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《湖南中医药大学》 2011年
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益气化瘀方对药物流产及产后炎症模型大鼠子宫复旧不全干预作用实验研究

曾晶  
【摘要】:目的: 1.从激素调节、血管再生、血管收缩、胶原降解以及相关药效进行综合考察,探讨益气化瘀方治疗药物流产模型大鼠产后子宫复旧不全的机理。 2.从炎症因子、激素调节、血小板聚集、胶原降解以及相关药效进行综合考察,探讨益气化瘀方治疗产后炎症模型大鼠产后子宫复旧不全的机理。 方法: 第一部分益气化瘀方对药物流产后大鼠模型子宫复旧不全干预作用的实验研究 采用SD清洁级大白鼠,制作药物流产模型,并将药物流产模型大鼠随机分为5组:分别为模型组、产妇康组、益气化瘀低剂量组、益气化瘀中剂量组、益气化瘀高剂量组、以及正常妊娠组大鼠。灌胃7天后剖腹取子宫,光镜形态学观察,统计阴道流血量。应用放射免疫法检测大鼠血清中E2、P含量;应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中TNF-α、t-PA含量;应用药盒法测定大鼠血清中NO.NOS的含量;应用免疫组化法测定大鼠子宫组织中ER. PR的蛋白含量;应用原位杂交法检测大鼠子宫组织中MMP-9. TIMP-1基因的表达。 第二部分益气化瘀方对产后炎症大鼠模型子宫复旧不全的干预作用的实验研究 采用SD清洁级大白鼠,制作产后子宫内膜炎模型,并将产后炎症模型大鼠随机分为5组:分别为模型组、产妇康组、益气化瘀低剂量组、益气化瘀中剂量组、益气化瘀高剂量组、以及正常产后组大鼠。从产后第一天开始灌胃给予中药益气化瘀方和产妇康颗粒。灌胃七天后剖腹取子宫,光镜病理形态学观察,统计阴道流血量。应用放射免疫法检测大鼠血清中E2.P.6-K-PGF1-αTxB2含量;应用(ELISA)测定大鼠血清中TNF-α含量;应用药盒法测定大鼠子宫组织中NO. NOS的含量;应用免疫组化法测定大鼠子宫组织中IL-1的蛋白含量;应用原位杂交法检测大鼠子宫组织中MMP-9.TIMP-1基因的表达。 结果 第一部分益气化瘀方对药物流产后大鼠模型子宫复旧不全的干预作用的实验研究 1.光镜形态学观察显示:①空白对照组子宫组织基本正常,未见淋巴细胞、巨噬细胞浸润,间质血管内皮细胞完整;②模型组宫腔内孕囊完全排出,上皮脱落坏死,内膜连续性中断,有少量炎性细胞浸润,内膜下小血管部分扩张、充血,间质较疏松水肿;③产妇康及益气化瘀低、中、高剂量组内膜上皮轻度损伤,内膜炎性细胞较少,偶可见小血管扩张、充血;间质较致密,宫腔中未见明显渗液。 2.药物流产后,与空白组比较,模型组大鼠全血高、中切变率及血浆粘度均升高(P0.01),tPA水平异常升高(P0.05),TNF-α水平无明显改变(P0.05)。与模型组比较,益气化瘀方各组及产妇康组能降低全血切变率及血浆粘度(P0.05),降低tPA水平(P0.05)。益气化瘀方各组与产妇康组比较无统计学意义(P0.05)。 3.药物流产后,益气化瘀方各组子宫出血量少于模型组(P0.01)。模型组中雌激素、孕激素水平降低、雌孕激素受体蛋白低表达。益气化瘀各组中雌激素水平升高,孕激素水平降低,雌孕激素受体蛋白表达均升高(P0.05),益气低、中组与产妇康组比较差异无统计学意义(P0.05),益气高组与产妇康组比较差异有统计学意义(P0.05)。 4.药物流产后,模型组大鼠血清中NO、NOS含量异常升高,与模型组比较,益气化瘀方组能明显减低药物完全流产大鼠血清中NO、NOS含量(P.0.05),与产妇康组比较差异无统计学意义(P0.05) 5.药物流产后,大鼠子宫组织局部MMP-9mRNA异常低表达、TIMP-1mRNA异常高表达。