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《湖南中医药大学》 2010年
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阳和汤体外对成骨细胞的增殖作用及对破骨细胞的分化影响

王云丹  
【摘要】:目的 探讨阳和汤大鼠含药血清对成骨细胞及破骨细胞的作用,为临床应用阳和汤治疗骨转移瘤提供理论依据,同时也为中医温阳抗癌提供理论依据。 方法 1.取SD大鼠20只,分为对照组、阳和汤高、中、低剂量四个组,分别用高(生药含量约1.6g/ml)、中(0.56g/ml)、低(0.18g/ml)剂量阳和汤药给SD大鼠灌胃,对照组灌同等剂量蒸馏水,制备高、中、低剂量阳和汤含药血清及对照组空白血清。2.分离大鼠成骨细胞,传代培养细胞株UMR106、RAW264.7,诱导因子M-CSF和RANK-L诱导RAW264.7分化形成破骨细胞。3.MTT法检测经不同含药血清作用后成骨细胞、成骨细胞株、及破骨前体细胞株的增殖情况,以及破骨细胞(TRAP)酶活性测定。取原代成骨细胞,成骨细胞株UMR106,破骨前体细胞RAW264.7接种到培养板中,加入不同含药血清,分别检测不同浓度含药血清组24h、48h、72h时间段细胞的OD值。诱导因子M-CSF和RANK-L诱导RAW264.7分化形成破骨细胞的过程中,加入不同含药血清,在诱导的第4、5、6天,逐日进行TRAP酶活性测定。 结果 1.成功获取含药血清,并将其作用原代成骨细胞、细胞株UMR106、细胞株RAW264.7及诱导过程中的破骨细胞。2.成功分离培养原代成骨细胞,传代培养细胞株UMR106、RAW264.7,诱导出破骨细胞。3.MTT法发现,OD值与含药血清浓度有关,还与作用时间有关。阳和汤含药血清中剂量、高剂量组在24h、48h、72h都能够明显提高原代成骨细胞OD值,低剂量组在48h、72h也能明显提高细胞的OD值,与空白组比较差异有显著统计学意义(P0.01或P0.05);阳和汤低、中、高剂量组在24h、48h、72h均能显著提高细胞株UMR106的OD值,与空白组比较差异有显著统计学意义(P0.01或P0.05);阳和汤低、中、高剂量组对破骨前体细胞RAW264.7的OD值表现出降低趋势,是在整体上升的趋势下略有降低,说明细胞并未死亡,表现出轻微的抑制作用,但与空白组比较差异无显著性(P0.05);阳和汤高、中、低剂量组对诱导破骨细胞的过程中TRAP酶活性的测定也无统计学意义(P0.05),其表明阳和汤含药血清在体外可能无明显抑制破骨细胞生成的作用。 结论 根据原代成骨细胞,细胞株UMR106和细胞株RAW264.7增殖的测定,以及破骨细胞TRAP酶活的测定结果,显示了阳和汤含药血清对成骨细胞的增殖具有显著促进作用,但对破骨前体细胞的抑制作用无统计学差异,同时对阻碍破骨前体细胞向破骨细胞分化的过程未见有统计学差异。
【学位授予单位】:湖南中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R285

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