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《湖南农业大学》 2007年
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菊花再生体系的建立及根癌农杆菌介导DAD1基因转化体系的优化

周涌  
【摘要】: 本研究以菊花品种“国华光娣”为实验材料,建立了菊花再生体系及根癌农杆菌介导的遗传转化体系,并将DAD1基因导入菊花中,以期获得抑制或促进细胞凋亡的菊花新材料。其主要结果概述如下: 1.通过研究不同生长调节剂的浓度配比对菊花愈伤组织、不定芽和根诱导的影响,筛选出诱导愈伤组织、不定芽和根的最佳培养基,优化了菊花再生体系。实验结果表明:菊花叶盘在MS+6-BA(2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)培养基上诱导愈伤组织效果最好。愈伤组织在分化培养基为MS+6-BA(2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)上,分化率可达95%,繁殖系数为2.57。再生芽在1/2MS+NAA(0.2mg/L)培养基上经过9天左右可诱导出根,生根率可达100%。 2.在建立了菊花再生体系的基础上,构建了正反义DAD1基因的表达载体。通过PCR将DAD1基因的cDNA序列从T载体上释放,正反向插入到植物表达载体pWM101中,将其置于35S启动子下游,并采用PCR和酶切验证,获得了在植物中的表达载体。 3.根癌农杆菌介导菊花转化最佳条件的确定。实验结果表明:叶盘预培养1d、OD_(600)=0.6、侵染10分钟、共培养3d和延迟筛选时间2d,菊花遗传转化率最高。 4.转基因菊花的PCR检测。经抗性筛选得到的转基因苗,通过PCR扩增,部分转基因植株中检测出有目的基因DAD1正反义基因的存在,说明已将目的基因成功插入到菊花的基因组中。其中反义转化率为7.1%,正义转化率为14.3%。
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S682.11;Q943.2

【引证文献】
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【同被引文献】
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10 杨国峥;喜树高效再生体系的建立与农杆菌介导的遗传转化研究[D];贵州大学;2007年
【二级引证文献】
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1 侯雨;吴丽爽;王晓萍;;小对叶植株再生及遗传转化体系构建[J];中国农学通报;2010年24期
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1 王静;美洲商陆再生及遗传转化体系的研究[D];南京师范大学;2011年
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7 张树林;;中国菊花研究进展[A];中国菊花研究论文集(1997-2001)[C];2001年
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9 王桂英;;菊花矮化种植法(简报)[A];中国菊花研究论文集(1997-2001)[C];2001年
10 杨际双;远藤元庸;;菊花的遗传转化研究初探[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
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4 记者 胡锐;日本专家长村智司来汴开展菊花科技交流活动[N];开封日报;2010年
5 记者 胡锐;精心筹备 全力办好今年菊花盛会[N];开封日报;2010年
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8 本报记者 朱朝星;菊花走进千万户 百姓生活更美好[N];开封日报;2010年
9 华再清;“菊花老人”的“菊花事业”[N];中国绿色时报;2010年
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10 陈建荣;苎麻木质素合成关键酶CCoAOMT基因分离及遗传转化的研究[D];湖南农业大学;2005年
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9 刘军;菊花再生体系的建立及农杆菌介导绿色荧光蛋白(GFP)基因转化的研究[D];山东农业大学;2004年
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