收藏本站
《湖南农业大学》 2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

香蕉胚性悬浮细胞超低温保存及遗传转化的研究

霍妙娟  
【摘要】: 本研究在前人工作的基础上,以贡蕉(Musa AA Pisang Mas cv.Mas)品种为试材,对其再生体系、超低温保存和遗传转化进行了比较深入的研究。其主要试验结果如下: 1、以贡蕉(Musa AA Pisang Mas cv.Mas)的未成熟雄花序为外植体,分别利用不同浓度的2,4-D和Picloram诱导胚性愈伤组织,发现4 mg/L的Picloram诱导效果最好,比同浓度的2,4-D诱导的胚性愈伤组织率高出一倍以上。但是Picloram诱导的胚性愈伤组织由于含水量较高难于建立悬浮系,而用2,4-D诱导的胚性愈伤组织比较容易建立悬浮系。比较了不同浓度的ABA对体细胞胚诱导、成熟和萌发的影响,其中0.5 mg/L的ABA能够促进体细胞胚的成熟、萌发和植株再生,其成熟体胚数量为37600个/mL PCV,其处理的体胚萌发率和植株转换率分别为30.73%、23.42%。 2、建立了贡蕉悬浮细胞的玻璃化法保存技术体系。具体方法为:取处于悬浮培养对数期的胚性细胞,在含有0.5 mol/L蔗糖的培养液中预培养2 d,在室温下用装载液(ML+2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖)处理40 min,在0℃用玻璃化液PVS_2处理30 min,迅速投入液氮,保存24 h后,37℃水浴解冻,用含有1.2 mol/L蔗糖的洗涤液洗涤3次,每次10 min,TTC法检测细胞生活力最高可达80.46%。将细胞转移到含有0.5 mol/L的过渡培养基上,24 h后转移到恢复培养基中,对悬浮细胞进行再培养,通过体细胞胚胎发生途径获得了再生植株。 3、应用透射电镜对香蕉胚性悬浮细胞玻璃化法超低温保存过程中细胞超微结构变化进行了观察。发现细胞在经过预培养、装载、脱水的过程中,细胞质壁分离程度逐渐加重,液泡体积变小,部分细胞器逐渐膨大。在液氮中保存后,部分细胞的细胞壁、细胞核以及细胞器受到了严重的损伤,是导致细胞致死的可能原因之一。部分细胞结构完整,虽然细胞结构发生了变化,但是程度不深,在恢复培养时会自动修复,可以再生出植株。 4、用含质粒载体pCAMBIA1301的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105对贡蕉悬浮细胞进行了转化,通过测定GUS基因瞬时表达率,对转化初期的主要影响因素进行了研究。结果表明,取处于对数期的悬浮细胞和浓度为OD_(600)0.2菌液混合,在室温、8 000r/min离心5 min,然后在110 rpm的旋转摇床上摇5 min,在体胚诱导和成熟培养基上共培养8 d,瞬时表达率达到最高值25.3%。通过对体细胞胚的进一步选择和再培养,得到了转基因抗性芽。
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S667.1

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 黄永红;易干军;周碧容;曾继吾;吴元立;;香蕉基因工程研究进展[J];西北植物学报;2006年10期
2 刘志学,张旭,徐亚南,何艺园,马向前,沈大棱,唐克轩;用LBA4404/pCAMBIA系列转化水稻的最佳条件[J];复旦学报(自然科学版);1999年04期
3 刘志学,马向前,何艺园,徐亚南,叶鸣明,唐克轩;农杆菌介导遗传转化中辅助处理方法的改良[J];复旦学报(自然科学版);1999年05期
4 陈廷速,张军,夏宁邵,陈如凯,李杨瑞;香蕉横切薄层培养(tTCL)及植株再生[J];福建果树;2001年03期
5 张妙霞;赖钟雄;何水林;黄玉吉;林玉玲;吴金寿;;香蕉转基因受体系统的建立[J];福建农业大学学报;2006年05期
6 刘雪红;吴坤林;陈国华;陈之林;段俊;曾宋君;;“金手指”香蕉的组织培养和快速繁殖[J];中国南方果树;2006年01期
7 吴静;李瑞珍;徐碧玉;金志强;;香蕉ACC合成酶反义基因转化香蕉的研究[J];分子植物育种;2007年04期
8 周丽侬;马雪筠;陈俊秋;林健良;邝哲师;;香蕉通过胚状体途径的快速繁殖研究[J];广东农业科学;1991年03期
9 杨秀坚;孙诚志;;不同植物生长调节剂对香蕉组织培养的影响[J];广东农业科学;2005年06期
10 王郁民,李嘉瑞;果树休眠枝的低温保存[J];果树科学;1992年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 魏国芹;戴洪义;孙玉刚;梁美霞;安淼;;榅桲离体培养繁殖的研究[J];山东农业科学;2010年01期
