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《湖南农业大学》 2007年
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杜仲和桐粕提取物功能活性研究

王建辉  
【摘要】: 为了人类和动物健康,开发和使用无残留、无污染、无毒副作用的抗生素替代品和抗氧化剂显得日益重要。我国是植物资源大国,植物种类繁多,针对性地对某些植物进行抗氧化性及其抗生素替代的可行性研究具有很强的实用价值。杜仲作为我国重要中草药,因其茎叶富含绿原酸、桃叶珊瑚甙等药用成分;桐粕过95%乙醇回流提取,初步鉴定其富含多酚类物质,两者均是开发天然抗氧化剂的重要来源。本文通过动物饲养、屠宰试验和抗氧化动力学特征研究对杜仲提取物(EUOE)的抗氧化性及其抗生素替代作用进行了探讨;通过分离纯化、药物高通量筛选、体外抗氧化试验及小鼠高血脂造模试验,以体内外试验从生物整体或细胞水平对桐粕活性物质抗氧化性与降血脂作用进行了评价,主要试验结果如下: 试验一杜仲提取物对猪生产性能影响研究 旨以探索杜仲提取物(EUOE)对猪生长性能、胴体品质及肌肉氨基酸含量的影响,试验选用胎次相同、体重相近的42日龄杜×长×大三元杂交猪300头,平均初始重为9.96±0.05kg,随机分成5个处理,每个处理6个重复,每个重复10头猪。试验分成3个阶段,阶段Ⅰ:9.96-20 kg;阶段Ⅱ:20-60 kg;阶段Ⅲ:60-90 kg。试验日粮分别在基础日粮中添加杜仲提取物0.1500,2000,2500 mg/kg或黄霉素12mg/kg(阶段Ⅰ)或8mg/kg(阶段Ⅱ和Ⅲ)。试验结果表明在猪日粮中添加EUOE能一定程度地提高其生长性能,改善猪只免疫水平和抗腹泻能力,影响猪只血液生理生化指标,改善胴体质量和猪肉品质,具体结果如下:1500mg/kgEUOE显著降低阶段Ⅰ和Ⅱ日均腹泻评分(P<0.05),显著提高了阶段Ⅱ猪群日均增重(ADG)(P<0.05),降低了阶段Ⅱ和Ⅲ料重比(F/G)(P<0.05)。EUOE(除2000mg/kg)和黄霉素组均能显著提高试验全期ADG(P<0.05),动物日均采食量存在增加趋势(0.05<P<0.10)。EUOE能显著降低血清尿素氮(SUN)水平(P<0.05),显著提高阶段Ⅱ和Ⅲ血清球蛋白水平(P<0.05)。EUOE1500,2000mg/kg的添加显著提高了猪肌内脂肪含量(P<0.05),其不同添加水平间无显著差异(P>0.05);而黄霉素的添加显著降低了肌内脂肪含量(P<0.05)。黄霉素和EUOE组均能不同程度地降低胴体皮厚(0.05<P<0.10),同时各日粮处理有降低滴水损失,增加眼肌面积、肉色评分和肌肉大理石纹评分的趋势(0.05<P<0.10),且EUOE处理组能显著提高猪肉肌肉总氨基酸和鲜味氨基酸含量(P<0.05)。这表明EUOE能不同程度地改善猪胴体品质和肌肉质量,其中以1500mg/kg添加效果最佳。 试验二EUOE对浓缩饲料氧化动力学影响研究 通过EUOE对猪浓缩饲粮抗油脂过氧化试验研究发现,添加抗氧化剂可以显著降低饲料过氧化值(POV)。饲粮油脂水平越高,POV越高;饲粮油脂水平越高,需添加的抗氧化剂水平也越高;各种抗氧化剂对添加油脂的饲粮均能表现出良好的抗氧化活性,但对猪用浓缩饲料中油脂抗氧化活性仅在前21天表现良好效果,28天后基本无效;根据POV比较各抗氧化剂的抗氧化活性,乙氧基喹啉(I)最好,EUOE的抗氧化活性较低;不同抗氧化剂及其添加水平氧化动力学方程各有不同,其中不同EUOE添加水平及油脂添加水平各组氧化反应均以一级反应为主。 