益气化瘀方各组能升高MMP-9mRNA低表达(P0.05),降低TIMP-1mRNA高表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05),益气高组与产妇康组比较差异有统计学意义(P0.05) 第二部分益气化瘀方对产后炎症大鼠模型子宫复旧不全的干预作用的实验研究 1.光镜形态学观察提示:①空白对照组即正常产后大鼠,子宫内膜组织基本正常,细胞轻度水肿,间质偶见淋巴细胞浸润,未见巨噬细胞,间质血管内皮细胞完整;②模型组,上皮脱落坏死,内膜连续性中断,有大量炎性细胞浸润,内膜下小血管部分扩张、充血,间质较疏松水肿;③产妇康及益气化瘀高剂量组:内膜上皮轻度损伤,炎性细胞较少,偶而可见小血管扩张、充血,宫腔中未见明显渗液。④益气化瘀低、中剂量组上皮损伤较模型组轻,较产妇康和妇高组严重。2.产后炎症时,模型组大鼠全血高、中、低切变率及血浆粘度较空白组升高(P0.01)。与模型组比较,益气化瘀方各组及产妇康组能降低全血切变率及血浆粘度(P0.05),益气化瘀方各组与产妇康组比较无统计学意义(P0.05) 3.产后炎症模型组大鼠血清中E2、P含量降低。与模型组比较,益气化瘀方组和产妇康组组能明显升高产后炎症大鼠血清中E2、P水平(P0.05),益气化瘀方各组与产妇康组比较无统计学意义(P0.05)。 4.产后炎症大鼠血清中TXB2异常升高,6-K-PGF1α异常降低。与模型组比较,益气化瘀方组能明显减低产后炎症大鼠血清中TXB2水平,升高6-K-PGF1α水平(P0.05),益气化瘀方各组与产妇康组比较无统计学意义(P0.05)。 5.产后炎症模型组大鼠血清中TNF-α、NO、NOS含量升高;大鼠子宫组织局部IL-1蛋白存在异常高表达。与模型组比较,益气化瘀方和产妇康组能明显降低产后炎症大鼠血清中TNF-α、NO、NOS水平,降低子宫组织局部IL-1蛋白高表达(P0.05),益气化瘀高剂量组与产妇康组比较有统计学意义(P0.05)。 6.产后炎症模型组大鼠子宫组织局部MMP-9mRNA存在异常高表达、TIMP-1mRNA存在异常低表达。与模型组比较,益气化瘀方能降低MMP-9mRNA的高表达,升高TIMP-1mRNA的低表达(P0.05)。益气化瘀高剂量组与产妇康组比较有统计学意义(P0.05)。 结论: 1.导师认为产后子宫复旧不全临床表现以虚、血、痛为主;其中虚因产时耗气或胞宫因伤而虚;血系胞宫、及其脉络因伤,或气虚不固;痛由胞宫及其脉络因伤,或瘀血留滞、脉络不畅而痛。气虚血瘀是产后子宫复旧不全的基本病机,治疗以益气化瘀、扶正祛邪为法。导师临床自拟经验方益气化瘀方,益气与化瘀并重,用于气虚血瘀型产后或人流、药流、上环等计划生育手术后子宫复旧不全表现为恶露不绝或产后腹痛者,临床疗效好。 2.药物流产后血液处于瘀滞及高凝状态。药理研究证实:益气化瘀方可能通过①改善血液循环,抑制纤溶亢进;②调节药物流产后激素水平,促进子宫内膜增生修复;③抑制细胞毒性因子产生,调节MMP-9/TIMP-1比值平衡,促进血管再生,修复创面;④重塑子宫螺旋动脉,促进血管收缩,提高溶酶体膜的稳定性,从而达到促进产后子宫复旧的作用。 3.产后炎症时血液处于瘀滞状态。药理研究证实:益气化瘀方可能通过①改善血液循环;②调节产后炎症激素水平同步发展,促进子宫内膜增生修复;③抑制血小板聚集剂,促进血管收缩,防止血栓形成;④抑制炎症反应,降低血管内皮细胞损伤,促进血管内膜的形成,参与子宫血流的调节和子宫内膜的重建与修复重塑子宫螺旋动脉;⑤调节MMP-9/TIMP-1比值平衡,维持正常ECM降解和重建过程,促进子宫内膜完成修复,从而达到促进产后子宫复旧的作用。
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