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《湖南农业大学》 2004年
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草鱼病原菌三元融合子构建及生物学特性研究

陈光荣  
【摘要】:采用细胞融合技术首次构建草鱼烂鳃病、赤皮病和肠炎病的病原菌融合子。应用多种经典检测方法对融合子的形态、构造、生理生化特性、致病性、抗原性和DNA同源性展开深入研究,以揭示融合子生物学特性的遗传规律。建立多元细胞融合技术,为研制鱼类细胞融合疫苗,创造有多种价值的益生菌等优良菌种资源提供科学依据。 应用定性和定量药物敏感性试验与诱变相结合,筛选出荧光假单细胞56-12-10菌株的遗传标记为链霉素抗性,二元融合子AM-1菌株的遗传标记为环丙沙星抗性。在这两种细菌原生质体融合试验中,选择培养基中链霉素的应用浓度为300Iu/ml,环丙沙星应用浓度为100Iu/ml。 在酶解温度37℃下,选出最适酶解时间为60min,最适溶菌酶浓度为5mg/ml。以PEG为促融剂的条件下,荧光假单细胞56-12-10菌株与二元融合子AM-1菌株的原生质体进行了融合,56-12-10菌株的原生质体形成率为81.6%,原生质体再生率19.8%,AM-1菌株的原生质体形成率为79.2%,原生质体再生率为8.2%,初筛的原生质体融合率为6‰,点种100个初筛融合子菌落在双抗培养基上连续传代10次,得到1个稳定的融合子菌落,其稳定率为1%;同时制得三者的原生质体并悬浮,先取其中58-20-9菌株、G_4菌株的原生质体进行融合,再将56-12-10菌株的原生质体与此二元融合原生质体液混匀并进行第二次融合,经单抗选择培养基上的筛选率约为3.5‰,而经过连续传代10次后,共得到两个菌株,其中一个菌株为特殊变异株,另一为稳定三元融合子。两种方法均可获得相同的稳定三元融合子,后者更为快捷。 筛选的融合子菌株菌体短杆状,近于AM-1亲本株,平均长轴4.52μm,平均短轴0.75μm,平均体积1.33μm~3,革兰氏阴性,有鞭毛,运动,巨大菌落圆形,表面光滑、湿润,半透明,边缘整齐。对融合子菌株进行酶类性状及生理生化鉴定,其介于三原始亲本菌株之间。 用融合子菌株对当年健康草鱼种进行人工感染攻毒,说明融合子菌株也具有致病性,进一步剖检病死鱼,发现由融合菌株攻毒的草鱼种具有肠炎病、烂鳃病及赤皮病三种疾病的部分症状。对融合菌株进行抗原性研究,结果表明,受融合子菌株免疫保护的草鱼种注射56-12-10菌株、AM-1菌株及三原始亲本,其免疫保护率分别达64.9%、68.0%、62.5%,抗体效价最高达1:256和1:512。对融合子及其亲本的DNA含量进行测定及琼脂糖凝胶电泳分析,融合子的DNA含量明显高于任一亲本。至于基因具体整合及表达情况,有待于进一步试验。
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S943

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【引证文献】
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1 孙正茂;枯草芽孢杆菌和生孢噬纤维菌融合子的构建及其生物学特性研究[D];湖南农业大学;2006年
【参考文献】
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1 许燕滨,江霞;高效含氯有机化合物降解工程菌的构建研究[J];重庆环境科学;2001年02期
2 陈光荣,肖克宇,邓时铭;鱼用疫苗基因工程技术及其商品化初探[J];北京水产;2003年03期
3 裘娟萍,王普,沈寅初;虾青素高产菌种的选育[J];工业微生物;2001年02期
4 程骥,洪文荣,苏建章,叶荔榕;黑暗链霉菌与卡那链霉菌原生质体融合研究[J];福州大学学报(自然科学版);2003年01期
