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应用DNA分子标记鉴定超级杂交水稻组合及其纯度的研究

辛业芸  
【摘要】: 分子标记是随分子生物学和生物技术的迅速发展而发展起来的一类新的较为理想的遗传标记。与形态标记、细胞学标记和生化标记三类遗传标记技术比较,它具有独特的优点。目前最常用的分子标记技术主要有RFLP、RAPD、SSR、AFLP等。分子标记技术在植物学研究中得到了广泛的应用,在植物分类学及遗传多样性、种质资源保护、遗传图谱的建立、基因定位与辅助选择育种等研究方面均取得较好的应用效果。研究显示,应用DNA分子标记鉴定品种真伪和纯度具有准确可靠、成本较低等特点,正成为品种鉴定的发展趋势。它可为经营者杜绝伪劣种子上市和育种者品种权益的保护提供有效的法律依据。 本研究在于应用先进的SSR分子标记技术对目前我国杂交水稻领域取得重大和最新进展的超级杂交稻先锋和苗头组合进行鉴定。研究目标包括:(1)鉴别参与研究的5个杂交稻组合及其9个亲本;(2)通过所筛选的分布于水稻12条染色体上多态性好的24对引物,提供一套可用于鉴定这些杂交稻组合及其亲本的标准图谱;(3)找到一种有效而简单的方法用于杂交稻种子的纯度鉴定。 本研究通过SSR分子标记技术分析进行超级杂交稻先锋和苗头组合的鉴定,获得以下结果: (1)对分布于水稻1-12号染色体的144对SSR引物进行了筛选,有47对能够在实验材料中显示较好的多态性通过,占检测引物的32.6%。 (2)在实验的引物中,筛选到RM337与RM154呈现丰富多态性,可将供试的材料一一加以鉴别。 (3)对于水稻的每一条染色体,各筛选了两条产生多态性的引物共24对,平均可扩增3.25条带,并提供了它们作为鉴定参考的图谱。 (4)通过杂种表现为父母本互补带型的特点,找到了在杂交稻组合及其亲本间具有多态性的引物,以及筛选针对特定组合产生多态性的特异引物,进而针 对杂交稻不同的纯度问题设计了鉴定方法。 门)通过改进获得一种酸碱中和提取 DNA的新方法,简单/快捷,可有效实 施鉴定杂交稻组合和亲本及其纯度的工作。 本研究对四个问做了讨论: 门)SSR标记分析技术作为杂交水稻组合及其亲本的鉴定手段,是十分理想 的品种鉴定的分子标记方法。 (2)研究中使用到的酸碱快速提取 DNA的方法,具有快速、经济的效果和 很好的应用前景。 (3)由于实验条件和所选引物的限制,难以找到能够区分931与0293两 个亲本材料的引物。 (4)实验凝胶电泳和染色采用2%的琼脂凝胶100-120伏八m电压电泳,随 后进行2.5%EB染色,可以显示出良好的扩增产物带型。 本研究所获得的结果对于新育成的超级杂交稻组合及其纯度的鉴定,以及为 知识产权的保护可以提供具有司法效力的技术支持。


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