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《湖南中医药大学》 2010年
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急性心肌梗死心血瘀阻证BMSCs动员归巢的机理及养心通脉有效部位方干预的研究

李勇华  
【摘要】:目的 探讨急性心肌梗死(AMI)心血瘀阻证骨髓间充质干细胞(BMSCs)动员归巢的机理及养·心通脉有效部位方(apr-YTF)对BMSCs动员以及归巢于AMI心血瘀阻证梗死心肌的影响。 方法 1.AMI心血瘀阻病机及BMSCs动员归巢的文献研究:系统研究古今文献,了解AMI心血瘀阻的病因病机、辨证特点,了解BMSCs动员归巢以及中药干预的现状。 2.AMI心血瘀阻证BMSCs动员的临床研究:收集AMI心血瘀阻证、非心血瘀阻证患者及正常人各15例,运用流式细胞仪检测外周血CD34+细胞数,血流变仪检测血液流变学指标,ELISA的方法检测血清血管内皮生长因子(VEGF)。综合比较各组间指标的差异,探讨CD34+细胞数与血液流变学及VEGF之间相关性。 3.养心通脉有效部位方促BMSCs归巢对急性心肌梗死心血瘀阻证影响的实验研究: (1)将造模成功的AMI心血瘀阻证大鼠分为模型组、空白对照组、重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)组和apr-YTF组,分别给予BMSCs以及相应药物心肌注射,常规HE染色检测梗死心肌病理,免疫组化检测缝隙连接蛋白43(Cx43),RT-PCR检测心脏早期发育基因NKx2.5,用以探讨apr-YTF对BMSCs移植大鼠AMI心血瘀阻证梗死心肌的影响。 (2)将造模成功的AMI心血瘀阻证大鼠分为模型组、香丹注射液组、rhG-CSF组和apr-YTF组,分别予以相应药物及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)的腹腔注射,应用PcLab生物医学信号采集处理系统测量各组大鼠在体心功能;masson's三色染色观测心肌组织的病理变化、心室肌瘢痕面积百分比、瘢痕毛细血管数;流式细胞仪检测外周血CD34‘细胞数;免疫组化检测心肌组织中CD34+细胞数,Brdu与心肌肌钙蛋白I (cTn I)双染阳性细胞数,Ⅷ因子、VEGF、血管内皮生长因子受体(Flk-1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的含量。综合分析探讨apr-YTF对BMSCs动员入血、定向归巢并转化为心肌细胞的影响,apr-YTF通过BMSCs动员归巢而对AMI心血瘀阻证大鼠梗死心肌心功能、心肌组织形态变化、血管新生及相关细胞因子分泌的影响。 结果 1.文献研究:现代文献中大大拓展了AMI心血瘀阻的病因病机、相关脏腑认识,认为AMI有心血瘀阻的基本病理,最主要的证候是气虚血瘀。BMSCs治疗AMI有美好前景,其动员归巢至关重要。 2.临床研究:AMI心血瘀阻证组的血液流变学指标、血液CD34+细胞数及VEGF与健康对照组、非心血瘀阻证组比较,差异有显著性意义。AMI非心血瘀阻证组与健康对照组比较,主要指标的差异亦有显著性意义。AMI心血瘀阻证组血液流变学主要指标与CD34+细胞数呈负相关,心血瘀阻证组与非心血瘀阻证组的血液CD34+细胞数与VEGF均呈正相关。表明AMI心血瘀阻证虽有一定的BMSCs动员入血,但心血瘀阻病理能明显阻碍BMSCs动员入血及其定向归巢,BMSCs的动员归巢需要良好的“微环境”,改善心血瘀阻可能是创造这个环境的途径。 3.实验研究 (1)通过apr-YTF对BMSCs移植大鼠AMI心血瘀阻证梗死心肌影响的研究表明:apr-YTF组动物的梗死心肌恢复最好,梗死区内炎性细胞少,梗死区与非梗死区界限不明显,有新生毛细血管;心肌细胞Cx43阳性着色颗粒呈分散样改变,不仅仅分布于端端连接的闰盘区域,而且还分布在侧侧连接的胞膜上,甚至心肌细胞内亦有淡棕黄色的细颗粒,apr-YTF组的IOD值最高;各组NKx2.5均有一定水平的表达,apr-YTF组表达最强,而模型组则只有极弱的表达。说明益气活血的apr-YTF能改善AMI心血瘀阻病机,促进移植归巢的BMSCs存活,改善梗死心肌的病理,促进修复。 (2)通过apr-YTF动员BMSCs归巢治疗大鼠AMI心血瘀阻证的疗效研究表明:apr-YTF能提高血液和心肌CD34+细胞数、心肌Brdu与cTn I双染阳性细胞数,说明其能促进BMSCs动员入血、定向归巢并转化为心肌细胞;apr-YTF能改善AMI心血瘀阻证大鼠梗死心肌心功能,缩小心室瘢痕面积,增加瘢痕血管新生及增加相关细胞因子(Ⅷ因子、Flk-1、VEGF、bFGF)的分泌,说明apr-YTF是通过改善AMI心血瘀阻微环境来促使BMSCs动员归巢的。 结论 1.AMI有心血瘀阻的基本病理。 2.AMI心血瘀阻病理能阻碍BMSCs动员入血及其定向归巢,BMSCs的动员归巢需要良好的微环境,改善心血瘀阻可能是创造这个环境的途径。 3.apr-YTF能改善AMI心血瘀阻微环境,促进BMSCs动员归巢,促进移植归巢的BMSCs存活,从而改善梗死心肌的功能,促进修复。
【学位授予单位】:湖南中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R259

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