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《湖南中医药大学》 2018年
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隔药饼灸对免疫抑制兔机体免疫和细胞免疫功能量—效及时—效影响的研究

翟春涛  
【摘要】:目的:1.观察不同灸量隔药饼灸对环磷酰胺所致免疫抑制模型兔机体免疫功能和细胞免疫作用的影响,分析不同灸量所产生效果的差异性,探究不同灸量的疗效差异及机制所在。2.观察在最佳灸量下,隔药饼灸对环磷酰胺所致免疫抑制模型兔机体免疫功能和细胞免疫作用不同时间位点的影响,分析隔药饼灸效应发生、发展过程中潜伏期、效应期和后效应期的时间位点,阐明效应随时间的变化规律,为今后临床研究提供思路与方法。方法:1.50只大耳白兔按照随机数字表分为空白组、模型组、隔药饼灸3壮组(3壮组)、隔药饼灸5壮组(5壮组)、隔药饼灸7壮组(7壮组),每组10只。除空白组外,其余各组按照预实验改良后的造模方法进行造模,即每天上午按照60 mg/kg剂量腹腔注射环磷酰胺,每日1次,连续注射7天。造模结束后第2天,除空白组和模型组外,其余各组均进行隔药饼灸治疗,药饼按照用六味地黄汤原方比例制备,穴位选取“脾俞(双)”“肾俞(双)”“关元”“神阙”“足三里(双)”。3壮组、5壮组和7壮组分别每穴连灸3壮、5壮、7壮,隔日1次,共灸10次。空白组和模型组只绑缚固定于兔台,不做任何处理。实验结束后次日,实验动物称重后麻醉,进行腹腔静脉取血和摘取脾脏。(1)静脉血离心后取血清,酶联免疫法测定免疫细胞CD3+、CD4+、CD8+、NK、Bc含量;(2)称取脾脏质量,计算脾脏指数;(3)取脾脏组织制备脾脏匀浆液,离心机离心后采用酶联免疫法测定细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ含量;(4)取脾脏组织置于10%福尔马林中固定,经石蜡包埋切片,HE染色,显微镜观察脾脏一般形态学变化。2.90只大耳白兔采用随机数字表法分为空白组,模型1~4组,隔药饼灸治疗结束后即刻组、5天组、10天组和15天组,简称灸后即刻组、灸后5天组、灸后10天组和灸后15天组,每组10只。模型1组对应于灸治结束后即刻组(模型即刻组),模型2组对应于灸治结束后5天组(模型5天组),模型3组对应于灸治结束后10天组(模型10天组),模型4组对应于灸治结束后15天组(模型15天组)。除空白组外,其余各组按照预实验改良后的造模方法进行造模,即每天上午按照60 mg/kg剂量腹腔注射环磷酰胺,每日1次,连续注射7天。造模结束后第2天,除空白组、模型组外,其余各组均进行隔药饼灸治疗,药饼按照用六味地黄汤原方比例制备,穴位选取“脾俞(双)”“肾俞(双)”“关元”“神阙”“足三里(双)”。每穴连灸5壮,隔日1次,共灸10次。空白组和模型组只绑缚固定于兔台,不做任何处理。空白组、模型即刻组、灸后即刻组实验结束后次日,模型5天组和灸后5天组、模型10天组和灸后10天组、模型15天组和灸后15天组隔药饼灸后正常饲养5、10、15天后次日,实验动物称重后麻醉,进行腹腔静脉取血和摘取脾脏。(1)腹腔静脉取血后,采用血细胞检测仪检测外周血细胞系列的变化(WBC、NEU%、LYM%、MONO%、EOS%、BASO%、RBC、HGB、HCT、PLT);(2)静脉血离心后取血清,采用免疫检测仪检测Ig M、Ig G含量,补体C3、C4含量;酶联免疫法测定免疫细胞CD3+、CD4+、CD8+、NK、Bc含量;(3)称取脾脏质量,计算脾脏指数;(4)取脾脏组织制备脾脏匀浆液,离心机离心后采用酶联免疫法测定细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ含量;(5)取脾脏组织置于10%福尔马林中固定,经石蜡包埋切片,HE染色,显微镜观察脾脏一般形态学变化。