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脑泰方血清和血浆蛋白质(肽)组学研究

王国佐  
【摘要】:目的:通过对脑泰方含药血清和含药血浆蛋白质(肽)组学的比较研究,发现脑泰方含药血清和含药血浆中的差异蛋白(肽);以质谱分析技术确定差异蛋白的特征。从而为探索脑泰方的药效物质基础和发展中药血浆药理学方法提供科学依据。 方法:1.取健康成年SD大鼠20只,按体重随机分为空白组、脑泰方给药组,每组10只,连续灌胃给药7天。手术前12h禁食不禁水,末次给药后1小时,用10%水合氯醛腹腔麻醉,经颈总动脉插管取血。每只大鼠采血后分别制备血清和血浆。 2.每组随机抽取5只大鼠的血清及血浆,采用2-DE技术进行蛋白质(肽)组学比较研究;采用ESI-MS/MS对重要差异蛋白质点进行鉴定,筛选脑泰方血清和血浆差异蛋白的特征。 结果:通过2-DE电泳获得蛋白胶图20张,分别是空白血清、空白血浆、脑泰方含药血清、脑泰方含药血浆各5张;运用300DPI扫描、PDQuest 7.3.0软件进行胶图比对,得到664个蛋白位点,进一步分析各组差异蛋白位点如下: 1.与空白血浆组比较,脑泰方血浆样品中共识别到20个差异蛋白点,其中15个差异点表达上调,5个差异点表达下调。 2.与空白血清组比较,脑泰方血清样品中共识别到19个差异蛋白点,其中15个差异点表达上调,4个差异点表达下调。 3.与脑泰方血浆组比较,脑泰方血清样品中共识别到24个差异蛋白点,其中9个差异点表达上调,15个差异点表达下调。 4.与空白血清组比较,空白血浆样品中共识别到7个差异蛋白点,其中4个差异点表达上调,3个差异点表达下调。 5.选取在脑泰方血浆组和脑泰方血清组中高表达的10个差异蛋白质点进行MALDI-TOF-MS,成功鉴定了6个蛋白,分别是:inter-alpha trypsin inhibitor,heavy chain 3、Group specific component、complement factor B、Receptor Complexed With A Heterodimeric Fc、complement factor B, isoform CRA-d、Transferrin。 结论:脑泰方含药血浆、血清中明显变化的蛋白质可能与其抗凝血促纤溶作用机制相关,这些蛋白参与血管新生、炎症调控等病理生理过程,对研究脑泰方作用的可能有效靶点及其信号转导通路意义重大。


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