收藏本站
《湖南农业大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

狂犬病病毒P蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

赵刚  
【摘要】: 本试验旨在建立一种检测狂犬病抗体的方法。通过传代培养BHK21细胞扩增狂犬病毒LEP-Flury株病毒,并根据GenBank发表的狂犬病病毒(Rabies Virus, RV) LEP-Flury株的基因序列设计一对引物,通过RT-PCR扩增得到P基因的全长序列,克隆于pGM-T载体中,获得重组质粒pGM-T-P,将重组质粒用限制性内切酶NotI和EcoRI进行双酶切,酶切产物定向克隆于原核表达载体pET-32a (+)中,构建原核重组表达质粒pET-32a-P,阳性重组表达质粒转化原核表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达P蛋白。SDS-PAGE和Western-blot分析确定蛋白表达量和特异性。使用镍琼脂糖凝胶FF对P蛋白进行纯化,纯化的蛋白作为诊断抗原,通过对反应条件的优化,初步建立间接ELISA方法用于检测狂犬病抗体。结果扩增得到了RV P基因,构建了克隆质粒pGM-T-P和原核表达质粒pET-32a-P,高效表达了主要以可溶性形式存在的P蛋白,并能与RV阳性血清发生特异性反应,用表达的狂犬病病毒重组P蛋白建立了用于检测RV抗体的间接ELISA方法。
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S854.43

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐葛林,Li Ku,吴杰,C.A.De Mattos,郑新雄,薛经刚,胡巧玲,刘锦彦,朱家鸿,C.C.De Mattos,J S.Smith;中国19个狂犬病病毒街毒分离株N基因的序列分析[J];病毒学报;2002年01期
2 李伟;周海梦;;狂犬病病毒的分子生物学及其保护性抗原的结构和功能[J];传染病信息;1999年04期
3 辛志明;王寿昆;;狂犬病病毒与狂犬病在人间流行状况[J];福建畜牧兽医;2006年S1期
4 赵云蛟,钱爱东,李公美,姚纪元;狂犬病病毒分子流行病学研究进展[J];经济动物学报;2004年03期
5 王晓光;侯勇跃;唐青;;狂犬病病毒分子生物学研究进展[J];畜牧与饲料科学;2008年02期
6 袁慧君,王三虎,秦鄂德;狂犬病病毒分子生物学研究进展[J];生物技术通讯;2004年06期
7 徐葛林;国内外狂犬病毒实验室检测与诊断技术的研究及进展[J];中国计划免疫;2005年02期
8 袁慧君,扈荣良,张守峰,张茂林,涂长春;狂犬病病毒SRV_9克隆株核蛋白基因的克隆、表达与特性分析[J];中国预防兽医学报;2003年01期
9 熊成龙;张永振;卢思奇;;狂犬病毒生物学特征研究进展[J];中华流行病学杂志;2006年10期
10 邵荣标,郑春早,王海燕,丁昌慧,陈万庚;人类狂犬病毒隐性感染状况研究[J];中国人兽共患病杂志;2004年07期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王岩;王宪文;王新卫;;狂犬病病毒分子生物学研究进展[J];安徽农业科学;2007年21期
2 刘晓燕;;狂犬病的流行及防控[J];现代农业科技;2011年11期
3 贾茜;徐葛林;赵伟;吴杰;郑新雄;;重组人抗狂犬病病毒单抗SO57、SOJB对不同狂犬病病毒毒株中和作用的研究[J];病毒学报;2006年04期
4 赵云蛟;郭利;黄莹;张立世;钱爱东;;1株梅花鹿源狂犬病街毒株全基因组测序与分析[J];病毒学报;2008年03期
5 余春;李世军;王定明;唐青;陶晓燕;李浩;庄妍;周敬祝;王月;田克诚;唐光鹏;;贵州省25株狂犬病病毒核蛋白基因序列分析[J];病毒学报;2011年06期
6 张永振;;防制狂犬病,中国须建立长效机制[J];传染病信息;2007年01期
7 易长庚;张雪红;臧雄益;;86例狂犬病临床分析[J];中国医师杂志;2006年05期
8 林晓晨;赵茂鑫;李莉;任林柱;;狂犬病病毒Flury-LEP株全基因组的克隆与序列分析[J];动物医学进展;2010年05期
9 辛志明;王寿昆;;狂犬病病毒与狂犬病在人间流行状况[J];福建畜牧兽医;2006年S1期
