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《湖南农业大学》 2005年
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亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因的研究

程天印  
【摘要】:从单雌蜱繁殖群中选出未吸血雌成蜱60只,随机分成两组,一组半饱血,另一组不吸血。分离未吸血和半饱血两状态下的蜱唾液腺。经过总RNA提取,第一链合成、长距离扩增、Ras Ⅰ酶切、添加接头,扣除性杂交和选择性扩增等步骤,分离出差异表达基因的cDNA片段。将第二次扩增产物的纯品插入pGEM T-Easy载体,转化DH5a感受态。通过克隆鉴定和序列测定,获得120个有效片段,其中84个认定为序列表达标签(EST)。RT-PCR分析证实,由文库随机选出的10个片段在吸血的雌成蜱唾液腺表达,未吸血的不表达。 与NCBI数据库的片段进行序列比对,结果如下:文库里的120个片段中,90个找到了具有一定相似性的序列,其中与其他蜱的已知基因具有相似性的片段21个,与按蚊、库蚊、钩虫、奥斯特线虫等其他吸血寄生虫基因有一定相似性的片段19个。在与蜱已知基因有相似性的21个片段中,7片段被认定为EST,其中5个具有Poly(A),2个具有ACGCGGGG;2个既具Poly(A)又具ACGCGGGG(即为全长基因,其中1个已被Genbank接收,登录号为DQ021902)。HaB1和Ha7.7是从上述与蜱已知基因有相似性的EST中筛选而来。 根据HaB1的序列设计出HaB1未知末端扩增引物HaB1-GSP_1和HaB1-GSP_2。用HaB1-GSP_1和UAP扩增由半饱血雌成蜱唾液腺总RNA反转录而成的第一链,HaB1-GSP_2和AUAP做巢式扩增,即得HaB1的未知3’-末端。根据HaB1及其3’-末端序列拼接结果,设计GP_(29)的全长扩增引物HaB1-FLP~+、HaB1-FLP~-,以此扩增cDNA第一链获得新基因GP_(29)(登录号:AY803896)全长。如上设计扩增Ha7.7之5’-端的引物Ha7.7-GSP_1、Ha7.7-GSP_2、Ha7.7-GSP_3和扩增GP_(15)的全长引物Ha7.7-FLP~+、Ha7.7-FLP~-。克隆Ha7.7得其未知部分和全长GP_(15)(登录号:DQ020265)。RT-PCR分析表明:亚洲璃眼蜱成蜱唾液腺只在吸血时表达两基因。
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q969.91

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【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
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8 梁洪雨;灵长类动物脑中特殊类型细胞基因表达情况的研究[D];东北林业大学;2012年
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