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《湖南中医药大学》 2012年
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股骨头坏死愈胶囊治疗激素性股骨头坏死的实验及临床研究

刘立云  
【摘要】:实验一兔激素性股骨头坏死模型的诱导和观察 目的:制作激素性股骨头坏死动物模型,观察骨形态结构在低剂量脂多糖联合激素作用下的病理改变,从而探讨其发病机理。 方法:采用中国大耳白兔32只,随机分为两组。造模组采用小剂量LPS(6ug· kg-1,24h后重复给药一次)。在第2次注射后,立即臀肌注甲泼尼龙琥珀酸钠(30mg· kg-1,每次间隔24小时,共3次)。空白组于相同时间点注射等量生理盐水对照。于第4周和第8周各取6只实验兔行影像学检查(X线、CT、MRI),后处死行大体、组织病理学和电镜观察,同时观察各期标本空骨陷窝率和髓腔脂肪面积。 结果:①造模组X线显示股骨头密度不均匀,出现点状及线状低密度影;CT扫描显示股骨头出现囊状透亮区;MRI扫描显示股骨头出现片状混杂信号影。空白组均未见异常改变。②造模组HE染色显示骨小梁萎缩、稀疏、连续性中断,骨髓组织脂肪变性,空骨陷窝增多。空骨陷窝率4、8周分别为(13.42±1.21)%及(28.32±2.73)%,分别高于空白组的(10.54±2.60)%及(10.41±2.14)%,两组比较差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。髓腔脂肪面积4、8周分别为(218.43±32.41)um2及(236.30±34.78)um2,分别高于空白组的(180.33±24.75)um2及(178.80±21.82)um2,两组比较差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。 结论:①两次低剂量脂多糖联合甲泼尼龙诱导兔早期股骨头缺血性坏死模型是可行的。②该动物模型骨坏死区域位出现骨小梁萎缩、稀疏、连续性中断,空骨陷窝增多及髓腔脂肪面积增加,同人类激素性股骨头坏死病理改变相类似。 实验二股骨头坏死愈胶囊对兔激素性股骨头坏死组织形态学及血清IGF-1的影响 目的:从组织形态学和细胞因子水平,研究股骨头坏死愈胶囊对骨组织形态学及血清工GF-1含量的影响,探讨激素性股骨头坏死发病机制及股骨头坏死愈胶囊治疗激素性股骨头坏死的作用机理。 方法:将102只中国大耳白兔随机分为空白组,造模组,造模成功后分为4组。共为5组:空白组、模型组、股骨头坏死愈胶囊高(0.46g· kg-1· d-1)中(0.35g· kg-1· d-1)、低(0.23g·kg-1·d-1)三剂量组。药物组给予不同剂量药液灌胃,空白组和模型组每日清晨用等量生理盐水灌胃。连续给药,各组于第2、4、8周末分批取材观察:①HE染色及骨组织形态计量学观察。②血清中IGF-1含量水平。③测定骨细胞凋亡情况并分析。④治疗后影像学改变。 结果:①CT扫描显示低剂量组股骨头密度偶显不均匀,无明显囊性透亮区及斑块状低密度影。中、高剂量组关节面清晰,软骨下囊性变透亮区减小或消失。MRI扫描显示低剂量组股骨头在T,加权像、T2加权像及脂肪抑制像上均可见异常信号影轻微变细、变小。中、高剂量组各个加权像见信号均匀,片状或条带样信号混杂影明显减小和消失。②治疗后各时间相点,股骨头坏死愈胶囊各剂量组血清IGF-1含量均有不同程度提高。8周后高、中剂量组水平显著高于模型组,比较差异有显著统计学意义(P0.01)。高剂量组与中剂量组水平比较,差异有显著统计学意义(P0.05)。③治疗后各时间相点股骨头坏死愈胶囊各剂量组骨形态计量学指标较模型组有显著改善。