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《湖南农业大学》 2005年
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石刁柏多倍体诱导与辐射诱变的分子鉴定

胡雄贵  
【摘要】:本文以石刁柏品种UC800为材料,建立了石刁柏的组织培养体系;用秋水仙碱处理试管苗,进行多倍体诱导和鉴定;用愈伤组织进行辐射处理,并从细胞与分子水平探索其遗传变异的机理,其主要结果概述如下: 1.在石刁柏组织培养中,愈伤组织的诱导以茎段为外植体,MS+4mg/L NAA为培养基,诱导率达100%。分化以MS+2mg/L 6-BA+1mg/L KT的培养基效果最好,分化率达70%。试管苗的生根以MS+2mg/L IBA+2%蔗糖的培养基效果最好,生根率达60%。 2.在石刁柏多倍体诱导中,使用不同浓度的秋水仙碱,采用涂抹法和浸泡法处理试管苗,并设不同的处理时间,结果以0.08%的秋水仙碱与涂抹法处理72小时效果最好,其诱导率可达94%。对多倍体进行染色体鉴定,涂抹法染色体加倍率可达到96.1%,浸泡法为84.4%。 3.以~(60)Co-γ作为辐射源,对石刁柏愈伤组织进行5个不同剂量的辐射诱变,经细胞学鉴定和RAPD分析,不同辐射剂量其效果有明显差异。 (1) 细胞学鉴定染色体结构变异,辐射剂量为1Gy,5Gy,10Gy,20Gy的材料变异率分别为9.4%,36.5%,31.2%,48.2%。 (2) 在石刁柏辐射品种的RAPD鉴定中,从100个随机引物中筛选出32个有效引物,共扩增出184条DNA片断,其中25条具有遗传多态性,利用statistica软件计算出遗传离距为0.912-0.983。平均距离为0.952,可见遗传距离较近,这与其来自一个同品种的辐射有关。 (3) 遗传距离结果显示不同辐射剂量石刁柏材料的遗传距离与辐射剂量成一定的正比关系,与细胞学鉴定结果相符。
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