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《南华大学》 2007年
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STGC3基因高表达对Daudi细胞系生长增殖影响的研究

肖建忠  
【摘要】: 目的:鼻咽癌相关新基因STGC3是一候选抑癌基因,在Burkitt氏淋巴瘤表达下调,推测STGC3基因表达的改变,可能参与了淋巴瘤的发生发展。本实验在前期研究工作的基础上,采用电穿孔基因转染技术,将STGC3基因导入Daudi细胞系,探讨STGC3高表达,对Burkitt氏淋巴瘤Daudi细胞系生长增殖的影响,为进一步阐明Burkitt氏淋巴瘤发病机理提供实验依据。 方法:应用电穿孔基因转染技术,将pCDNA3.1(+)/STGC3真核表达载体导入Daudi细胞系,经G418筛选,挑选阳性克隆,Western blotting方法,检测转染细胞中STGC3的蛋白表达,建立高表达STGC3基因的Daudi细胞系;通过转基因细胞系生长曲线绘制、软琼脂集落形成、流式细胞仪检测、免疫组织化学及HE染色等方法检查,分析STGC3基因高表达,对转基因Daudi细胞倍增时间、增殖速度、集落形成率、细胞周期及凋亡的影响。 结果:在转染STGC3基因的Daudi细胞系中,Western blotting检测证实,STGC3的蛋白表达水平显著增高,免疫细胞化学结果显示STGC3定位于Daudi细胞的胞浆与胞核。与未转染的Daudi细胞及转染空载体质粒的Daudi细胞相比,转染STGC3的Daudi细胞增殖速度明显减慢(P0.05),克隆形成率显著减低(P0.01);流式细胞仪检测结果显示,瘤细胞群体中处于G0/G1期细胞数增加,S期比例下降,细胞阻滞于G0/G1期。 结论 1.成功建立高表达STGC3基因的Daudi细胞系 2. STGC3基因高表达能使Daudi细胞在体外生长速度减慢,细胞群体倍增时间延长,且软琼脂集落形成率明显降低,证明STGC3基因表达增强对Daudi细胞增殖能力具有一定的抑制作用。 3. STGC3基因高表达通过将Daudi细胞阻滞于G0/G1期,进而在调控细胞周期方面发挥重要作用。
【学位授予单位】:南华大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R733.1

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【参考文献】
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