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重组增效蛋白的广谱增效活性及其若干生物学特性

胡松奇  
【摘要】: 昆虫病毒增效蛋白(enhancin)主要存在于颗粒体病毒(granulovirus,GV)中,能显著提高核型多角体病毒(nuclear polyhedrosis virus,NPV)对昆虫幼虫的感染效果,增强苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)对幼虫的毒力。 粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)颗粒体病毒(TnGV)增效蛋白分子量为104.3kD,含901个氨基酸。在前期研究中,本实验室在大肠杆菌(Escherichia coli)中已成功表达得含TnGV增效蛋白C端818个氨基酸、分子量为96kD的重组蛋白P96,并初步研究了重组蛋白P96的增效活性。在此基础上,本试验拟研究大肠杆菌表达的粉纹夜蛾颗粒体病毒重组增效蛋白P96对多种微生物杀虫剂杀多种害虫的广谱增效活性。结果表明,P96可显著或极显著提高棉铃虫核型多角体病毒、苏云金杆菌和阿维菌素对棉铃虫幼虫的致死率,分别提高169.78%、73.90%和36.04%;对苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒感染甜菜夜蛾幼虫也有明显增效作用。Na_2CO_3溶解的P96对棉铃虫初孵幼虫有一定致死作用。 为对P96具生物活性及其生产应用提供进一步的证据和支撑,本试验基于SDS-PAGE和一系列生物测定研究了P96的若干生物学特性。结果表明:P96在大肠杆菌中表达时形成包涵体较为稳定,但4℃存放3个月后有部分解离;P96包涵体可由Na_2CO_3打开或由棉铃虫5龄幼虫离体中肠液有效溶解;取食1.9×10~5~1.9×10~6OBs/mL P96后,棉铃虫幼虫围食膜上的肠粘蛋白基本降解完全;随P96浓度增加,其增效活性愈强,至6.76×10~5OBs/mL时趋于饱和;金属螯合剂乙二胺四乙酸对P96的增效活性有强烈抑制作用。对重组增效蛋白P96上述生物学特性的了解,为重组增效蛋白P96具生物活性提供了生物测定之外的证据支持,并为其合理生产应用提供了依据。


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