5 章怀云,萧克宇,陈韬,萧调义,杨四秀,何灵;外源DNA处理的草鱼对草鱼出血病毒的抗性观察[J];湖南农业大学学报;1997年02期
6 吴孔兴,黄青云,丘家军;禽巴氏杆菌大肠杆菌融合二联弱毒菌株F_4的培育[J];华南农业大学学报;2002年01期
7 刘录,沈秋英,孔继兰;跨界融合子处理含酚废水的实验研究[J];环境保护科学;2003年04期
8 程树培,邓良伟,崔益斌;光合细菌与酵母原生质体融合子连续发酵豆制品废水研究[J];环境科学学报;1997年03期
9 储卫华,陆承平;鱼用基因工程疫苗研究与应用[J];海洋科学;2003年11期
10 唐宝英,朱晓慧,刘佳;硅酸盐细菌和苏云金芽孢杆菌原生质体融合[J];生物技术;1998年05期
【共引文献】
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1 李卓佳,郭志勋,张汉华,杨小立,杨莺莺,陈康德,贾晓平;斑节对虾养殖池塘藻-菌关系初探[J];中国水产科学;2003年03期
2 仪宏,张华峰,朱文众,曾远智;维生素C生产技术[J];中国食品添加剂;2003年06期
3 甄卫军,张石峰,曾宪贤;高产谷氨酸菌选育研究进展[J];新疆大学学报(自然科学版);2002年02期
4 彭勇宜;鱼类细胞融合[J];益阳师专学报;2002年03期
5 余健秀,李建华,庞义;芽孢杆菌原生质体融合技术[J];生物技术;2000年03期
6 陈宁,赵丽丽,张克旭;L-谷氨酸温度敏感突变株的选育[J];生物技术通讯;2002年02期
7 王菲,张克旭,宋文军,陈宁;应用原生质体融合技术选育L-异亮氨酸生产菌[J];天津科技大学学报;2004年01期
8 张志光,李东屏,邹寿长,方芳;丝状真菌原生质体技术的研究(Ⅷ)——渗透压稳定剂对原生质体的影响[J];湖南师范大学自然科学学报;1998年02期
9 王彦霞,王海波;作物育种技术的发展、进步及存在的问题[J];河北农业科学;2001年02期
10 赵丽丽,陈宁,熊明勇,张克旭;原生质体诱变选育L-缬氨酸生产菌的研究[J];食品与发酵工业;2002年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李海雷;孙宏春;张奇志;王文亮;孙守义;王守经;阎安泉;李志国;;利用细菌L-W降解有机磷农药MP的研究[A];中国作物学会2007年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2007年
2 梁飞龙;刘永;邓陈茂;毛勇;;广东雷州流沙湾养殖企鹅珍珠贝多毛类寄生虫病的调查[A];中国海洋学会2007年学术年会论文集(下册)[C];2007年
3 刘永翔;刘作易;;戴氏绿僵菌原生质体的形成及再生[A];生命科学与微生物专辑[C];2004年
4 孙凯;陈威;管小梅;熊伟;吴玲;谢荣庆;;细胞工程在环境治理中的应用[A];2007中国环境科学学会学术年会优秀论文集(下卷)[C];2007年
5 王根才;陈绍军;白艳红;李莉;王梅英;;超高压处理对冷却肉抑菌效果的影响[A];福建省农业工程学会2006年学术年会论文集[C];2006年
6 张广志;杨合同;李纪顺;陈凯;扈进东;黄玉杰;;褐球固氮菌和荧光假单胞菌原生质体制备条件的研究[A];山东农业微生物技术学术研讨会论文集[C];2006年
7 黄玉杰;杨合同;;植物病害生物防治菌的改良技术及产业化[A];山东农业微生物技术学术研讨会论文集[C];2006年
8 朱明恩;;潍坊地区仔猪黄痢大肠杆菌的分离鉴定[A];山东农业微生物技术学术研讨会论文集[C];2006年
9 金天明;武迎红;佟庆彬;高丰;;东北虎巴氏杆菌病的病原分离鉴定及耐药性实验[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会论文集[C];2005年
10 陆龙喜;时连根;;真菌原生质体的融合及其应用[A];中国蚕学会第三届青年学术研讨会暨浙江省第二届青年学术论坛——蚕桑分论坛论文集(上册)[C];2001年