10 焦文强;胡永浩;殷相平;李志勇;柳纪省;;狂犬病病毒核蛋白的原核表达及纯化[J];贵州农业科学;2009年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 冯晓燕;王国华;宋晓国;陈堃;修冰水;何竞;杨锡琴;朱翠侠;张贺秋;;狂犬病毒表位区段抗原在疫苗免疫效果评价中的应用价值[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
2 辛志明;王寿昆;;狂犬病病毒与狂犬病在人间流行状况[A];福建省科协第六届学术年会卫星会议“增强科技创新能力,促进优质畜牧业发展”研讨会论文集[C];2006年
3 刘开永;侯玉泽;李松彪;李道敏;杨晓花;张其艳;;狂犬病毒的反向遗传操作技术研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
4 刘晓慧;艾军;孙招金;陈晶;孙京臣;郭霄峰;;狂犬病毒Hep-Flury-dG株的拯救及其生物学特性的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
5 熊毅;刘棋;盘龙波;王雯;罗廷荣;朱伟;韦友传;陆专灵;郭建刚;李华明;;广西狂犬病分子流行病学的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
6 刘晓慧;孙招金;陈晶;艾军;孙京臣;郭霄峰;;狂犬病毒Hep-dG株的拯救及其生物学特性的研究[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
7 刘晓慧;孙招金;陈晶;艾军;薛素强;孙京臣;郭霄峰;;狂犬病毒Hep-dG株的拯救及其生物学特性的研究[A];首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集(2008)[C];2008年
8 赵焕云;张文东;金卫华;杨斌;李朝仓;宋建领;何晓辉;周建国;胡媛媛;王永贤;张应国;范泉水;李作生;高云英;张富强;;云南牟定狂犬病诊断及病毒部分N基因测序[A];第十三次全国养犬学术研讨会论文集[C];2009年
9 赵刚;李刚;范晓娟;;狂犬病病毒P基因的原核表达及间接ELISA方法的应用[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
10 江飙;郑佳琳;张东霞;郭霄峰;;全序列密码子优化对狂犬病病毒基质蛋白原核表达的影响[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨瑞梅;单链抗体介导狂犬病毒shRNA靶向制剂的研究[D];甘肃农业大学;2010年
2 殷相平;动物狂犬病基因工程亚单位疫苗研究[D];甘肃农业大学;2011年
3 潘铁骊;狂犬病病毒BD06株生物学特性鉴定及反向遗传系统的建立[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
4 熊成龙;中国狂犬病毒的遗传学特征[D];中国人民解放军军事医学科学院;2006年
5 高明华;狂犬病毒G,N基因的表达、单克隆抗体制备与胶体金免疫层析检测试纸的研制[D];吉林大学;2007年
6 黄莹;狂犬病病毒CTN株反向遗传系统的建立[D];吉林大学;2009年
7 张建明;福建省狂犬病流行病学及病毒学特征研究[D];福建医科大学;2009年
8 任琦;人参愈伤组织细胞表达CTB-hIFN-α2b融合蛋白的研究[D];吉林大学;2009年
9 孟胜利;中国流行的狂犬病病毒时空进化分析[D];武汉生物制品研究所;2010年
10 刘富强;湖南省1988~2007年狂犬病流行病学研究[D];中南大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 罗世民;狂犬病弱毒疫苗Flury-lep株生物学特性检测与分析[D];湖南农业大学;2010年
2 李云云;RFFIT检测体系的改进和效果评估[D];山西医科大学;2011年
3 翟洪月;糖蛋白G基因在基因组P-M位的插入重组表达对狂犬病毒Flury LEP致病力的影响[D];中国农业科学院;2011年
4 丁继超;云南省狂犬病流行特征及病毒分子流行病学研究[D];大理学院;2010年
5 马良;表达RV ERA株G蛋白重组新城疫病毒的构建及免疫原性研究[D];东北农业大学;2011年
6 南松剑;广西狂犬病野毒株N和G基因的克隆与序列分析[D];广西大学;2003年
