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《中南林学院》 2002年
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三白草和鱼腥草原生质体融合的研究

江年琼  
【摘要】: 本研究的主要内容及结果有以下几点: 1对三白草科的三白草(Saururus chinensis (Lour.)Baill.)和鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb)的核型进行了分析,结果表明:三白草和鱼腥草的核型公式分别为K(2n)=22=4m+16sm+2st和K(2n)=24=14m+10sm。 2三白草的茎、叶和地下根茎均可诱导出愈伤组织,但以嫩茎段作为外植体,以MS为基本培养基,添加NAA0.2mg/L和BA1.0mg/L及肌醇200mg/L时愈伤组织诱导率较高。外植体消毒以0.1%HgCl2处理8min污染率最低。 3在三白草悬浮培养时,不同碳源、蔗糖浓度、激素种类、不同培养基和接种量等对三白草悬浮培养细胞的生长均有影响。其中以3%蔗糖作为碳源,以MS培养基中附加2,4-D1.5mg/L和BA1.0mg/L为好,接种量为4.0gDW/L时,细胞的绝对生长速率较快。 4通过L9(3~4)和L16(4~5)的正交设计,对酶溶液最佳配方及影响原生质体融合的因素进行了研究,结果表明:分离三白草原生质体酶溶液的组成以1.5%的纤维素酶、0.1%果胶酶、0.7mol/L甘露醇和10h的酶解时间为好。分离鱼腥草原生质体的酶溶液除纤维素酶的浓度为1.0%外,其余与三白草相同。由40%PEG(6000)、15mmol/L CaCl_2 2H_2O、0.4mmol/L KH_2PO_4和0.7mol/L甘露醇组成的、pH为9.0的融合剂效果较好。原生质体密度为1×10~6个/ml较佳。 5用PEG诱导融合的双核异核体率为11%左右,将融合原生质体培养在含有NAA1.0mg/L和BA0.5mg/L的MS培养基中,5~6d后,再生细胞发生首次分裂,培养12周后,将直径约2.0mm的愈伤组织转移到添加NAA1.0mg/L的MS培养基上培养4周,愈伤组织迅速增殖。杂种愈伤组织中,80%以上的染 三自草和鱼腥草原生质体融合的研究 色体数目在36~50条之间,但形态学上有一定的变异。随着继代时间的延长, 染色体的变异系数越来越小。研究结果表明,三白草和鱼腥草原生质体融合获得 了属间杂种愈伤组织。 6对杂种愈伤组织和两种原植物的混合物,分别用醇和水进行提取,再对提 取物进行药理实验,结果表明:杂种愈伤组织和两原植物混合后的水提取液可使 小臼鼠胸腺的重量增加,p<O.05,但两者间无显著性差异,p>0刀5。
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