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《中南林学院》 2003年
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松乳菇及其分离菌株的RAPD-PCR分析研究

齐向辉  
【摘要】: 论文首次对松乳菇及其分离菌株进行了RAPD-PCR分析研究。采用筛选并改进的适宜于松乳菇及其分离菌株DNA抽提的四种不同方法,提取了来源于醴陵山区的松乳菇子实体及其通过本实验室组织分离并经摇瓶纯培养得到的5株菌株的基因组DNA,摸索出了一套松乳菇及其分离菌株DNA的高效提取方法——综合DNA抽提法。对松乳菇RAPD的反应体系及反应条件等进行了一系列的探索,并在此基础上对松乳菇及其分离菌株的DNA进行了分子水平上的鉴别研究,对分离菌株的稳定性进行了初步分析。实验对100条10bp的3’端随机引物进行了筛选,筛选出了条带清晰、重复性好的25条引物,并用这25条引物对松乳菇及其分离菌株的DNA进行了扩增,共获得185个扩增标记位点,平均每条引物7.4个。通过对松乳菇子实体及其分离培养菌株共6个样品DNA的遗传指纹图谱分析,统计出了它们之间的遗传相似系数,5个分离菌株与松乳菇子实体间的相似性性系数都比较高,在0.8000~0.9784之间。其中2号和3号菌株与1号样品(子实体)之间的DNA相似系数均在0.9351以上,尤其是2号和1号间相似系数高达0.9784。4号菌株是传代二次的松乳菇分离菌株,它与1号样品(子实体)之间的DNA相似系数为0.8541。5号和6号菌株是传代三次的松乳菇分离菌株,它们与子实体之间的DNA相似性系数分别为0.8000和0.8108,相似系数均比较高。相似系数的统计分析显示松乳菇子实体与分离菌株同种。同时以相似系数为依据,进行了UPMGA聚类分析,6株供试样品在0.8左右的相似水平上聚成一大类,聚类分析结果亦显示松乳菇子实体与5株分离菌株同种。从两种分析结果均可以判定5个分离菌株是松乳菇菌种(Lactarius deliciosus)。进一步根据相似系数及UPMGA聚类图分析了分离菌株的遗传稳定性,分析表明遗传变异是绝对的,而稳定性是相对的。本研究摸索出了一套松乳菇及其分离菌株DNA的高效提取方法,为松乳菇分离菌株的鉴别分析找到了一个便捷而又科学的新途径,并为松乳菇在分子生物学方面的进一步研究提供了参考和依据。
【学位授予单位】:中南林学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S646

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【参考文献】
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