7 熊毅;广西狂犬病分子流行病学的研究[D];广西大学;2005年
8 王洪兰;鼠抗人IgG单克隆抗体的研制及其在结核抗体IgG检测中的应用[D];兰州大学;2006年
9 郭利;RV野毒株L基因C端3’-RACE扩增及序列分析[D];吉林农业大学;2006年
10 黄莹;狂犬病毒野毒株G-L间隔区及L基因活性部位序列分析[D];吉林农业大学;2006年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐葛林,Li Ku,吴杰,C.A.De Mattos,郑新雄,薛经刚,胡巧玲,刘锦彦,朱家鸿,C.C.De Mattos,J S.Smith;中国19个狂犬病病毒街毒分离株N基因的序列分析[J];病毒学报;2002年01期
2 钱爱东,侯世宽,何昭阳,李红卫,涂长春,殷震;中国不同来源狂犬病病毒野毒株G基因主要功能区的序列分析[J];病毒学报;1998年03期
3 李伟;周海梦;;狂犬病病毒的分子生物学及其保护性抗原的结构和功能[J];传染病信息;1999年04期
4 严家新;狂犬病毒分子流行病学研究进展[J];国外医学.病毒学分册;1995年02期
5 王磊,王松俊;全球几种主要传染病流行及研究动态[J];国外医学.流行病学传染病学分册;2000年01期
6 罗廷荣;狂犬病病毒糖蛋白抗原性状的分子生物学研究进展[J];广西畜牧兽医;1998年03期
7 邓正华;狂犬病毒的分子生物学研究近况[J];泸州医学院学报;1996年02期
8 邵荣标,丁昌慧,郑春早,吴巨飞,刘顺先,汤权;狂犬病毒非临床型感染初探[J];南通医学院学报;2004年01期
9 李伟,张新梅,张曼夫,王树惠;狂犬病病毒3aG株核蛋白基因cDNA的克隆及序列分析[J];农业生物技术学报;1999年03期
10 周锡生,王锦生;吴县地区狂犬病流行病学特征[J];上海预防医学杂志;1994年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 钱爱东,侯世宽,张茂林,李红卫,涂长春,侯安祖,殷震;鹿狂犬病病毒G基因主要功能区的序列分析[J];中国兽医学报;1997年03期
2 罗廷荣;狂犬病病毒糖蛋白抗原性状的分子生物学研究进展[J];广西畜牧兽医;1998年03期
3 赵云蛟,钱爱东,李公美,姚纪元;狂犬病病毒分子流行病学研究进展[J];经济动物学报;2004年03期
4 师志海;张一帆;李守军;邢会杰;陈朝喜;;狂犬病生物学鉴定方法及核酸检验技术[J];黑龙江畜牧兽医;2006年06期
5 岳军明,侯世宽,殷震;狂犬病病毒8202毒株在BHK_(21)细胞上蚀斑方法的建立[J];中国兽医学报;1992年01期
6 怀济森,陈焕春,熊远著;基因免疫诱导小鼠对狂犬病病毒糖蛋白的免疫反应[J];武汉大学学报(自然科学版);1997年04期
7 王三虎,袁慧君;狂犬病病毒新型疫苗研究进展[J];河南畜牧兽医;2004年11期
8 郑四清;吴增红;;浅谈狂犬病及其防控中存在的问题与解决方案[J];湖南畜牧兽医;2007年04期
9 马君;王栋;于康震;汪明;;狂犬病街毒的分离与鉴定[J];中国兽医杂志;2010年06期
10 杨春艳;;狂犬病的防治技术[J];云南农业科技;2010年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 夏咸柱;;加强动物狂犬病防控研究 从源头上防控人类狂犬病[A];2010全国狂犬病防控高层论坛论文集[C];2010年
2 许运斌;朱妍;涂长春;;动物狂犬病实验室诊断技术概况[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
3 宋阳威;王水明;张敬友;吴亚力;李超美;柯家法;艾峰;;美洲陆生动物狂犬病防控管理进展研究[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
4 熊毅;刘棋;朱伟;韦友传;陆专灵;郭建刚;李华明;刘科;南松剑;罗廷荣;;广西狂犬病分子流行病学的研究[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年
5 曹守春;李加;王玲;唐建蓉;刘景华;曲小肃;吴小红;石磊泰;董关木;俞永新;;狂犬病病毒核蛋白的体外表达及其免疫原性研究[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
