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《南华大学》 2010年
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Adipophilin通过ERK1/2-PPARγ途径促进细胞内脂质蓄积

刘清南  
【摘要】: 目的通过观察Ox-LDL孵育RAW264.7细胞不同时间后PPARγ和adipophilin表达和ERK1/2活性及细胞内脂质蓄积的变化、观察ERK1/2抑制剂或PPARγ抑制剂/激动剂预处理细胞后细胞内上述指标的变化、观察稳定高表达adipophilin和沉默adipophilin基因的RAW264.7细胞株细胞内上述指标的变化,探讨adipophilin是否通过ERK1/2-PPARγ信号途径促进细胞内的脂质蓄积,阐明adipophilin促进泡沫细胞形成的机制。 方法用50μg/ml Ox-LDL孵育细胞不同时间后,分别用半定量RT-PCR和Western印迹检测adipophilin、PPARγ的mRNA和蛋白表达的变化,以Western印迹检测ERK1/2及其磷酸化;用ERK1/2抑制剂预孵育细胞2 h,再与50μg/ml Ox-LDL共孵育24 h后,检测细胞内上述指标的变化;用PPARγ抑制剂或激动剂预孵育细胞2 h,再与50μg/ml Ox-LDL共孵育24 h后,检测细胞内上述指标的变化;构建稳定高表达adipophilin和沉默adipophilin的RAW264.7细胞株,检测这两种细胞与50μg/ml Ox-LDL共孵育24 h后细胞内的脂质蓄积情况,分别用半定量RT-PCR和Western印迹检测adipophilin、PPARγ的mRNA和蛋白表达的变化,以Western印迹对与动脉粥样硬化发病有关的ERK1/2及其磷酸化进行检测。 结果随着RAW264.7细胞荷脂时间的延长,胞浆内脂滴的数量、adipophilin和PPARγ的mRNA与蛋白表达明显增加,磷酸化的ERK1/2也增加;而ERK1/2的抑制剂能减少胞浆内的脂滴数量,adipophilin、PPARγ的mRNA与蛋白表达也下调,磷酸化的ERK1/2减少;给予PPARγ的激动剂处理后,胞浆内脂滴数量、adipophilin、PPARγ的mRNA与蛋白表达增加,ERK1/2被活化,而用PPARγ的抑制剂处理后,上述指标则呈现相反的变化;在荷脂情况下,稳定高表达adipophilin的细胞中脂质蓄积明显增加,PPARγ和磷酸化的ERK1/2下调,沉默adipophilin的细胞中脂质蓄积则减少,而PPARγ和磷酸化ERK1/2反而上调。 结论Ox-LDL能活化ERK1/2,抑制ERK1/2的活性能抑制Ox-LDL诱导的adipophilin和PPARγ的表达,并进一步抑制脂质蓄积;PPARγ激动剂能增加adipophilin的表达和细胞内的脂质蓄积,而其抑制剂的作用则相反;高表达adipophilin能降低RAW264.7细胞PPARγ的表达和ERK1/2的活性,并能促进细胞内脂质蓄积,这些作用可被adipophilin siRNA逆转。结果表明,adipophilin与泡沫细胞的形成有关,adipophilin可能是通过ERK1/2-PPARγ途径促进细胞内脂质蓄积。
【学位授予单位】:南华大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R363

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【参考文献】
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