试验三桐粕活性成分的提取、分离与结构鉴定 综合利用NKA大孔树脂和聚酰胺层析分离,对桐粕95%乙醇提取物过NKA大孔树脂的50%乙醇洗脱部分继续追踪分离活性成分,经高效液相色谱确定化合物纯度后,结合其理化性质,并通过UV、~1H-NMR、~(13)C-NMR、DEPT等光谱解析,证明晶体为双四氢呋喃类木脂素,化学名称为(±)3,3`-bisdemethyl pinoresinol,即(±)3,3`-双去甲基松脂醇,该物质在桐粕中第一次发现。 试验四桐粕提取物抗肿瘤与降糖降脂活性筛选 对桐粕提取物各组分进行高通量筛选发现,70%乙醇洗脱部分在浓度为50μl/ml和10μl/ml时,对28SC肿瘤细胞生长有抑制作用;水洗脱部分在浓度为10、5μl/ml,70%乙醇洗脱部分在浓度为5μl/ml时,对HL-60肿瘤细胞生长有抑制作用;晶体1和桐粕95%乙醇提取物经50%乙醇洗脱部分在浓度为50μg/ml时对SMMC-7721细胞有很强的抑制作用;桐粕95%乙醇提取物50%乙醇洗脱部分具有明显的抗糖尿病活性,在浓度为5μg/ml时对PPARa、PPARd、PPARγ,RXR受体的激活倍数分别为1.29,3.88,7.06和1.95。 试验五桐粕95%乙醇提取物不同乙醇洗脱部分体外抗氧化试验研究 本试验对桐粕95%乙醇提取物不同乙醇浓度梯度洗脱部分进行体外抗氧化试验,研究发现各洗脱部分均具有较强的还原能力和抗脂质过氧化功能。不同洗脱部分中总酚含量存在显著差异(P<0.05),从50%乙醇洗脱部分的47.68 mg/g到水洗脱部分的34.51mg/g不等;对DPPH·的清除率各异,50%乙醇梯度洗脱部分高达90.37%;当浓度=0.8 mg/ml时,三种不同乙醇梯度洗脱部分的还原能力显著强于维生素C(0.2mg/ml)和BHT(0.2mg/ml);50%乙醇洗脱部分对邻苯三酚自氧化的最大抑制率为96.67%,且在同浓度条件下与维生素C(0.20mg/ml)的抑制作用相当(P>0.05);相同浓度(0.50 mg/ml)条件下,50%乙醇洗脱部分对亚油酸过氧化的抑制效果与维生素C相当(P>0.05);当浓度为0.80 mg/ml时,50%乙醇洗脱部分对羟自由基的清除率最高达96.01%;随着洗脱部分浓度的增加,对H_2O_2诱导的红细胞氧化溶血的抑制作用增强,不同剂量水平下均以50%乙醇梯度洗脱部分最佳。这说明按照该试验工艺制备的桐粕提取物是一种优良的天然抗氧化剂和自由基清除剂。 试验六桐粕提取物降脂保肝作用研究 选取50只昆明SD小鼠按体重随机分为5个处理即空白对照组,高脂模型组和50%乙醇洗脱部分3个组(1000 mg/kg BW,500 mg/kg BW,250 mg/kg BW),每个处理10只小鼠,进行高血脂模型构建,3周造模成功后,除空白对照组给予普通饲料外,其他4组均给予高脂饲料,同时50%乙醇洗脱部分各组以1000 mg/kg BW,500 mg/kg BW,250 mg/kg BW剂量灌喂桐粕提取物95%乙醇提取物50%乙醇洗脱部分,空白和高脂对照组灌服等容量的生理盐水。试验研究发现,桐粕95%乙醇提取物50%乙醇洗脱部分能通过提高血中抗氧化防御功能、调节血脂水平、改变血液流变学参数等,发挥抗动脉硬化(AS)的活性。饲喂桐粕95%乙醇提取物经50%乙醇洗脱物后,高、中、低3个剂量组血清TC、TG、LDL-C含量、LDL-C/HDL-C和Apo-AI/Apo-B比值、冠心指数和动脉硬化指数均有显著降低(P<0.05);高、中、低3个剂量组血清和肝脏SOD、GSH-Px水平、TAC和羟自由基清除能力均显著升高(P<0.05),MDA水平显著降低(P<0.05);高、中、低3个剂量组显著降低高脂血症小鼠的全血粘度、血浆粘度、红细胞压积、血沉、纤维蛋白原、红细胞刚性指数和聚集指数显著升高(P<0.05),红细胞变形指数显著升高(P<0.05)。