2 刘媛媛;张春庆;吴承来;;LeJA2基因沉默表达载体导入番茄转化系统的建立[J];山东农业科学;2010年02期
3 王红霞;王文锋;;芦荟原生质体融合的研究[J];山东农业科学;2010年10期
4 吴志平;植物转基因方法在桑树上的应用[J];安徽农学通报;2003年04期
5 邓旭;雷新涛;;玻璃化法超低温保存果树种质资源初探[J];安徽农学通报;2006年03期
6 徐少亭;董永会;冯晓东;;香紫苏叶片愈伤组织诱导的初步研究[J];安徽农学通报;2008年22期
7 张宝琼;范眸天;屈云慧;于丽霞;李涵;;利用卡那霉素筛选非洲菊转基因植株的技术研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年03期
8 夏珣;闫明旭;李名扬;眭顺照;;Metallothionein克隆载体及表达载体的构建及转化矮牵牛的初步研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年07期
9 张霞;刘敦菊;徐立;眭顺照;李名扬;;白兰叶挥发油提取方法及工艺条件研究[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年03期
10 张希太;;高粱DNA导入小麦“矮早8”引起后代变异的研究及SSR分析[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 薛建平;张爱民;盛玮;;植物种质超低温保存研究进展[A];2004“生态安徽”博士科技论坛论文集[C];2004年
2 黄月琴;薛建平;;植物抗病分子机制及抗病基因工程研究进展[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
3 傅伊倩;刘燕;;百合种质资源离体保存研究进展[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
4 姜福星;刘凤栾;赵梁军;;植物类原球茎研究进展[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
5 李本波;杜国强;张玉星;;不同激素种类和配比对杜梨组培继代苗愈伤组织发生及状态的影响[A];梨科研与生产进展(五)[C];2011年
6 尹钧;任江萍;李志岗;李磊;周苏玫;卫丽;宋丽;;转基因抗穗发芽小麦的获得[A];中国作物学会2007年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2007年
7 吴洁;周宇;张雪梅;阎文昭;;幽门螺杆菌热休克蛋白基因HspB-C对甘薯遗传转化的研究[A];中国核科学技术进展报告——中国核学会2009年学术年会论文集(第一卷·第8册)[C];2009年
8 赵艳华;吴永杰;;超低温保存苹果离体茎尖[A];中国园艺学会成立70周年纪念优秀论文选编[C];1999年
9 黄鑫文;陈创国;;我国香蕉组培快繁工业的技术进展同应用前景[A];植物组织培养与脱毒快繁技术——全国植物组培、脱毒快繁及工厂化生产技术学术研讨会论文集[C];2001年
10 徐春香;梁铨荣;彭国康;陈厚彬;;香蕉愈伤组织诱导影响因素研究[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李惠华;龙眼体胚发生过程中激素代谢和信号转导相关基因的克隆与表达[D];福建农林大学;2010年
2 张妙霞;野生香蕉(Musa spp., AB group)抗寒相关基因的克隆与表达分析[D];福建农林大学;2010年
3 李秉玲;芍药属植物超低温保存花粉的差异表达蛋白质研究及花粉库的建立[D];北京林业大学;2010年
4 周欣;铵离子对中国红豆杉细胞中紫杉烷生物合成的影响及其信号转导机理研究[D];华东理工大学;2011年
5 郝玉波;砷对玉米—小麦的毒害作用及磷、硫缓解效应研究[D];山东农业大学;2011年
6 冯守千;红梨着色机理的研究[D];山东农业大学;2011年
7 马进;水稻条纹病毒(RSV)RNA3、RNA4的克隆与抗RSV转基因水稻的培育[D];山东农业大学;2011年
8 王小刚;湖北麦冬种植优化和遗传多样性研究[D];华中科技大学;2011年
9 蔡肖;青杨原生质体培养及叶片离体染色体加倍研究[D];北京林业大学;2011年
10 郝金凤;无载体无选择标记转基因耐贮藏甜瓜的培育[D];内蒙古大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张庆福;枳精氨酸脱羧酶基因(PtADC)转化烟草提高抗脱水研究[D];华中农业大学;2010年
2 魏礼玲;MYB转录因子家族相关EST干涉载体构建及遗传转化的研究[D];华中农业大学;2010年
3 郑瑜;银杏核心种质构建初探[D];华中农业大学;2010年
