别经HinAn酶切后, 进行了Southern杂交。结果表明,三个无性系都只出现一条杂交带,位置一 ’致(~4.skb人说明etr基因在这三个品系的橡胶树中并无遗传背景上的差异。 。6.用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,对橡胶树 e tr基因在转录水平 一 一”””—”—一”一”—一 一’”-’””——””-——————’””’”’ (mRNA水平)上进行基因表达量的差异分析。结果表明,上述三个橡胶树品系 对照和乙烯处理共六个样品都得到了特异扩增条带。各胶乳样品的扩增条带 。、在亮度上有明显差别。用 Scion Ima邵软件分析各泳道中条带的亮度,计算出 对照与各处理的RT-PCR产物相对量。分析结果表明,橡胶树不同品系经乙烯 利刺激处理后,e tri基因的表达量均有明显的增加,增加量随不同品系有所不 同,处理是对照的二.374~4.733倍,说明橡胶树对乙烯利刺激的反应较为敏 感。增加值有可能成为橡胶育种上的早期预测指标。 7.从乙烯处理的橡胶树植株和对照植株胶乳中提取蛋白质,进行SDS-PAGE。结 果表明,电泳图谱含有 30~40个条带,大小在 10~100余 KD之间,强带和 弱带约各占一半。不同品系之间的蛋白电泳图谱差异不大;同一品系乙烯处 理和对照相比,在约 14KD和 18KD处的两个蛋白条带的表达量上有明显增加。 “说明乙烯刺激使某些胶乳蛋白在表达量上发生了变化,这些变化为乙烯刺激 ’.导致胶乳产量增加奠定了基础。
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:Q943

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 乌永忠,马康涛,张迺蘅;RT-PCR方法检测非神经元、类神经元、神经元细胞系中淀粉样前体蛋白基因表达[J];北京医科大学学报;1999年01期
2 戴建国,肖华胜,张萍,陈镔复,赵文明;用RT-PCR对mRNA进行定量分析[J];第四军医大学学报;1999年03期
3 黄宗道;我国天然橡胶业面临的挑战和发展战略[J];中国工程科学;2001年02期
4 彭世清,吴坤鑫,陈守才;橡胶延长因子的cDNA克隆及序列分析[J];华南热带农业大学学报;2000年02期
5 吴琦,唐彬,黄宁,王伯瑶;RT-PCR法检测HNP_1基因在气管上皮细胞转染后的表达[J];华西医科大学学报;1999年03期
6 彭世清,陈守才;巴西橡胶树Polyubiquitin基因5'调控序列的克隆及分析[J];农业生物技术学报;2002年01期
7 毛根海;;发展中的世界天然橡胶业[J];热带作物研究;1984年03期
8 范思伟;杨少琼;;巴西橡胶的乙烯生理学[J];热带作物研究;1991年03期
9 范思伟;杨少琼;;巴西橡胶的乙烯生理学(下)[J];热带作物研究;1991年04期
10 蒋菊生,周钟毓;面向21世纪的我国天然橡胶科技[J];热带作物研究;1997年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谢永芳,舒坤贤,梁亦龙,袁帅,张继承;小鼠胚胎发育中期肠细胞增殖与凋亡的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
2 王子良,许丽艳,李恩民;质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响[J];癌变.畸变.突变;2005年02期
3 康振桥;季艳霞;杨志勇;苏光;崔彦芝;;血管内皮生长因子亚型在人乳腺癌细胞中的表达差异[J];癌变.畸变.突变;2006年03期
4 安刚;黄天华;谢庆东;王德刚;;pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响[J];癌变.畸变.突变;2007年04期
5 朱斌;杨罗艳;赵晓昆;;膀胱癌多药耐药基因MDR-1与金属硫蛋白-3表达的关系[J];癌变.畸变.突变;2007年05期
6 毕玉平,廖俊杰,单雷,王兴军,徐平丽;番茄双抗TMV和CMV基因工程的研究[J];山东农业科学;1997年06期
7 单雷,毕玉平,王兴军,徐平丽,李广存;双抗TMV和CMV转基因番茄后代的遗传分析[J];山东农业科学;1998年04期
8 葛宏华,孙莉宁,张其瑞;家蚕血淋巴蛋白的发育变化和BmLSP的纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2001年03期
