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《湖南农业大学》 2006年
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囊胚细胞为媒体转基因鸡的技术研究

谭碧君  
【摘要】:本研究应用阳离子脂质体转染法、显微注射技术,利用携带报告基因(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)的鸡囊胚细胞为供体初步建立了转基因鸡模型,为利用转基因鸡作为生物反应器建立了一个技术平台。取得研究成果如下: 1.鸡囊胚细胞体外培养时,添加10%的胎牛血清,细胞的贴壁率最高;M199、EMDM两种细胞培养液对细胞贴壁率的影响差异不显著;培养时间为24h时细胞的贴壁率最高;细胞贴壁率最高达60%左右。 2.鸡囊胚细胞体外转染时,贴壁细胞与悬浮细胞转染都可获得60%左右细胞的瞬时表达;脂质体量为4μg,质粒DNA量为3μg时,转染白来航鸡原代囊胚细胞的效率最高。 3.对受体种蛋进行显微注射时,种蛋赤道面开窗的孵化率最高,达26.74%;对开窗种蛋采用四种不同材料封口,其中用蛋壳膜加封口胶进行封口的种蛋孵化率最好,达27.08%;未开窗处理的种蛋与开窗处理的种蛋的孵化率有显著差异(p<0.05);开窗处理的种蛋由于破坏了原来的结构,导致孵化率显著降低。其中注射囊胚细胞的种蛋孵化率为28.43%。 4.对转基因鸡的胚胎及一周龄的小鸡进行荧光检测和PCR检测时,观察到弱的绿色荧光,PCR检测也出现了阳性结果。
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S831;Q819

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