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《湖南中医药大学》 2011年
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丹参酮Ⅱa、川芎嗪联合体外诱导BMSCs分化为心肌样细胞的研究

李玉冰  
【摘要】:骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)是存在于骨髓中除造血干细胞外的另一种干细胞,能够自我复制、自我更新并具有多向分化潜能。其具有取材方便、易于分离和体外培养扩增,免疫原性低,能分化为心肌细胞,内皮细胞和血管平滑肌细胞等诸多优势,成为治疗心脏疾患极有前景的种子细胞。因此,研究BMSCs在特定条件下分化为心肌样细胞对细胞移植治疗心肌梗死具有重要的理论及临床意义。近年有很多文献报导中药有效成分可以诱导BMSCs向心肌样细胞分化,其中加味丹参饮中的两个主要成分丹参、川芎的有效成分(丹参酮Ⅱa、川芎嗪)均被多次报道具有诱导BMSCs向心肌样细胞分化的作用。 目的:探讨加味丹参饮的两个有效部位群(单体):丹参酮Ⅱa、川芎嗪联合体外诱导BMSCs向心肌样细胞分化的作用。 方法: 1.SD大鼠BMSCs的体外分离、纯化和扩增,建立成熟而稳定的BMSCs培养体系。 2.分别测定丹参酮Ⅱa、川芎嗪的最大无毒浓度。按两者的最大无毒浓度配比,确定两者联合诱导的剂量。 3.实验BMSCs分五组进行诱导:丹参酮Ⅱa组、川芎嗪组、丹参酮Ⅱa+川芎嗪组、5-aza组、正常对照组。免疫组化方法观察体外诱导后BMSCs缝隙连接蛋白Cx43,酶联免疫法监测肌钙蛋白含量变化。 结果: 1.联合贴壁法所获取的BMSCs纯度较高,表面抗原CD11 b和CD45阳性细胞率均达到98%以上,CD90阳性率小于2%(图1)。结果显示细胞均一性较好,纯度较高,符合实验要求。 2.MTT法检测丹参酮Ⅱa药物浓度低于0.01g/L、川芎嗪药物浓度低于0.039g/L为其最大无毒浓度。 3.诱导后在正常对照组中未发现Cx43阳性细胞。5-aza组、川芎嗪组、丹参酮Ⅱa组及川芎嗪+丹参酮Ⅱa组Cx43免疫组化染色均可见弱阳性免疫复合物,阳性细胞呈梭形和多角细胞样形态,呈集落样分布。其表达的OD值在5-aza组和川芎嗪+丹参酮Ⅱa组均高于川芎嗪组和丹参酮Ⅱa组(P0.05);但是前两者之间无统计学差异。 4.各组间肌钙蛋白酶联免疫吸附法检测显四组间均有差异,川芎嗪+丹参酮Ⅱa组高于其他三组(P0.05)。 结论:川芎嗪联合丹参酮Ⅱa可以诱导BMSCs向心肌方向转化,进而表达缝隙连接蛋白Cx43和肌钙蛋白。其表达强度高于单一成分。
【学位授予单位】:湖南中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285.5

【引证文献】
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【同被引文献】
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