结果:1.与空白组比较,模型组实验前后体质量差值明显降低(P﹤0.01);血清CD3+含量明显降低(P﹤0.01),CD8+含量明显升高(P﹤0.01);组织IFN-γ、IL-4含量明显降低(P﹤0.01);脾脏指数明显升高(P﹤0.01);脾脏形态学计量指标白髓平均面积、脾小体半径明显缩小(P﹤0.01),动脉周围淋巴鞘淋巴细胞数明显降低(P﹤0.01),差异有统计学意义。不同灸量隔药饼灸治疗后,与模型组比较,3壮组、5壮组、7壮组实验前后体质量差值明显升高(P﹤0.01);血清CD3+含量明显升高(P﹤0.01,P﹤0.05),血清CD8+含量明显降低(P﹤0.01);组织IL-4含量明显升高(P﹤0.01,P﹤0.05);脾脏指数明显降低(P﹤0.01,P﹤0.05);白髓平均面积和脾小体半径明显扩大(P﹤0.01),动脉周围淋巴鞘淋巴细胞数明显增加(P﹤0.01),差异有统计学意义。5壮组、7壮组组织IFN-γ含量与模型组比较明显升高(P﹤0.01)。不同灸量隔药饼灸对免疫抑制兔免疫功能的影响不同,与3壮组比较,5壮组、7壮组实验前后体质量差值明显升高(P﹤0.01);5壮组血清CD8+含量明显降低(P﹤0.01),7壮组血清CD3+含量明显升高(P﹤0.05),CD8+含量明显降低(P﹤0.01);5壮组、7壮组组织IL-4、IFN-γ含量明显升高(P﹤0.05);5壮组和7壮组白髓平均面积和脾小体半径明显扩大(P﹤0.01,P﹤0.05),动脉周围淋巴鞘淋巴细胞数明显增加(P﹤0.01,P﹤0.05),差异有统计学意义。与5壮组比较,隔药饼灸7壮组可以明显升高血清CD3+含量(P﹤0.05),其余指标实验前后体质量差值、血清CD8+含量,组织IFN-γ、IL-4含量,白髓平均面积、脾小体半径及动脉周围淋巴鞘淋巴细胞数隔药饼灸5壮组与7壮组比较差异无统计学意义;3壮组、5壮组和7壮组脾脏指数比较差异无统计学意义。2.与空白组比较,模型即刻组、模型5天组、模型10天组和模型15天组血细胞WBC、RBC、HGB、HCT、PLT、NEU%,Ig G、Ig M含量、补体C3含量及实验前后体质量差值明显降低(P﹤0.01),LYM%和脾脏指数显著升高(P﹤0.01);模型即刻组、模型5天组补体C4显著升高(P﹤0.05),差异有统计学意义。与空白组比较,模型组血清CD3+含量明显降低(P﹤0.01),CD8+含量明显升高(P﹤0.01),组织IFN-γ、IL-4含量明显降低(P﹤0.01),白髓平均面积和脾小体半径明显缩小(P﹤0.01),动脉周围淋巴鞘淋巴细胞数明显降低(P﹤0.01),差异有统计学意义。模型即刻组、模型5天组、模型10天组及模型15天组血细胞WBC、RBC、HGB、HCT、PLT、NEU%、LYM%、MONO%、EOS%及BASO%,Ig G、Ig M含量,补体C3、C4含量,实验前后体质量差值及脾脏指数组间比较差异均无统计学意义。