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《湖南中医药大学》 2011年
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巴戟天加工炮制方法及工艺的研究

周灿  
【摘要】:目的:以巴戟天中游离蒽醌、结合蒽醌、多糖、水晶兰苷等主要成分为考察指标,采用紫外检测、HPLC等,比较六种不同的去心方法和四种炮制方法对主要成分的影响以优选出最佳去心方法和最佳炮制方法,继而在优选出最佳炮制方法的基础上,采用正交实验设计、紫外检测、HPLC等,优选出巴戟天最佳炮制工艺,从而为巴戟天去心、临床用药和药物制剂、巴戟天饮片质量标准的研究和规范化生产提供实验和参考依据。 方法: (1)巴戟天去心方法的比较研究:对不同去心方法的巴戟天进行质量检测;采用紫外分光光度法测定不同去心方法的巴戟天中游离蒽醌、结合蒽醌的含量,并进行方法学考察。测定方法为:采用UV-9200紫外分光计(北京瑞利),以1,8-二羟基蒽醌为对照,0.5%醋酸镁-甲醇溶液作参比,检测波长:498nm;采用改进的硫酸-苯酚法和紫外分光光度法测定不同去心方法的巴戟天中多糖的含量,并进行方法学考察。测定方法为:吸取样品溶液1.0mL置具塞试管中,加入1.0mL6%苯酚溶液,再垂直快速加入浓硫酸5.0mL,摇匀,放置5min,沸水浴15min,流水速冷至室温;以D-无水葡萄糖为对照,1mL蒸馏水平行操作,检测波长:495nm;采用高相液相色谱法(HPLC法)测定不同去心方法的巴戟天中水晶兰苷的含量,并进行方法学考察。测定方法为:Agilent1200高效液相色谱仪,色谱柱为KromalsilC18柱(200mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.4%磷酸水溶液(90:10)为流动相,流速:1mL·min-1,检测波长:233nm,柱温:30℃,进样量5μL;采用综合评价指数M=ΣXy·Pj优选巴戟天去心方法。 (2)巴戟天炮制方法的比较研究:对不同炮制方法的巴戟天进行质量检测;采用紫外分光光度法测定不同炮制方法的巴戟天中游离蒽醌、结合蒽醌的含量,并进行方法学考察。测定方法为:采用UV-9200紫外分光计(北京瑞利),以1,8-二羟基蒽醌为对照,0.5%醋酸镁-甲醇溶液作参比,检测波长:498nm;采用改进的硫酸-苯酚法和紫外分光光度法测定不同炮制方法的巴戟天中多糖的含量,并进行方法学考察。测定方法为:吸取样品溶液1.0mL置具塞试管中,加入1.0mL6%苯酚溶液,再垂直快速加入浓硫酸5.0mL,摇匀,放置5min,沸水浴15min,流水速冷至室温;以D-无水葡萄糖为对照,1mL蒸馏水平行操作,检测波长:495nm;采用高相液相色谱法(HPLC法)测定不同炮制方法的巴戟天中水晶兰苷的含量,并进行方法学考察。测定方法为:Agilent 1200高效液相色谱仪,色谱柱为KromalsilC,8柱(200mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.4%磷酸水溶液(90:10)为流动相,流速:1mL·min-1,检测波长:233nm,柱温:30℃,进样量5μL;采用综合评价指数M=ΣXy·Pj优选巴戟天炮制方法。 (3)制巴戟天炮制工艺的比较研究:对不同工艺的巴戟天进行质量检测;采用紫外分光光度法测定不同工艺的巴戟天中游离蒽醌、结合蒽醌的含量,并进行方法学考察。测定方法为:采用UV-9200紫外分光计(北京瑞利),以1,8-二羟基蒽醌为对照,0.5%醋酸镁-甲醇溶液作参比,检测波长:498nm;采用改进的硫酸-苯酚法和紫外分光光度法测定不同工艺的巴戟天中多糖的含量,并进行方法学考察。测定方法为:吸取样品溶液1.0mL置具塞试管中,加入1.0mL6%苯酚溶液,再垂直快速加入浓硫酸5.0mL,摇匀放置5min,沸水浴15min,流水速冷至室温;以D-无水葡萄糖为对照,1mL蒸馏水平行操作,检测波长:495nm;采用高相液相色谱法(HPLC法)测定不同工艺的巴戟天中水晶兰苷的含量,并进行方法学考察。测定方法为:Agilent 1200高效液相色谱仪,色谱柱为KromalsilC18柱(200mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.4%磷酸水溶液(90:10)为流动相,流速:1mL·min-1检测波长:233nm,柱温:30℃,进样量5μL;采用正交设计实验法对制巴戟天工艺的主要影响因素甘草用量、拌炒时间、煮制温度等工艺条件进行优选。 