4 汪晶;二倍体马铃薯原生质体融合创制抗青枯病的新种质[D];华中农业大学;2009年
5 刘鹍;苦瓜单倍体诱导的初步研究[D];华中农业大学;2010年
6 卢小三;两个杨树无性系再生体系的建立及抗虫基因Cry1C+9C转化的初步研究[D];华中农业大学;2010年
7 蒋淑磊;丹红杨和巨尾桉组织培养技术的研究[D];中南林业科技大学;2009年
8 黄振;马尾松幼苗茎段和春梢茎段组织培养[D];中南林业科技大学;2009年
9 张鲁军;离子束诱导普通小麦小偃81 HMW-GS 1Ax1缺失突变家系突变机制研究[D];郑州大学;2010年
10 刘无双;拟南芥种子特异表达基因启动子分析[D];山东农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李华平,胡晋生,范怀忠;黄瓜花叶病毒香蕉株系衣壳蛋白转基因烟草的研究[J];病毒学报;1996年02期
2 肖火根,李华平,范怀忠;香蕉束顶病毒基因克隆和序列分析[J];病毒学报;1999年01期
3 M.Jones ,蒋有绎;植物细胞和组织培养的利用[J];北京农业科学;1990年01期
4 M.Jones ,蒋有绎;组织培养引起的遗传变异性和不稳定性[J];北京农业科学;1990年01期
5 崔国盈,赵桂林,杨启元,祖力皮亚,孙小平,冯立涛,孟林;新疆甘草资源的分布及其开发利用[J];草食家畜;1999年02期
6 钟名其,楼程富,周金妹,谈建中;农杆菌介导的桑树遗传转化条件的研究[J];蚕桑通报;1999年04期
7 张继,姚健,丁兰,郭守军,杨永利;甘草的利用研究进展[J];草原与草坪;2000年02期
8 陈婷,栾恒淳,李力,王丽;水稻悬浮体细胞胚胎发生及其特异蛋白[J];东北师大学报(自然科学版);2000年04期
9 王喆之,张大力,李克勤,郭德志,郝联芳;陆地棉愈伤组织产生及胚胎发生的细胞学研究[J];西北植物学报;1990年02期
10 李树贤,陈远英;结球甘兰下胚轴组织培养形态发生的组织学研究[J];西北植物学报;1993年04期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 赵艳华;陈霜莹;吴永杰;常永健;章德明;;玻璃化法超低温保存苹果离体茎尖[A];中国科学技术协会第二届青年学术年会园艺学论文集[C];1995年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张守梅,李建国,陈厚彬,徐春香,林顺权;香蕉种质超低温保存技术研究进展[J];果树学报;2005年05期
2 陈廷速,张军,夏宁邵,陈丽新,陈如凯,李杨瑞;影响根癌农杆菌介导的香蕉遗传转化因素研究[J];广西农业生物科学;2002年01期
3 张守梅;李建国;陈厚彬;徐春香;林顺权;;香蕉多芽体的诱导及超低温保存的初步研究[J];福建果树;2005年04期
4 黄玉吉;赖钟雄;赵巧阳;;硝酸银在香蕉遗传转化上的作用[J];亚热带农业研究;2008年01期
5 黄永红;梅眉;曾继吾;周碧容;吴元立;易干军;;香蕉ACC氧化酶反义基因植物表达载体的构建及其转化烟草的研究[J];分子植物育种;2007年05期
6 郑耘,肖火根,李华平,范怀忠;香蕉抗病基因工程[J];中国生物工程杂志;2003年08期
7 李建国;张守梅;陈厚彬;徐春香;王泽槐;;应用茎尖滴冻法超低温保存香蕉资源研究(英文)[J];果树学报;2010年05期
8 魏岳荣,杨护,黄秉智,许林兵,邱继水;生物技术在香蕉育种中的应用[J];果树学报;2003年05期
9 陈廷速,张军,曾定,夏宁邵,陈丽娟,陈如凯,李杨瑞;香蕉农杆菌介导高效转化体系[J];西南农业学报;2002年01期
10 刘峰,王君晖,黄纯农,颜秋生,张雪琴;水稻胚性悬浮细胞玻璃化冻存中的超微结构变化[J];中国水稻科学;1998年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 曾莉莎;赵志慧;陈元熙;姜子德;;广州地区香蕉上镰孢菌种类及多样性分析[A];2010年中国菌物学会学术年会论文摘要集[C];2010年
2 费继锋;李华平;周国辉;肖火根;;香蕉线条病毒检测方法的研究[A];第三次全国植物病毒和病毒防治学术研讨会论文集[C];2003年
3 李华平;周国辉;徐春香;饶雪琴;;黄瓜花叶病毒衣壳蛋白基因转化香蕉研究[A];中国植物病理学会第七届代表大会暨学术研讨会论文摘要集[C];2002年
4 张妙霞;赖钟雄;黄玉吉;吴金寿;;香蕉横切薄层培养及其植株再生[A];第二届全国植物组织培养、脱毒快繁及工厂化生产学术研讨会论文集[C];2004年
5 陆永跃;梁广文;曾玲;;不同香蕉品种上双带象甲的发生和危害[A];走向21世纪的中国昆虫学——中国昆虫学会2000年学术年会论文集[C];2000年