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1 宋文军;L-异亮氨酸高产菌的选育及其发酵条件研究[D];天津科技大学;2004年
2 顾瑞霞;乳酸菌胞外多糖生物合成及生理功能特性的研究[D];东北农业大学;2000年
3 王宏田;牙鲆免疫系统和抗病力的研究[D];中国科学院海洋研究所;2000年
4 王桂琴;核心蛋白聚糖DECORIN在肝纤维化形成机制中的作用[D];第二军医大学;2000年
5 吴艳涛;新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因和表达该基因的重组鸡痘病毒[D];扬州大学;2000年
6 冯晓勤;基因重组 人FasAD多肽的研制及其对移植物抗宿主反应的免疫抑制效应初探[D];第一军医大学;2000年
7 文维延;脂多糖交叉表位模拟肽的研究[D];第一军医大学;2000年
8 张军科;樱桃(Prunus mahaleb L.)PGIP基因及其启动子克隆[D];西北农林科技大学;2000年
9 童德文;苦马豆素—BSA的合成及其免疫原性研究[D];西北农林科技大学;2000年
10 傅启高;绍兴鸭优良产蛋性能的内分泌及分子生物学机制研究[D];南京农业大学;2000年
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1 吴帅;酵母菌株与发酵度对低浓啤酒风味的影响[D];山东农业大学;2004年
2 张征峥;白细胞介素15基因克隆、改型及其在NCI-H446细胞中的表达[D];河北医科大学;2004年
3 魏明宝;构建蒽高效降解遗传重组菌的研究[D];武汉大学;2004年
4 董悦涵;米多霉素产生菌的诱变育种和原生质体的融合研究[D];浙江大学;2005年
5 符史杭;2003-2004年海南省人工养殖虎纹蛙主要细菌性传染病的流行情况调查[D];南京农业大学;2005年
6 薛军侠;酿酒酵母的筛选鉴定及耐受性初步研究[D];西北农林科技大学;2007年
7 邢蕾;平菇原生质体再生及无性变异株的初筛[D];河北农业大学;2008年
8 徐红星;银杏内生链霉菌HG2393的鉴定及其对小菜蛾的生物活性研究[D];浙江大学;2005年
9 孙冬雪;宁康霉素产生菌BAC-9912的诱变育种及培养条件的研究[D];东北师范大学;2005年
10 彭勇宜;徽束激光细胞融合的研究[D];广西大学;2001年
【同被引文献】
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1 刘洁,李宪臻,高培基;纤维素酶活力测定方法评述[J];工业微生物;1994年04期
2 粟学俐,贺飞;纤维素酶水解纤维素还原糖的测定[J];湖北化工;1999年01期
3 赵东海;饲料蛋白水平对鳜鱼实验种群胃肠道消化酶活性的影响[J];河北渔业;2004年02期
4 宋颖琦,刘睿倩,杨谦,宋金柱,杜金哲;纤维素降解菌的筛选及其降解特性的研究[J];哈尔滨工业大学学报;2002年02期
5 林炜铁;谭丰慧;姚汝华;陈连就;;酵母细胞原生质体拆合技术的研究 Ⅰ.K氏酵母原生质体再生和拆分的研究[J];华南理工大学学报(自然科学版);1991年01期
6 钟蕾,肖克宇,周梦娇;肠型点状产气单胞菌和鱼害粘球菌原生质体融合的耐药性遗传标记的选择[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2002年02期
7 董亮,赵长新,郭建华,李安杰;利用大米细糠生产饲料蛋白质的研究[J];粮食与饲料工业;2004年11期
8 葛岚,程树培;跨界原生质体融合产物细胞遗传物质整合过程中DNA含量变化[J];南京大学学报(自然科学版);1997年03期
9 王怡平,荚荣,陈伟元,凌芸,徐怀恕;球形红假单胞菌和荚膜红假单胞菌的原生质体融合[J];青岛海洋大学学报(自然科学版);2000年02期
10 吴伟,余晓丽,李咏梅,瞿建宏;诺卡氏菌与假丝酵母的跨界融合及对退化养殖生态的修复[J];水产学报;2002年01期
