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板栗组织培养及褐变研究

罗丽华  
【摘要】:本实验以板栗品种韶十八为主要材料,其余十个品种作为辅助研究材料,通过组织培养技术,利用不同品种、不同外植体部位的板栗,研究板栗愈伤组织诱导、继代培养和植株再生的适宜培养基。结果表明,不同的品种适宜培养基不同,韶十八的适宜培养基为WPM+6-BA_(0.5)+NAA_(0.2),以其胚培养诱导率较高,成愈率为79.5%。 由于板栗单宁含量很高,故在板栗组织培养过程(无论是初代培养还是继代培养)中,外植体都易发生褐变,导致培养物生理功能衰退,严重阻碍了板栗组织培养的正常进行。本文以韶十八愈伤组织为材料,对板栗外植体褐变相关的生理因子及影响因素进行了系统研究,目的在于了解减轻板栗褐变的有效措施,从理论上认识外植体组织褐变;通过研究各因素对褐变的影响,找到影响褐变的主导因子,以及减轻褐变的有效方法,以期为板栗褐变提供理论依据和技术支持。本试验通过研究不同浓度不同种类的抗褐变剂、不同浓度的AgNO_3、不同光照条件、不同温度、不同pH值对愈伤组织褐变的影响,研究了各个因素对褐变程度的影响,结果表明:在6g.L~(-1)PVP、10mg.L~(-1)AgNO_3、前期暗处理、19℃、pH值为5.8~6.0条件下培养,有利于减轻褐变。另外,对不同品种不同材料的过氧化物同工酶谱进行研究,可以看出不同品种之间的亲缘关系,以及不同材料的分化程度。 本文对褐变的机理进行初步研究,分别统计和测定培养期间褐变率、PPO活性、POD活性,研究培养过程中酶的活性变化与外植体褐变的关系,结果表明:板栗组织培养过程中,PPO活性与褐变存在显著的相关关系,PPO活性高的处理其褐变率也较高,POD活性与褐变之间无相关性。试验研究不同伤害程度与愈伤组织总酚含量之间的关系,发现褐变不仅是因为原有的酚类与PPO反应,而且由于伤害作用产生了新的酚类化合物,从而加剧了褐变。


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