9 于俊红;黄绵佳;田维敏;;巴西橡胶树橡胶生物合成调控的研究进展[J];安徽农学通报;2007年12期
10 王北艳;曹宁;汤晖;;苜蓿中华根瘤菌电转条件的优化[J];安徽农学通报;2008年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王春花;成军;郎振为;吴煜;杨艳杰;张黎颖;刘妍;;基因表达谱芯片技术筛选XTP3蛋白反式调节基因[A];第一届全国人工肝及血液净化学术年会暨全国人工肝及血液净化攻关协作组成立大会论文集[C];2004年
2 唐南洪;王晓茜;李秀金;陈燕凌;;构建特异高表达人谷氨酰胺合成酶基因(hGS)的肝细胞[A];第三届全国重型肝病及人工肝血液净化学术年会论文集(上册)[C];2007年
3 魏绍冲;王新春;彭静;孙旭东;;桃果实PpEIN2基因片段的克隆及序列分析[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
4 樊继德;孔庆国;张梅;于喜艳;;子房注射法获得转基因甜瓜植株[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
5 黄志伟;郑金贵;郭明殊;;三萜类化合物的药理作用及代谢调控的分子生物学研究进展[A];福建省科协第五届学术年会提高海峡西岸经济区农业综合生产能力分会场论文集[C];2005年
6 商庆龙;谷鸿喜;;HPV16 L1蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性研究[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
7 陈振文;赵太云;孙贺娟;路静;王迎;孟霞;曹争和;王钜;;微卫星DNA与生化标记分析对长爪沙鼠群体遗传分析的比较[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年
8 王革;王妍;何凌冰;乔刚;朱一松;王君艳;;酵母分泌表达重组人神经生长因子[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年
9 任华;顾建华;孙竹筠;沈万赟;吴鹰;周忠良;;RT-PCR法检测斑马鱼(Danio rerio)卵黄蛋白原mRNA表达[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
10 马珺;陈云霜;王爱善;李仲逵;;珍稀鸟类东方鹳的性别鉴定[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐立新;MeJA对人参DS基因表达的影响及DS在酵母中的表达[D];吉林大学;2011年
2 谭德冠;巴西橡胶树体胚发生的改良及乳管分化研究[D];海南大学;2011年
3 吴正松;城镇生活垃圾与污水厂污泥一体化处理技术研究[D];重庆大学;2011年
4 张鹏翼;双选择抗生素影响大肠杆菌间质粒接合转移的分子机制暨纤维堆囊菌So0157-2表达蛋白质组学分析[D];山东大学;2010年
5 周琳璘;TaMS-MADSbox和TaG3BP基因在小麦温敏雄性不育系育性转换中的功能分析[D];西北农林科技大学;2011年
6 魏朝明;中国螽(虫斯)总科昆虫的RAPD分析研究[D];陕西师范大学;2000年
7 贾永清;表达禽流感病毒HA基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];东北农业大学;2000年
8 姜永厚;新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
9 崔俊;c-fms癌基因异常激活机制及携带AFP增强子反义c-fms与肝癌的研究[D];第一军医大学;2000年
10 陈烨;幽门螺杆菌粘附素HpaA的克隆、表达及其免疫原性和保护性研究[D];第一军医大学;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 于军伟;苹果α-法尼烯合成酶基因转化番茄研究[D];山东农业大学;2010年
2 王彩丽;多杀性巴氏杆菌PCR鉴定和质粒性质研究[D];甘肃农业大学;2010年
3 王阅雯;淇河鲫鱼形态学和RAPD标记遗传多样性研究[D];河南师范大学;2010年
4 赵祥树;天山北坡加工番茄病毒病主要病毒及其动态的分子检测[D];石河子大学;2010年