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1 庞良伟;纤维素分解菌的混合培养及互生特性研究[D];四川大学;2003年
【二级参考文献】
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1 程东升,邹丽,孙延军;电场诱导细胞融合装置的技术参数设计[J];东北林业大学学报;1992年06期
2 郭爱莲,孙先锋,朱宏莉,郎惠云;He-Ne激光、紫外线诱变氧化亚铁硫杆菌及耐砷菌株的选育[J];光子学报;1999年08期
3 钱君龙,府灵敏;用过硫酸盐氧化法同时测定水中的总氮和总磷[J];环境科学;1987年01期
4 刘双江,孙燕,岑运华,杨惠芳;采用光合细菌控制水体中亚硝酸盐的研究[J];环境科学;1995年06期
5 程树培,崔益斌,童中华,马文漪,丁树荣;酿酒酵母与热带假丝酵母融合子多功能性研究[J];环境污染与防治;1995年01期
6 程树培,崔益斌,王玉水,葛岚,邓良伟;光合细菌与酵母跨界融合(杂合)子发酵味精废水研究[J];环境科学学报;1996年01期
7 许兵;李秋芬;刘嘉蓉;徐怀恕;石杰;;海洋光合细菌的分离鉴定及其生长条件的研究[J];海洋湖沼通报;1993年03期
8 孙舰军,丁美丽;改善虾池环境增强中国对虾抗病力的研究[J];海洋科学;1999年01期
9 魏以和,钟康年,王军;生物技术在矿物工程中的应用[J];国外金属矿选矿;1996年01期
10 文铁桥,赵学慧;克鲁维酵母与酿酒酵母属间原生质体融合构建高温酵母菌株[J];菌物系统;1999年01期
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1 施庆利,罗信昌;RAPD技术在木耳属杂交种及原生质体融合子鉴定分析中的应用[J];中国食用菌;1994年06期
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4 刘国振,刘振岳,贾建航,刘丽娟,泰立芳,李小兵,朱衡,朱立煌;用RAPD方法对平菇、香菇属间原生质体融合子的研究[J];遗传;1995年05期
5 王守刚,沈阿林,王永岐,吕爱英;利用细胞电融合技术选育的融合子的解磷解钾性能[J];河南农业科学;2004年04期
6 张修军;利用同源菌株融合改良农抗5102产生菌——吸水链霉菌应城变种的研究[J];植物病理学报;1998年02期
7 贺建超,霍奕;侧耳属种间原生质体融合的研究[J];食用菌;1995年02期
8 刘振岳,董毓琨,泰立芳,庞国新,赵世民,徐金相;平菇与香菇属间原生质体融合的研究[J];遗传学报;1991年04期
9 曾大兴,梁宗琦,刘爱英;丝状真菌的属间原生质体融合研究进展[J];贵州农业科学;1994年03期
10 王淑珍,白晨,范俊,高雁,扬家峰,扬英杰;灵芝与糙皮侧耳原生质体融合子基因组RAPD分析[J];食用菌学报;2003年01期
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1 王世锋;庄惠如;王明兹;施巧琴;陈必链;吴松刚;;异养化融合子FSYH866色素薄层层析及稳定性研究[A];2004年全国生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
2 雷爱莹;;微生物原生质体融合技术在净化水质上的应用[A];广西水产研究所论文集(2001—2005)[C];2006年
3 王锐萍;李干蓉;;嗜热菌和假单孢菌及其融合子质粒DNA的RAPD分析[A];海南生物技术研究与发展研讨会论文集[C];2006年
4 王明兹;施巧琴;吴松刚;;微藻与酵母电融合选育异养化融合子FSYH866[A];2004年全国生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
5 张嫒莉;孟威;刘艳;闫国栋;;蛹虫草原生质体融合高产菌株的筛选[A];吉林省第六届生命科学大型学术报告会论文集[C];2008年
