重金属污染生物标志物—金属硫蛋白检测新方法及其应用

【摘要】： 金属硫蛋白(Metallothioneins,MTs)富含半胱氨酸,是一类低分子量、易被金属诱导的特异蛋白质。它是一种重金属污染暴露生物标志物,生物学功能非常广,涉及必需金属元素的贮存、解除重金属的毒性、清除自由基等,已成为当今研究的热门课题。目前尚无检测MTs的标准方法,而现有检测方法存在操作复杂繁琐,仪器设备要求高,难于推广应用等缺点。因此,研究准确快速检测MTs的新方法具有重要意义。 本文用共振光散射技术建立了检测MTs的三种新方法: 1.研究了MTs-AR-SDBS体系,建立了茜素红共振光散射法检测MTs的新方法。在pH2.5 BR缓冲溶液中及十二烷基苯磺酸钠存在下,体系的共振光散射强度随着MTs的加入在505nm处急剧增强,且增强的强度与MTs加入量成线性关系,线性范围为0.0600~16.5μg/ml,相关系数为0.9994,检出限为19.05ng/ml,平均加标回收率为88.9%。方法简便、灵敏、选择性好,已用于实际样品中MTs的检测,结果满意。 2.研究了MTs-Hg(II)-KI-PVA-XO体系,用共振光散射技术建立了检测MTs的新方法。在pH2.5的缓冲溶液中,非离子表面活性剂聚乙烯醇-124存在下,体系在505nm处共振光散射增强最大,且共振光散射增强的强度与MTs的加入量成线性关系,检出限21.58ng/ml,线性范围0.072~6.3μg/ml,相关系数0.9949,相对标准偏差3.67%~5.61%,平均回收率91.0% (n=6)。该方法用于加标样品测定,结果满意。 3.研究了MTs-LGSF体系的共振光散射光谱,建立了LGSF RLS增强定量检测尿样中MTs的分析方法。在pH2.5 BR缓冲溶液中及468nm波长处, MTs-LGSF体系的RLS增强值(?I)与MTs的浓度(CMTs)有良好的线性关系。线性范围0.052~5.0μg/ml,相关系数0.9992,方法检出限15.50 ng/ml,相对标准偏差1.01%～5.15%(n=9),平均加标回收率92.7%。该方法最突出的特点是简便、灵敏、准确、易于推广,用于加标样品测定结果较准确。 用本文建立的茜素红共振光散射法和石墨炉原子吸收分光光度法分别测定了不同环境人群尿中MTs和Cd的含量。本实验发现,职业暴露人群组与对照组尿中Cd和MTs都有显著性差异(P0.001),并且尿Cd与尿MTs呈直线相关关系(r=0.585,P 0.001)。因此,尿MTs在重金属污染环境风险评价中具有重要意义。