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《湖南农业大学》 2005年
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杂交水稻品种鉴定的SNP研究及东乡野生稻两个NBS序列的分析

毛建军  
【摘要】:我国是世界上稻作面积最大的国家,水稻单产和总产一直位居世界首位。同时我国具备世界上最先进的杂交水稻制种技术,每年有大量的杂交水稻良种从我国输往世界各地。据估计,未来十年至十五年,全球杂交水稻种植面积将达一亿公顷,每年约需杂交水稻种子一百五十万吨至二百万吨,约有一百二十亿至一百六十亿美元的市场空间。为此,建立一种快速、准确的检测杂交水稻品种的方法,选育高产,优质,高抗的杂交水稻品种迫在眉睫、意义重大。 本文简述了杂交水稻的出口状况,假冒伪劣杂交稻种的危害,回顾了各种杂交水稻种子纯度鉴定的方法及其优缺点,东乡野生稻在抗病育种中的利用现状。重点介绍了SNP(单核苷酸多态性)的特点、发现和检测方法,实时荧光PCR、TaqMan探针的原理以及水稻抗病性分子生物学研究进展。 在实验中,我们首先设计引物扩增了水稻核糖体DNA的ITS(内转录间隔区)2区部分序列,通过测序分析,发现各品种单核苷酸多态性位点很少。我们还对一个杂交水稻组合的线粒体cob基因进行了克隆测序,发现存在较丰富的单核苷酸多态性。然后,针对杂交水稻品种威优46cob基因中特异的核苷酸位点设计了TaqMan荧光探针用于威优46的鉴定,该方法是指在PCR反应体系中加入用荧光基团和淬灭基团标记的探针,随着PCR的进行,荧光信号不断增强。这样,根据荧光信号的增加可以定时地监测整个PCR进程,实现了PCR扩增和核酸杂交以及荧光电信号放大检测同步进行的自动化检测。实时荧光PCR技术还具有其它方面的优点:一、不需要PCR后处理,可消除PCR的假阳性污染、大样品量PCR产物检测困难的问题;二、操作全部由仪器完成,实现自动化检测;三、灵敏度高。但由于测序品种太少,荧光探针的特异性不强,实验结果表明:除威优46外,其它品种的荧光信号也有增加。但是,该实验方法在水稻的品种纯度鉴定以及物种的品种品系鉴定中具有重要的借鉴意义。 此外,我们以Oryza rufipogon(普通野生稻)的三个抗病基因NBS(核苷酸结合位点)同源序列AF159884、AY169495和AY169500为模板,设计引物对东乡野生稻基因组进行扩增,将目标片段和载体连接,转化大肠杆菌,然后挑选数
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S511;S511.9

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