6 周洪英;刘启燕;边银丙;;灭活原生质体融合法在蛹虫草优良菌株选育中的应用[A];首届全国食用菌中青年专家学术交流会论文集[C];2006年
7 龙淼;逄晓阳;邢欣;刘国文;朱连勤;王哲;;耐酸性反刍兽月形单胞菌工程菌的构建及鉴定[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会2009年学术研讨会论文集[C];2009年
8 孙凯;陈威;管小梅;熊伟;吴玲;谢荣庆;;细胞工程在环境治理中的应用[A];2007中国环境科学学会学术年会优秀论文集(下卷)[C];2007年
9 吴松刚;;工业微生物育种在工业生化中的应用成就[A];2004年全国生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
10 黄玉杰;杨合同;;植物病害生物防治菌的改良技术及产业化[A];山东农业微生物技术学术研讨会论文集[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前5条
1 国泰君安证券公司 侯继雄;中国石化要发新股?[N];中国证券报;2004年
2 杨升;金鱼病防治五法[N];医药养生保健报;2004年
3 高光明;鱼类烂鳃病的诊断及治疗[N];中国渔业报;2004年
4 本报记者 尹春芙;“菌物世界”的拓荒者[N];吉林日报;2005年
5 古家齐;常见鱼病[N];山东科技报;2003年
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1 谢海侠;柱状黄杆菌毒力相关因子的研究[D];中国科学院研究生院(水生生物研究所);2005年
2 林炜铁;酵母细胞原生质体拆合技术的研究[D];华南理工大学;1991年
3 张正波;除草微生物禾长蠕孢的菌种改良与制剂的研究[D];中国农业科学院;2007年
4 郑凤娥;纳他霉素产生菌诱变、种内原生质体融合及发酵条件研究[D];沈阳农业大学;2008年
5 王媛媛;多功能生防根瘤菌工程菌株的构建[D];沈阳农业大学;2007年
6 龙淼;耐酸性反刍兽月形单胞菌构建及对瘤胃微生物发酵的影响[D];吉林大学;2009年
7 陈娟;发酵型蜂蜜桑椹酒的酿造技术及品质特征研究[D];西南大学;2009年
8 徐德峰;高活力酸性蛋白酶曲霉融合子的选育及其在酱油发酵中的初步应用[D];华南理工大学;2010年
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10 田小群;红发夫酵母(Phaffia rhodozyma)的诱变和原生质体融合及发酵优化研究[D];华南理工大学;2003年
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1 陈光荣;草鱼病原菌三元融合子构建及生物学特性研究[D];湖南农业大学;2004年
2 钟蕾;肠型点状气单胞菌和鱼害粘球菌融合子的构建及其特性研究[D];湖南农业大学;2002年
3 单志文;应用原生质体技术筛选高产耐碱性的脂肪酶菌株的试验[D];浙江工业大学;2001年
4 林树梅;白地霉2.498与白腐真菌5.776原生质体融合[D];沈阳农业大学;2004年
5 眭顺照;油菜Oleosin基因克隆及其与GUS基因融合子表达载体的构建[D];西南农业大学;2003年
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7 何培彦;酿酒酵母亲株无损伤融合子的构建和RAPD鉴定[D];浙江大学;2006年
8 唐洁;利用原生质体融合技术进行米曲霉新菌株的选育[D];西华大学;2007年
9 徐晴雨;多杀菌素高产菌株的诱变育种[D];华中农业大学;2007年
10 周一琴;原生质体电融合法构建嗜杀猕猴桃酒酵母[D];西北农林科技大学;2008年
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