6 李亚杰;郁宏伟;韩佳丽;梁武;杨保收;;浅谈狂犬病的诊断技术[A];“科技进步推进畜牧业现代化”科技论文集[C];2011年
7 马健;席进;李莹莹;苏南;龚文杰;张茂林;涂长春;;狂犬病病毒攻毒犬唾液排毒及病毒在体内的分布研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
8 赵怀龙;金宁一;;狂犬病病毒分子生物学研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(下)[C];2003年
9 丁继超;张海林;李琼芬;申辛欣;李浩;唐青;;云南省1976~2009年狂犬病流行病学特征分析[A];2010全国狂犬病防控高层论坛论文集[C];2010年
10 郭霄峰;;狂犬病病毒基因重排、重组及基因工程灭活疫苗的研制[A];2010全国狂犬病防控高层论坛论文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 任倩茹;我州采取措施确保2011年狂犬病例“零报告”[N];凉山日报(汉);2011年
2 本报记者 鞠贵芹 本报实习生 俞丹丹;如何防狂犬病疫情反弹[N];台州日报;2011年
3 记者 李宓;“昏迷疗法”治狂犬病再获成功[N];新华每日电讯;2011年
4 YMG记者 于明君 通讯员 刘正毅 王曰雷;夏季“被狗咬”市民增多[N];烟台日报;2010年
5 郝仁;大家都来重视狂犬病[N];中国畜牧兽医报;2006年
6 谢苗枫 龙瀚 陈枫 粤卫信;专家会诊:狂犬病害死六龄童[N];南方日报;2011年
7 郑灵巧;近十年狂犬病发病大幅上升[N];健康报;2007年
8 丁厚勤;全力做好狂犬病防控工作[N];菏泽日报;2006年
9 谷峰;油菜花儿开谨防狂犬病[N];中国中医药报;2007年
10 王振坤;被狗咬后先清创再打疫苗[N];卫生与生活报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘富强;湖南省1988~2007年狂犬病流行病学研究[D];中南大学;2009年
2 孟胜利;中国流行的狂犬病病毒时空进化分析[D];武汉生物制品研究所;2010年
3 黄海楠;狂犬病病毒保护性抗原基因重组伪狂犬病毒/杆状病毒活疫苗的实验研究[D];吉林大学;2011年
4 王晓虎;狂犬病病毒感染比较蛋白质组学研究[D];吉林大学;2010年
5 梁红茹;狂犬病病毒核酸适配体的筛选及其生物学活性鉴定[D];吉林大学;2013年
6 潘铁骊;狂犬病病毒BD06株生物学特性鉴定及反向遗传系统的建立[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
7 焦文强;两株狂犬病病毒全基因组序列测定及aG株反向遗传操作系统的建立[D];中国农业科学院;2013年
8 李真光;中和抗体结合MCP-1对狂犬病暴露后预防研究及嵌合糖蛋白重组狂犬病病毒的构建[D];中国农业科学院;2014年
9 薛向红;狂犬病病毒CVS-11株感染性cDNA克隆的构建及其应用[D];吉林大学;2014年
10 陶丽红;狂犬病Flury病毒致弱分子机制及新型疫苗的研究[D];中国农业科学院;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 于金宁;中国狂犬病毒时空动力学及其与狂犬病疫情的关系[D];山东大学;2010年
2 吴慧;中国狂犬病流行现状及病毒P、M基因遗传进化研究[D];山东大学;2010年
3 李浩;中国狂犬病2007年流行特征及病毒N基因分子流行病学研究[D];中国疾病预防控制中心;2010年
4 丁继超;云南省狂犬病流行特征及病毒分子流行病学研究[D];大理学院;2010年
5 尹翠萍;2007-2011年中国狂犬病流行状况及病毒N基因特征分析[D];山东大学;2012年
6 杜传海;云南省边境地区动物狂犬病病原监测及时空分布研究[D];第三军医大学;2013年
7 杨健;2010年-2011年广西地区动物狂犬病分子流行病学调查[D];广西大学;2012年
8 赵雪超;狂犬病病毒基质蛋白的真核表达及其在细胞中的定位[D];天津农学院;2013年
9 张娟;中国狂犬病动力学建模及防控措施研究[D];中北大学;2012年
10 吕思师;农村公众狂犬病健康知识传播策略研究[D];广西大学;2013年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026