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《湖南农业大学》 2006年
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油菜抗菌核病蛋白的分离、纯化及鉴定的研究

刘士寻  
【摘要】:油菜抗菌核病研究是油菜抗性育种中的重点课题和难点课题之一,油菜抗菌核病育种途径和方法有很多,但很少有人从蛋白质组角度对油菜进行抗性育种,其主要步骤有以下几步:一,寻找稳定的高抗品种和高感品种;二,在相对抗感品种中寻找特异性蛋白点或带;三,将特异性蛋白带或点进行测序分析,并克隆控制作用的目的基因;四,通过基因工程技术得到转基因油菜;希望能获得稳定和高强度的抗菌核病油菜品种。本论文主要是从事第一步和第二步研究,即寻找抗感材料和找到特异性蛋白点或带,具体做了以下工作并取得相关结果: 1,通过牙签鉴定法对大田盛花期油菜进行鉴定,鉴定出相对抗性较强的湘油15号和1021号,相对抗性较弱的感病品种98C40。 2,用酸碱盐三种典型的缓冲液对湘油15号和98C40进行初处理,通过对菌核菌丝进行的抑制实验和蛋白总浓度的测定,表明用含盐的缓冲液比其他两种效果要好、现象要明显。 3,通过对含盐的四种缓冲液Ta,Tb,Pa和Pb在对油菜植株蛋白分离纯化时,进行了成分、浓度、pH值以及硫酸铵饱和度分级盐析等因素的摸索实验,结果表明用Tb缓冲液在pH值为8.2硫酸铵饱和度为50%时分离条件最佳。 4,用Tb缓冲液对抗病油菜湘油15号和感病油菜98C40进行了蛋白纯化的对比实验,找到了大约在77.5 Kda处有一差异蛋白,在33.5 Kda处也有一差异蛋白。 5,对菌丝蛋白和找到的差异蛋白做了免疫扩散实验,实验结果没有沉淀线产生。
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S565.4

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【参考文献】
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