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《湖南农业大学》 2005年
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葡萄种质资源RAPD分析及亲缘关系研究

黄远飞  
【摘要】:葡萄在长期的进化和栽培历史中,由于本身的变异、自然杂交、栽培环境不同等形成了不同的品种类型,使得葡萄的分类鉴定难度加大,命名混乱。本试验以欧亚、欧美杂种部分品种及砧木品种为材料,应用RAPD分子标记技术,对53个葡萄样品的遗传多样性进行了随机扩增多态性DNA(RAPD)研究,通过NTSYSpc2.10e软件对RAPD的扩增谱带进行分析,进行葡萄品种的分子鉴定和分类研究,探讨葡萄品种之间的亲缘关系。其主要的试验结果如下: 1.通过采用CTAB、SDS和高盐低PH法三种DNA提取方法提取葡萄幼嫩叶片DNA,分别对其进行紫外吸收检测、电泳检测和RAPD检测,结果表明:三种方法DNA完整性好,RAPD扩增带清晰,A260/A280的值在1.7-2.0之间,符合RAPD反应的要求,都可用于葡萄基因组DNA提取。其中以CTAB法提取的DNA质量最好,本试验选用CTAB法进行。 2.通过对模板DNA、引物、Taq DNA聚合酶、dNTP和Mg~(2+)浓度的优化试验及对PCR反应程序的筛选,确定了本研究的适宜反应体系和反应程序。反应体系:25ul反应体系中,含2.5ul 10×buffer(PH=8.8),50ngDNA,0.4umol/L随机引物,200umol/L dNTP(dATP、dGTP、dCTP、dTTP),1U Taq DNA聚合酶、2.0mM Mg~(2+)以及纯净水15.5ul。反应程序为:94℃预变性2min;94℃变性1min;36℃退火1min;72℃延伸2min;39个循环;72℃延伸5min;4℃保温。 3.利用对280个引物进行筛选所得到的33个引物对53个葡萄样品进行RAPD分析,扩增片段大小为300-3000bp,共检测到325个位点,其中275个是多态位点,多态位点百分比达到84.6%。平均每个引物获得9.85个扩增位点,其中具有多态性的位点为8.33个。各品种间多态位点百分比变化范围为58.3-100.0%,其中多态位点百分比最高的是引物S60、S514、S1399、S1478、S2122、S510、S1468、S6和S284,最低的是引物S216。这说明了本试验所用的53份材料的遗传多样性很高。 4.通过对两个同名高妻及其亲本的遗传距离和指纹图谱分析,并结合形态学分析,从分子水平上对其两个品种进行区分,从而为纠正目前品种命名杂乱的现状提供依据。
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S663.1

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【引证文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
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2 宋婉,续九如;果树种质资源鉴定及 DNA 指纹图谱应用研究进展[J];北京林业大学学报;2000年01期
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5 彭海;张静;张梁;陈禅友;;长豇豆品种ISSR-PCR最佳退火温度的筛选[J];长江蔬菜;2007年09期
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8 王西平,王跃进,张剑侠,徐炎,杨克强;葡萄早熟芽变品种“早生高墨”的RAPD分析[J];西北植物学报;2003年03期
9 房玉林;宋士任;张艳芳;何建林;陈书霞;;不同品种葡萄抗霜霉病特性与叶片POD、PPO活性关系的研究[J];西北植物学报;2007年02期
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8 张淑静;葡萄SSR反应体系的建立及遗传多样性分析[D];河北农业大学;2008年
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10 贾丽;福建省(木奈)、李、桃种质资源的ISSR分子分析[D];福建农林大学;2009年
【二级引证文献】
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8 杨文涛;葡萄品种多 引种要辨别[N];河南科技报;2009年
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1 黄远飞;葡萄种质资源RAPD分析及亲缘关系研究[D];湖南农业大学;2005年
2 夏惠;葡萄品种遗传多样性的RAPD分析[D];西北农林科技大学;2005年
3 王晶晶;南疆八个葡萄品种(系)形态学及RAPD亲缘关系分析[D];塔里木大学;2010年
4 朱海生;樱桃番茄种质资源遗传多样性及杂交种纯度鉴定RAPD分析[D];福建农林大学;2005年
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6 杨新国;桃(Prunus. Persica(L). Bastch)种质资源的鉴定及亲缘关系的RAPD分析[D];西北农林科技大学;2001年
7 石开明;利用RAPD、ISSR标记分析鄂西地区柚种质资源遗传多样性[D];华中农业大学;2004年
8 鲁云风;南阳黄牛种质资源遗传分析与保护策略[D];河南农业大学;2005年
9 金钟范;膜荚黄芪亲缘关系RAPD分析及有效成分的比较研究[D];延边大学;2008年
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