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《湖南农业大学》 2006年
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湖南柑橘黄龙病检测及DNA片段克隆

王春梅  
【摘要】:柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing)是由韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter)引起的一种柑橘毁灭性病害,危害轻者可引起树势衰退,产量下降,品质变劣;重者可引起成片柑橘树死亡,对柑橘生产构成严重障碍。湖南与广东、广西接壤,是柑橘黄龙病偶发区。近年来,随全球气温变暖,木虱活动范围扩大,柑橘黄龙病存在潜在威胁,并且在少数柑橘产区已出现柑橘黄龙病的疑似症状,有的甚至出现大片橘树枯死和毁园的现象。为进一步了解柑桔黄龙病的发生情况及传播途径,以便及时采取有效控制措施,杜绝病源传播。本研究于2005年4月至2006年3月对全省柑橘主产区的48份材料进行了PCR检测和IR(Idione Reactio)快速检测,同时进行了PCR片段克隆、测序。 研究结果如下: 1.在前人研究的基础上,对柑橘黄龙病PCR检测技术进行改进,建立了准确、快速、灵敏、稳定、安全的柑桔黄龙病菌PCR检测体系。以夏梢的韧皮部为材料,提取的DNA较稳定,检出率高,假阳性少;筛选的引物对OL1/OL2,特异性强,稳定性好,灵敏度高。 2.自制的PCR产物纯化回收简易过滤柱,具有操作简便、快速、成本低廉、得率和产物纯度较理想、连接效果好等特点,适合一般克隆实验要求,是一种简便实用的PCR产物纯化方法。 3.本试验成功克隆了黄龙病病菌基因中的一段序列,并通过测序和序列分析表明,本研究检测出的柑橘黄龙病与Genbank中基因序号为(AY342001.1)亚洲黄龙病序列同源性为99.8%,属柑橘黄龙病亚洲种中的一员。 4.本研究在国内首次采用IR法快速检测柑橘黄龙病,结果表明,该方法在一定范围内有较高的准确性,是一种快速、简便、费用低廉、容易掌握的快速检测方法,可结合田间症状在柑橘产区进行黄龙病初步筛选检测。 5.通过PCR检测,较全面的掌握了湖南省柑桔黄龙病发生情况。从22个县(市)柑橘产区采样48份,其中检测出柑橘黄龙病16份,主要集中分布在湘南柑橘产区。与上世纪80年代发生情况相比,有向北扩大的趋势,并伴有木虱发生,可能是其主要传播途径。本研究还在湘北岳阳、华容、桃源地区的少数橘园首次检测出柑橘黄龙病,发病品种为琯溪蜜柚,但未见其他品种感病,而且没有发现木虱。据分析,可能从外省黄龙病疫区调进带毒苗木所致。
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S436.66

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
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【参考文献】
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【同被引文献】
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