结果: (1)巴戟天去心方法的比较研究:各制备样品的水分含量(15.0%)、总灰分含量(6.0%)、酸不容性灰分(0.8%)、浸出物含量(50.0%)均达到国家规定标准。紫外分光光度法测定不同去心方法的巴戟天中游离蒽醌、结合蒽醌的含量,其线性关系考察显示1,8-二羟基蒽醌浓度在0.004-0.028mg·mL-1呈良好的线性关系,回归方程为:y=43.696x+0.0197(r=0.9996);精密度实验结果表明精密度良好,RSD=0.44%;稳定性实验表明稳定性良好,RSD=0.62%;重复性实验表明重复性良好,RSD=1.4%、1.3%;加样回收率实验表明其加样回收率符合规定,平均回收率为99.95%、99.99%。紫外分光光度法测定不同去心方法的巴戟天中多糖的含量,其线性关系考察显示D-无水葡萄糖浓度在0.002-0.018mg·mL-1呈良好的线性关系,回归方程为:y=54.725x-0.0125(r=0.9999);精密度实验结果表明精密度良好,RSD=0.74%;稳定性实验表明稳定性良好,RSD=0.60%;重复性实验表明重复性良好,RSD=0.89%;加样回收率实验表明其加样回收率符合规定,平均回收率为99.90%。高效液相色谱法测定不同去心方法的巴戟天中水晶兰苷的含量,其线性关系考察显示水晶兰苷进样量在1.0~25μg·mL-1与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为:y=202.69x+4.0095(r=0.999);精密度实验结果表明精密度良好,RSD=1.1%;稳定性实验表明稳定性良好,RSD=0.12%;重复性实验表明重复性良好,RSD=4.8%;加样回收率实验表明其加样回收率符合规定,平均回收率为90.68%。综合评价指数M显示,巴戟天去心方法的优劣依次为:煮法润法盐蒸法泡法泡后蒸法清蒸法。 (2)巴戟天炮制方法的比较研究:各制备样品的水分含量(15.0%)总灰分含量(6.0%)、酸不容性灰分(0.8%)、浸出物含量(50.0%)均达到国家规定标准。紫外分光光度法测定不同炮制方法的巴戟天中游离蒽醌、结合蒽醌的含量,其重复性实验表明重复性良好,RSD=0.7%、0.43%;加样回收率实验表明其加样回收率符合规定,平均回收率为99.90%、99.98%。紫外分光光度法测定不同去心方法的巴戟天中多糖的含量,其重复性实验表明重复性良好,RSD=0.67%;加样回收率实验表明其加样回收率符合规定,平均回收率为99.96%。高效液相色谱法测定不同去心方法的巴戟天中水晶兰苷的含量,其重复性实验表明重复性良好,RSD=3.9%;加样回收率实验表明其加样回收率符合规定,平均回收率为91.02%。综合评价指数M显示,巴戟天炮制方法的优劣依次为:制巴戟天酒巴戟天盐巴戟天巴戟肉。 (3)制巴戟天炮制工艺的比较研究:各制备样品的水分含量(15.0%)、总灰分含量(6.0%)、酸不容性灰分(0.8%)、浸出物含量(50.0%)均达到国家规定标准。紫外分光光度法测定不同工艺的巴戟天中游离蒽醌、结合蒽醌的含量,其重复性实验表明重复性良好,RSD=0.99%、0.35%;加样回收率实验表明其加样回收率符合规定,平均回收率为99.91%、100.1%。紫外分光光度法测定不同工艺的巴戟天中多糖的含量,其重复性实验表明重复性良好,RSD=0.60%;加样回收率实验表明其加样回收率符合规定,平均回收率为98.33%。高效液相色谱法测定不同工艺的巴戟天中水晶兰苷的含量,其重复性实验表明重复性良好,RSD=0.32%;加样回收率实验表明其加样回收率符合规定,平均回收率为92.40%。采用正交实验设计优选制巴戟天炮制工艺为:A3B3C1,即甘草用量为8%,拌炒时间为15min,煮制温度为100℃。 结论:通过对不同去心方法、炮制方法对巴戟天中游离蒽醌、结合蒽醌、多糖和水晶兰苷等成分的影响进行综合评价,优选了巴戟天的最佳去心方法为煮法,但由于煮法也属于炮制方法范畴,因此其最佳去心方法为润法;优选了巴戟天的最佳炮制方法,但并不能否定其他炮制方法的科学性和实用性;优选了制巴戟天的最佳炮制工艺,从而为巴戟天去心、临床用药和药物制剂、巴戟天饮片质量标准的研究和规范化生产提供实验和参考依据。
【学位授予单位】:湖南中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R283

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【参考文献】
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