5 蒋天梅;枇杷果实乙烯生物合成及相关基因表达研究[D];浙江大学;2011年
6 胡青素;套袋对甜柿果实品质及呈色机制的影响[D];中南林业科技大学;2010年
7 王雪娇;1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶的制备及其作用机理的初步探索[D];西北大学;2011年
8 李玉荣;聚环氧乙烷无胶筛分毛细管电泳分离宽分子量范围DNA片段[D];山东农业大学;2011年
9 王斌;天然胶乳微生物凝固菌种的筛选鉴定以及凝固工艺因素的研究[D];海南大学;2011年
10 李言;橡胶树抗旱、抗寒相关基因克隆及表达分析[D];海南大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘愚;果实成熟过程中乙烯的生成和作用[J];大自然探索;1986年03期
2 钟德钰,杨美薷,吴琦,王伯瑶;人中性粒细胞防御素对龈下微生物的影响[J];华西口腔医学杂志;1997年02期
3 张蔚椿;李汉怀;;胶树预割对产量及其副性状影响的初步研究[J];热带作物研究;1982年01期
4 董建华;蔡世英;莫壮才;;巴西橡胶树皮抗氰呼吸的初步研究——兼讨论与乙烯利刺激胶树增产的关系[J];热带作物研究;1982年02期
5 杨少琼;黎仕剑;;机械创伤和巴西橡胶树的应激乙烯生成及其对排胶量的影响[J];热带作物研究;1982年04期
6 刘松泉;袁燮辉;黄香;李纯青;许来玉;;幼态与老态无性系产量及性状比较的研究[J];热带作物研究;1985年03期
7 范思伟;杨少琼;;乙烯利在橡胶树中的刺激增产机理及其副作用[J];热带作物研究;1986年01期
8 庄伯强;;橡胶树排胶状态与胶乳pH值[J];热带作物研究;1986年04期
9 许闻献;魏小弟;许惠君;冯金桂;潘翠凤;;乙烯和乙炔刺激橡胶树排胶的某些生理特牲[J];热带作物研究;1987年01期
10 范思伟;杨少琼;;巴西橡胶的乙烯生理学[J];热带作物研究;1991年03期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 蒋菊生;周钟毓;;世纪之交的我国天然橡胶科技发展[A];科技进步与学科发展——“科学技术面向新世纪”学术年会论文集[C];1998年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谭海燕,吴继林;天然橡胶溯源[J];植物杂志;1997年02期
2 林梅馨,杨汉金;零上低温橡胶树细胞超微结构的变化[J];厦门大学学报(自然科学版);1988年03期
3 钟洪枢;;巴西橡胶树的几个生理问题[J];植物生理学通讯;1959年01期
4 邓柳红,肖苏生,罗明武,张春发;巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)微管相关蛋白全长cDNA克隆及表达分析[J];热带亚热带植物学报;2005年06期
5 陈振端;;巴西橡胶小孢子的发生和雄配子体的发育[J];武夷科学;1986年06期
6 刘乃见;;巴西橡胶树[J];生物学通报;1957年07期
7 林梅馨,杨汉金;零上低温对巴西橡胶树、小粒种咖啡线粒体结构功能的影响[J];厦门大学学报(自然科学版);1993年04期
8 张治礼;苏火生;李维国;;一个巴西橡胶树钙调素基因假基因的识别[J];云南植物研究;2008年03期
9 刘世彪,林位夫,郝秉中,吴继林,胡正海;巴西橡胶树嫁接接合区接穗和砧木径向生长差异的研究[J];西北植物学报;2003年07期
10 区晋汉;;橡胶树在海南季风热带区的适应性[J];生态科学;1983年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王立丰;田维敏;;白粉病和衰老对巴西橡胶树叶片线粒体结构和功能的影响[A];第九届全国植物结构与生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2010年
2 刘先宝;蔡吉苗;高宏华;潘羡心;彭建华;张科立;李超萍;陈瑶;时涛;黄贵修;;巴西橡胶树棒孢霉落叶病及其鉴定[A];生物入侵与生态安全——“第一届全国生物入侵学术研讨会”论文摘要集[C];2007年
3 杨署光;陈月异;史敏晶;田维敏;;茉莉酸信号途径与天然橡胶生产[A];第九届全国植物结构与生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2010年