隔药饼灸治疗后,与模型组各相应时间点比较,灸后即刻组、灸后5天组、灸后10天组和灸后15天组血细胞WBC、RBC、HGB、HCT明显升高(P﹤0.01,P﹤0.05),LYM%明显降低(P﹤0.01);灸后即刻组、灸后5天组和灸后10天组PLT明显升高(P﹤0.01,P﹤0.05);灸后即刻组和灸后5天组NEU%明显升高(P﹤0.01,P﹤0.05);灸后即刻组、灸后5天组和灸后10天组Ig G、Ig M均明显升高(P﹤0.01,P﹤0.05),灸后15天组Ig M明显升高(P﹤0.05);灸后即刻组和灸后5天组补体C3明显升高(P﹤0.01),灸后5天组C4明显降低(P﹤0.01);灸后即刻组、灸后5天组、灸后10天组和灸后15天组实验前后体质量差值明显升高(P﹤0.01),脾脏指数明显降低(P﹤0.01,P﹤0.05)。与模型组比较,灸后即刻组、灸后5天组、灸后10天组、灸后15天组血清CD3+含量明显升高(P﹤0.01,P﹤0.05),CD8+含量明显降低(P﹤0.01);组织IFN-γ、IL-4含量明显升高(P﹤0.01);白髓平均面积和脾小体半径明显扩大(P﹤0.01),动脉周围淋巴鞘淋巴细胞数明显增加(P﹤0.01),差异有统计学意义。与灸后即刻组、灸后5天组比较,灸后10天组WBC、RBC、HGB、HCT明显升高(P﹤0.01,P﹤0.05),LYM%明显降低(P﹤0.01);Ig G、Ig M明显升高;实验前后体质量差值明显增加(P﹤0.01);脾脏指数明显降低(P﹤0.05);血清CD3+含量明显升高(P﹤0.05),CD8+含量明显降低(P﹤0.05);组织IFN-γ、IL-4含量明显升高(P﹤0.05);白髓平均面积和脾小体半径明显扩大(P﹤0.01),差异有统计学意义。与灸后即刻组比较,灸后5天组和灸后15天组血细胞WBC明显升高(P﹤0.01),NEU%明显降低(P﹤0.01);灸后5天组补体C3含量明显升高,灸后10天组和灸后15天组补体C3含量明显降低(P﹤0.01,P﹤0.05);灸后15天组动脉周围淋巴鞘淋巴细胞数明显增加(P﹤0.05);灸后15天组实验前后体质量差值明显增加(P﹤0.01)差异有统计学意义。与灸后5天组比较,灸后10天组、15天组补体C3含量明显降低(P﹤0.05),灸后15天组脾小体半径明显缩小(P﹤0.05),差异有统计学意义。与灸后10天组比较,灸后15天组WBC、RBC、HGB、HCT、PLT明显降低,LYM%显著升高(P﹤0.05);Ig G、Ig M均显著降低(P﹤0.01,P﹤0.05),脾脏指数明显升高(P﹤0.05);血清CD3+含量明显降低(P﹤0.05),CD8+含量明显升高(P﹤0.01);组织IFN-γ、IL-4含量明显降低(P﹤0.01,P﹤0.05);白髓平均面积及脾小体半径明显缩小(P﹤0.01),差异有统计学意义。结论:1.不同灸量(3壮、5壮、7壮)隔药饼灸对环磷酰胺所致免疫抑制兔免疫细胞、免疫分子及免疫器官均有明显的调节作用。2.不同灸量隔药饼灸对环磷酰胺所致免疫抑制兔免疫细胞、免疫分子及免疫器官的影响存在明显的量-效关系。5壮和7壮灸量较3壮灸量在提高免疫抑制兔的免疫功能方面作用更为明显。本项目研究显示的最佳灸量为5壮。3.隔药饼灸5壮灸量对免疫抑制兔免疫细胞、免疫分子和免疫器官的影响存在一定的时-效关系,从多项指标的变化趋势分析,灸治结束后即刻开始起效,灸治结束后10天达到最佳效应期,随后灸疗效应开始出现衰减。4.从隔药饼灸对免疫抑制兔免疫功能调节的总体疗效来看,隔药饼灸对免疫抑制兔免疫细胞、免疫分子和免疫器官的影响存在一定的量-效及时-效关系,本项目研究的最佳灸量为5壮,最佳效应期为灸后10天。
【学位授予单位】:湖南中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R245

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