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枇杷叶中科罗索酸的资源化学调查及提取分离技术研究

杨庆新  
【摘要】: 枇杷叶是我国一种传统中药植物资源,枇杷叶中三萜酸是具有广泛生物活性的一类物质,其中科罗索酸具有治疗Ⅱ型糖尿病、减肥、降血压等药理功能,被称为植物胰岛素,近几年来成为研究的热点。为了开发和利用枇杷叶中的科罗索酸,本文首先建立了科罗索酸的定性定量分析方法,并结合溶剂萃取、脱色和柱分离等技术和方法,调查了枇杷叶中科罗索酸的资源化学,确定了枇杷叶中高含量科罗索酸的最佳提取工艺,分离纯化得到了不同纯度的科罗索酸产品。本研究的主要结果如下: 1、建立了科罗索酸的TLC定性分析法和RP-HPLC定量分析法。通过对展开剂和显色剂的筛选,最后确定TLC定性分析法CHCl_3:CH_3OH(V_1:V_2)为96:4-95:5,显色剂为10%的硫酸乙醇溶液。通过对流动相比例的调整,确定流动相为乙腈-水的体积比为88:12,等梯度洗脱,检测波长为210 nm,流速是0.8 mL/min,柱温35℃,运行时间35 mins,保留时间为9.424 min左右。 2、系统调查了枇杷叶中科罗索酸含量的分布规律。通过以枇杷植物体的不同部位,福建莆阳的不同嫩度、不同品种的枇杷叶,我国7个不同省份生产的枇杷叶,湖南浏阳的不同采摘时期、不同贮藏时期、不同前处理的枇杷叶为原料,采用RP-HPLC法,系统调查了枇杷叶中科罗索酸含量的变化情况。结果表明:科罗索酸含量在枇杷植物体内的分布情况为叶果肉花茎根树皮;在福建莆田溪南基地不同嫩度枇杷叶中的含量变化规律是落叶成熟叶中等成熟叶嫩叶,不同品种的枇杷叶中科罗索酸的含量以早钟6号最高;不同省份枇杷叶中科罗索酸的含量以重庆北碚最高:在湖南浏阳的一年中不同采摘时期的枇杷叶中科罗索酸含量以4月份最高,枇杷叶中科罗索酸随着贮藏期延长逐渐增加,在不同前处理的枇杷叶中科罗索酸的含量则是刷毛的处理高于不刷毛的处理。 3、确定了枇杷叶中科罗索酸提取的最佳工艺。以福建莆田溪南枇杷基地的枇杷叶为原料,通过设计单因素实验和正交实验,并采用RP-HPLC法确定了两种的最佳提取工艺。其中溶剂萃取法的最佳提取工艺是溶剂为95%乙醇浓度、提取时间2 h、提取温度70℃、料液比1:20 g/mL,在该条件下所得产品中科罗索酸的含量为4.74%:超声辅助法的最佳提取工艺是溶剂为95%乙醇浓度,料液比1:20 g/mL,提取时间20 mins,温度40℃,在该条件下所得产品中科罗索酸的含量为4.81%。 4、分离纯化得到了不同规格的科罗索酸产品。以枇杷叶乙醇提取物为原料,采用水洗、活性炭脱色、石油醚脱色、硅胶柱色谱等技术和手段,分离纯化得到了科罗索酸含量分别为26.30%,47.86%,82.52%等不同规格的样品。 本文较系统地建立了科罗索酸的分析检测方法,调查了枇杷叶中科罗索酸的资源,确定了两种提取方法的最佳工艺,分离纯化得到了不同规格的科罗索酸产品,为系统、全面、合理的开发和利用枇杷叶中的科罗索酸提供了科学依据,具有一定的实际应用前景。


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