4 李惠波;周堂英;;橡胶树新品种云研77-2和云研77-4的细胞学鉴定及育种历程总结[A];云南省热带作物学会第七次代表大会暨2009年学术年会会议材料[C];2009年
5 张欣;张贺;蒲金基;漆艳香;谢艺贤;;一种新的巴西橡胶树棒孢霉落叶病菌产孢方法——纸片法[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
6 胡彦师;曾霞;黄华孙;方家林;安泽伟;;橡胶树新种质主要性状鉴定评价研究报告——1994年定植大田新种质鉴定评价[A];中国热带作物学会2005年学术(青年学术)研讨会论文集[C];2005年
7 史敏晶;田维敏;;巴西橡胶树乳管伤口堵塞物形成机制的研究[A];第九届全国植物结构与生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2010年
8 谢艺贤;张欣;蒲金基;漆艳香;张辉强;;巴西橡胶树棒孢霉落叶病病原菌生物学特性研究[A];中国植物病理学会2007年学术年会论文集[C];2007年
9 刘世彪;林位夫;郝秉中;吴继林;胡正海;;巴西橡胶树嫁接接合区接穗和砧木径向生长差异的研究[A];中国植物学会七十周年年会论文摘要汇编(1933—2003)[C];2003年
10 夏晗;万书波;翟晓霏;赵传志;王兴军;;花生开花相关基因的克隆及表达研究[A];中国作物学会50周年庆祝会暨2011年学术年会论文集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前5条
1 含普;科技出精品质量铸名牌[N];中国质量报;2002年
2 张秀春 戴鹏;“洋奶”逐鹿华夏 “三元”谋图抗争[N];农民日报;2001年
3 广西农垦集团公司董事长 刘刚;垦歌嘹亮映八桂 勇立潮头竞风流[N];农民日报;2011年
4 祝捷 李乾孙;原油到天然橡胶的价格传导[N];期货日报;2011年
5 本报记者 操秀英;黄翠芬:“好人”迹远只留香[N];科技日报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张桂和;巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)乙烯受体基因(etr1)的克隆及表达分析[D];湖南农业大学;2002年
2 彭世清;巴西橡胶树43KD橡胶粒子膜蛋白cDNA的克隆及表达[D];华南热带农业大学;2001年
3 谭德冠;巴西橡胶树体胚发生的改良及乳管分化研究[D];海南大学;2011年
4 张云霞;巴西橡胶树HbMyb1调控基因的克隆及表达[D];华南热带农业大学;2005年
5 邓柳红;巴西橡胶树胶乳特异表达基因分离与克隆[D];华南热带农业大学;2004年
6 吴坤鑫;巴西橡胶树死皮机制的研究[D];华南热带农业大学;2005年
7 刘晓妹;巴西橡胶树棒孢霉落叶病病菌MAPK基因(CCK1)和毒素基因(ct)克隆与功能鉴定[D];海南大学;2012年
8 魏源文;乙烯利调控甘蔗基因的差异表达及甘蔗乙烯受体基因Sc-ERS的克隆研究[D];广西大学;2007年
9 田维敏;树木营养贮藏蛋白质的细胞学、生物化学和生物学功能的研究[D];西北大学;2002年
10 李辉亮;橡胶树自根幼态无性系与其供体(老态无性系)差异的分子基础研究[D];海南大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 鲁慧中;巴西橡胶树硫氧还蛋白基因HbTRX的克隆与表达分析[D];海南大学;2010年
2 祝建顺;巴西橡胶树HbEBP1基因表达及其功能研究[D];海南大学;2010年
3 王亚丽;巴西橡胶树体外体细胞胚发育的细胞学和组织学研究[D];华南热带农业大学;2004年
4 庄海燕;巴西橡胶树水通道蛋白基因cDNA的克隆及其在乙烯利刺激下表达的初步分析[D];西北农林科技大学;2010年
5 傅湘辉;巴西橡胶树死皮相关基因Hbf的克隆及表达[D];华南热带农业大学;2001年
6 史敏晶;外源茉莉酸的移动与巴西橡胶树次生乳管分化的研究[D];华南热带农业大学;2004年
7 苏文潘;橡胶树遗传转化的研究[D];华南热带农业大学;2005年
8 王秋枫;人酪氨酸酶相关蛋白-2的cDNA克隆及表达[D];第四军医大学;2002年
9 王洋;蜡梅expansin基因的克隆及表达载体的构建[D];西南大学;2006年
10 彭丽婵;兔IFRG基因的克隆及表达分析[D];安徽大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026