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:S816.7

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【引证文献】
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4 本报记者 张悦;提取物出口须走品牌之路[N];国际商报;2005年
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6 ;增长势头强劲 品牌仍需培育[N];中国医药报;2005年
7 闫庆松;应在标准建立、创新投入等多个环节下工夫[N];中国医药报;2012年
8 中国医保进出口商会中药部 霍卫;上半年提取物出口额增长两成[N];中国医药报;2014年
9 曾建国;信心、实力来自创新[N];中国医药报;2006年
10 朱峰 郑海鹏 孔祥建 郭辽朴;葡萄种子提取物的保鲜作用[N];中国食品质量报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 程富胜;樗白皮提取物治疗小鼠溃疡性结肠炎的研究[D];甘肃农业大学;2008年
2 贾娜;黑加仑提取物的抗氧化活性与应用及其对胃癌细胞增殖的抑制作用[D];东北农业大学;2012年
3 于飞;薏苡仁提取物抗肿瘤新靶点及降血脂抗氧化活性研究[D];天津大学;2010年
4 屈啸声;姜荆提取物抑菌活性的热动力学研究[D];浙江大学;2009年
5 郝建军;辛温通阳中药葱白提取物对动脉粥样硬化大鼠IL-6/STAT3信号通路的调节作用及机制研究[D];湖北中医药大学;2011年
6 陈兵;通关藤提取物抗恶性血液系统疾病作用的实验研究[D];南京中医药大学;2009年
7 林瑞新;核桃楸皮提取物治疗胃癌活性的实验性研究[D];吉林大学;2008年
8 孙杰;两种海藻提取物的化学成分和生物活性的研究及其应用[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2006年
9 相子春;真菌发酵产物提取物抗HIV-1活性研究[D];中国协和医科大学;2005年
10 蒲秀瑛;贯叶连翘提取物对甲型流感病毒的作用及免疫调节机制的研究[D];甘肃农业大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 热孜亚·阿不来提;黑加仑提取物保护血管内皮细胞氧化损伤的实验研究[D];新疆医科大学;2008年
2 聂巧峰;白鲜皮提取物对动物急性炎症的抗炎作用及机理探索[D];成都中医药大学;2006年
3 何双;加工对槟榔功能特性影响的研究[D];中南林业科技大学;2009年
4 张坤;蜂房提取物的体外抗肿瘤作用研究[D];中国医科大学;2010年
5 王槐;藏药提取物体外抗呼吸道病毒作用实验研究[D];兰州大学;2011年
6 张舰;南蛇藤提取物抗肿瘤作用的实验研究[D];扬州大学;2006年
7 樊亚苏;四种含笑提取物抗氧化作用研究[D];南京林业大学;2007年
8 刘卓灵;藠头提取物抗肿瘤及对氟尿嘧啶增效减毒作用的研究[D];湖南师范大学;2008年
9 刘小玲;川楝素提取物的制备和抗肿瘤机理研究[D];重庆医科大学;2009年
10 刘华;国产升麻提取物雌激素样作用的研究[D];中国协和医科大学;2009年
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