6 徐春香;李华平;肖火根;范怀忠;;香蕉束顶病毒运动蛋白基因的初步转化[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
7 付岗;张君成;黄思良;项扶香;;广西田间新发生一种香蕉病害[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
8 邓成菊;谢学立;刘菊华;金志强;徐碧玉;;两个香蕉乙二醛酶家族基因的克隆(摘要)[A];第二届全国果树分子生物学学术研讨会论文集[C];2009年
9 林成辉;许文耀;兀旭辉;张绍升;;香蕉无(枯萎)病组培苗培育技术规范[A];2003’华东植物病理学术研讨会暨江苏省植物病理学会第十次会员代表大会论文集[C];2003年
10 钱雪艳;郭东全;杨向东;赵桂兰;;大豆体细胞胚性愈伤悬浮培养体系的建立及超声介导遗传转化的研究[A];全国植物分子育种研讨会摘要集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 吴明;国产香蕉撑起果业亮点[N];农民日报;2005年
2 本报记者 杨春莲 通讯员 符斌;香蕉地里“种”出富裕村[N];钦州日报;2009年
3 刘慧;应加强香蕉产销预警体系建设[N];中国经济时报;2009年
4 本报记者 刘妍;纽约城里一个崭新的香蕉共和国[N];中国服饰报;2010年
5 记者 孙志平 赵叶苹 王晖余;乙烯利催熟的香蕉到底能不能吃?[N];新华每日电讯;2011年
6 李道刚;从欧盟内部看“香蕉争端”的由来[N];人民法院报;2005年
7 ;国产香蕉与国外香蕉哪个更“香”[N];云南科技报;2002年
8 记者 钟祺 姚惠怡 俞长庆 通讯员 黄启华 梁春艳;“种玉米比种香蕉强多了”[N];东莞日报;2008年
9 ;吃香蕉预防“秋季病”[N];中国食品报;2009年
10 记者 陆崇林;盯住大户广泛发动 做好今冬明春以香蕉为重点的水果流通工作[N];钦州日报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张明洲;农杆菌介导高梁转化体系的建立与Bt(Bacillus thuringiensis)抗虫基因的导入[D];浙江大学;2002年
2 王萍;大豆组织培养体系优化与双价抗虫基因遗传转化的研究[D];东北农业大学;2002年
3 李杰;渗透胁迫信号传导关键基因的克隆及DREB1A基因对水稻的遗传转化[D];东北农业大学;2003年
4 武丽敏;小麦遗传转化参数优化及其应用研究[D];四川农业大学;2005年
5 Abdul Razzaq;[D];河北农业大学;2005年
6 杨怀义;草莓果实膜联蛋白基因的cDNA克隆及其遗传转化的研究[D];沈阳农业大学;1999年
7 梁机;转rolB基因改良毛白杨生根能力的研究[D];北京林业大学;2004年
8 李秉玲;芍药属植物超低温保存花粉的差异表达蛋白质研究及花粉库的建立[D];北京林业大学;2010年
9 蒋盛军;甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化和转基因植株的有效再生[D];中国农业大学;2003年
10 陈廷速;人表皮生长因子基因的克隆、表达及其在植物中的遗传转化研究[D];福建农林大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 霍妙娟;香蕉胚性悬浮细胞超低温保存及遗传转化的研究[D];湖南农业大学;2008年
2 李瑞珍;香蕉1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶(ACS)反义基因植物表达载体的构建及转化香蕉的研究[D];华南热带农业大学;2001年
3 包爱科;AVP1基因转化紫花苜蓿的初步研究[D];兰州大学;2006年
4 蒿燕;利用人工microRNA技术构建CHSJ基因沉默载体及适于矮牵牛转化株系的筛选[D];西南大学;2010年
5 王海朋;桑树转景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶基因(MSBPase)的研究[D];山东农业大学;2011年
6 王海波;草莓离体再生及抗病基因遗传转化的研究[D];山东农业大学;2002年
7 贾海燕;农杆菌介导小麦遗传转化体系的建立及转基因研究[D];山东农业大学;2003年
8 陈丽梅;黄瓜的高效再生和根癌农杆菌介导的遗传转化[D];西北师范大学;2004年
9 苏俊峰;Bt抗虫基因导入马铃薯的遗传转化研究[D];东北农业大学;2004年
10 苑志辉;兔防御素基因NP-1在亚麻抗枯萎病方面的研究[D];中国农业大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026