治疗8周后,各剂量组与模型组比较,骨小梁体积百分比和骨小梁厚度的增加有显著提高(P0.05,P0.01),骨小梁间隙有明显降低(P0.01),各剂量组间比较亦有统计学意义(P0.05)。④治疗后各时间相点,股骨头坏死愈胶囊各剂量组骨细胞凋亡指数与模型组有显著变化。治疗后8周,高、中剂量组比模型组显著降低(P0.01)。低剂量组骨细胞凋亡指数与模型组比较无明显差异(P0.05)。高剂量组与中、低剂量组比较,差异有显著统计学意义(P0.01)。 结论:①早期激素性股骨头坏死是骨细胞凋亡和坏死共同作用的结果,细胞凋亡是股骨头坏死的细胞学病理基础。②股骨头坏死愈胶囊能有效降低骨细胞凋亡水平、改善骨组织形态学结构和提高血清中IGF-1含量,进而刺激骨细胞增殖和分化,抑制骨细胞凋亡,促进激素性股骨头坏死的修复。 实验三股骨头坏死愈胶囊对兔激素性股骨头坏死VEGF及受体FIt-1蛋白及mRNA表达的影响 目的:探讨股骨头坏死愈胶囊对VEGF及受体F1t-1蛋白及mRNA表达的影响,多层面阐明股骨头坏死愈胶囊治疗激素相关性股骨头坏死的作用机理。 方法:各组标本取自于实验二,于第2、4、8周末分批取材观察:①免疫组织化学检测血管内皮生长因子及受体FIt-1蛋白表达情况,并行其平均染色面积百分比(%)和平均吸光度值(A)的分析。②原位杂交技术检测血管内皮生长因子及受体FIt-1mRNA表达情况,并行其平均灰度值(GL)分析。 结果:①股骨头坏死愈胶囊能不同程度提高血管内皮生长因子及受体F1t-1蛋白表达水平。治疗后8周,中药各剂量组染色面积与模型组比较,差异有统计学意义(P0.01)。高、中、低剂量组吸光度值随浓度呈正比递增趋势,各组间比较差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。②股骨头坏死愈胶囊能不同程度提高血管内皮生长因子及受体FIt-1mRNA表达水平。中药各剂量组与模型组灰度值比较,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。中药各剂量组间比较,高剂量灰度值较低剂量组差异有显著统计学意义(P0.01),较中剂量组差异亦有统计学意义(P0.05)。 结论:①早期激素性股骨头坏死中,VEGF及Flt-1的表达随时间延长而减弱,说明激素抑制了其表达,妨碍了血管新生和骨重建。②股骨头坏死愈胶囊能上调早期兔激素性股骨头坏死内VEGF和Flt-1的表达,促进股骨头组织微血管的修复,为骨修复提供重要条件。 目的:客观评价股骨头坏死愈胶囊对激素性股骨头坏死早期的治疗效果。 方法:采用完全随机对照的试验方法,将60例激素性股骨头坏死患者分为治疗组和对照组,每组30例。对治疗后不同时间点两组患者的症状体征进行量化评分和治疗前后MRI检查,对患者症状体征评分及股骨头坏死指数变化进行对比研究。 结果:治疗组症状体征量化计分在各时间相点逐渐降低。治疗后3月,治疗组总体量化计分明显优于对照组(P0.01)。关节疼痛、疲乏无力、肌肉痉挛单项量化计分较对照组有统计学意义(P0.05,P0.01)。关节活动范围、步履情况和股骨头坏死指数方面无明显差异(P0.05)。治疗后总体有效率比较,治疗组优于对照组(P0.05)。 结论:股骨头坏死愈胶囊能明显改善早期激素性股骨头坏死患者的临床症状体征,同时具有组方科学,疗效明显等特点,提示股骨头坏死愈胶囊拥有广阔的临床前景。
【学位授予单位】:湖南中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R681.8

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【参考文献】
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