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《中南林业科技大学》 2009年
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马尾松幼苗茎段和春梢茎段组织培养

黄振  
【摘要】:马尾松(Pinus massoniana Lamb.)是我国南方亚热带地区重要的乡土速生针叶树种,是重要的工业原料林和采脂林树种,具有很高的综合利用价值。马尾松良种种子园种子产量较低、其扦插繁殖具有显著的年龄效应,马尾松良种种苗供不应求已成为马尾松产业发展的瓶颈,因此,采用组织培养技术研究马尾松快繁技术具有重要的理论和实践意义。 本实验分别以湖南省桂阳县马尾松种子园提供的种子萌发出的幼苗茎段和湖南省天际岭林场10年生以下马尾松春梢茎段为起始外植体,通过实验设计,探讨马尾松愈伤组织的诱导、增殖和不定芽再生的条件,结果表明: (1)幼苗茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为改良GD+4 mg/L 2,4-D+2 mg/L 6-BA+500 mg/L CH+450 mg/L Gln+30 g/L蔗糖,萌发出的愈伤组织直径最大为8.5 mm;春梢茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为DCR+0.5 mg/L NAA+2 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA+0.2 g/L Vc+500 mg/L CH+450 mg/L Gln+30 g/L蔗糖,愈伤组织晶莹剔透,呈淡黄色或白色,略微带点粘性。 (2)在愈伤组织培养时,外植体应进行暗培养,光照培养下愈伤组织的褐化严重。在诱导培养基上添加浓度为3 g/L肌醇,可以解决愈伤组织在继代培养过程中遇到的褐化问题,保持愈伤组织原有形态结构不变5代以上。继代培养时,细胞生长素和细胞分裂素的比值保持在1-3时对愈伤组织的增殖有利,且在这一激素浓度范围内各处理间并无明显差别,在幼苗茎段愈伤组织的继代过程中,2,4-D的浓度在4 mg/L,6-BA浓度为2 mg/L时,效果最好;在春梢茎段愈伤组织的继代过程中,添加0.5 mg/L NAA.2 mg/L 2,4-D.1.5 mg/L 6-BA,效果最好。 (3)以马尾松春梢茎段培育出的愈伤组织为外植体,培养基方案为DCR+1mg/L KT+0.5 mg/L TDZ+500 mg/L CH+3g/L肌醇+30 g/L蔗糖,在经过继代3次以后,在愈伤组织上成功诱导分化出了2个马尾松不定芽,本试验表明以马尾松春梢茎段为外植体,可以通过愈伤组织间接器官发生再生出不定芽。 (4)以带子叶顶芽的幼苗茎段为外植体,培养基为GD+0.5 mg/L IBA+0.05 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖,4次继代培养后生根诱导率为21.4%;在不同浓度的NAA继代试验中,培养基方案为改良GD+0.5 mg/L NAA+20 g/L蔗糖时,4次继代培养后根的诱导率为57.1%。
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