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《湖南中医药大学》 2006年
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冠心病血瘀证家系的易患基因研究

李杰  
【摘要】: 第一部分冠心病血瘀证家系与ACE、FⅧ、ApoE、PAI-1基因多态性的连锁研究 背景:CHD是一种多因素疾病,受环境和遗传等多因素的影响,为有明显遗传倾向的多基因病。CHD的发生与发展与多种易患基因多态性有关,尤其与血管紧张素转换酶插入/缺失(ACE I/D)基因多态性、载脂蛋白E(ApoE)基因多态性、凝血因子Ⅶ(FⅦ)基因多态性、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)基因多态性等密切相关,它们通过调控脂质代谢、凝血功能和血管内皮功能而影响CHD临床表型。中医理论认为冠心病基本病机为心脉瘀阻,血瘀证是CHD最常见的证型,而ApoE、FⅦ、ACE、PAI-1基因多态性是否为CHD血瘀证家系的遗传分子生物学标志之一,值得深入研究。 目的:了解湖南汉族家系人群ACE、FⅦ、Apoe、PAI-1基因各基因型分布频率,观察ACE基因(I/D)多态性、FⅦ基因(M1/M2)多态性、ApoE基因(ε2、ε3、ε4)多态性、PAI-1基因多态性与CHD血瘀证家系的关系及对CHD血瘀证易患影响。 方法:本研究采用病例对照设计,筛选25个CHD血瘀证家系、15个CHD非血瘀证家系及10个健康人家系为研究对象。采用直接PCR和PCR-RFLP技术检测ACE基因I/D、ApoE基因(ε2、ε3、ε4)、FⅦ(M1/M2)基因多态性,用PCR-VNTR技术检测PAI-1基因多态性。 用条件Logistic回归进行受累亲属对分析(APM)分析,将家系组成的APM对用单变量的条件Logistic回归以及调整传统危险因素后的多变量条件Logistic回归分析;在对FⅦ、ACE、ApoE、PAI-1基因多态与冠心病基因存在关联的基础上;利用核心家系资料进行单体型相对风险分析(HHRR),连锁不平衡检验(TDT)分析,检验该基因座是否与中国湖南汉族人群冠心病血瘀证基因存在连锁。 结果: 1.湖南汉族家系人群中:①ACE基因型分布在双亲中,DD 12.5 0%,ID 48.21%,Ⅱ39.29%;Ⅰ等位基因频率63.39%,D等位基因频率36.61%。在患者中,DD 14.29%,ID 53.57%,Ⅱ32.14%;Ⅰ等位基因频率58.93%,D等位基因频率41.07%。②FⅦ基因型分布在双亲中M1等位基因频率78.57%,患者的等位基因M1频率85.71%。③ApoE基因型分布在双亲中,E2/3 8.93%,E2/4 10.71%,E3/3 53.57%,E3/4 23.21%,E4/4 3.58%;等位基因ε2、ε3、ε4频率分别为9.82%、69.64%、20.54%;患者中,E2/314.29%,E2/4 7.14%,E3/3 67.86%,E 3/4 10.71%,E4/4 0%:ε2、ε3、ε4等位基因频率分别为10.71%、80.36%、8.93%。 2.在单体型相对风险分析(HHRR)中,ACE的D基因与冠心病血瘀证不关联,FⅦ的M1基因和ApoE的ε4基因及PAI-1CA18基因多态性与冠心病血瘀证相关联。 3.在连锁不平衡分析中,ACE的D等位基因和FⅥ的M1等位基因与冠心病血瘀证易患位点不连锁;ApoE的ε4等位基因和PAI-1的CA18等位基因与冠心病血瘀证易患位点连锁,可能为中国湖南汉族人群冠心病血瘀证的易患基因。 4.在受累亲属对分析中,Ⅱ、ID、DD种基因型和M1M1、M1M2、M2M2种基因型在受累亲属对分析中分布无显著差别,PAI-1基因型CA18和ApoEε4基因型在血瘀证受累亲属对分析中分布有显著差别。 结论: 1.本项研究CHD家系ACE、FⅦ、ApoE、PAI-1基因的基因型、等位基因都没有偏离Hardy-weinberg平衡。 2.ACE的D等位基因可能与冠心病血瘀证不关联,FⅦ的M1等位基因和ApoE的ε4等位基因及PAI-1 CA18等位基因可能与冠心病血瘀证相关联。 3.ACE的D等位基因和FⅦ的M1等位基因可能不是中国湖南汉族人群冠心病血瘀证的易患基因;而ApoE等位基因ε4和PAI-1等位基因CA18与冠心病血瘀证易患位点连锁,可能为中国湖南汉族人群冠心病血瘀证的易患基因,且是CHD家系血瘀证独立的危险因素。 4.冠心病血瘀证可能是一种具有遗传倾向的“多基因证”。 第二部分冠心病血瘀证家系与脂质代谢、凝血功能及血管内皮功能相关性研究 背景:已有的研究证明,CHD血瘀证的形成与体内脂质代谢紊乱、血管内皮损伤及凝血机制失常,血液处于血栓前高凝状态的病理生理过程相似,而且CHD的发病有家族聚集倾向,其发病率高于群体发病率。血脂紊乱是CHD发病与进展之重要危险因素之一,可作为中医辨证分型的一个客观指标;血瘀证患者存在着血栓前高凝和纤溶功能低下状态,其血栓形成是气滞血瘀和气虚血瘀的病理基础;血管内皮细胞内分泌功能失调可能是构成冠心病血瘀证的病理基础之一。中医认为冠心病基本病机为心脉瘀阻,临床和实验研究表明血瘀证是CHD最常见的证型之一。因此,脂质代谢紊乱、血管内皮损伤及凝血机制失常可能是CHD血瘀证家系的三个遗传易患特征。 目的: 1.分析CHD血瘀证家系患者脂质代谢、血管内皮功能及凝血机制相关指标,探讨这些指标与CHD血瘀证家系的遗传易患关系。 2.观察家系中ACE基因I/D多态性对ET/NO的影响、FⅦ基因M1/M2多态性与血浆FⅦ活性(FⅦc)的关系,及PAI-1基因多态性对PAI-1活性的影响。 方法:本研究采用病例对照设计,筛选25个CHD血瘀证家系、15个CHD非血瘀证家系患者及10个健康人家系为研究对象。采用硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO),放免法测定内皮素(ET),血管紧张素Ⅱ(AgⅡ),发色底物法检测纤溶酶原激活剂抑制物活性(PAI)、抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)、组织型纤溶酶原激活剂(tPA),ELISA法测定血小板α颗粒膜蛋白(GMP-140),凝血因子Ⅶ活性(FⅦc)检测采用一期法进行检测。 结果: 1.CHD血瘀证家系组AgⅡ含量高于CHD非血瘀证家系组、健康对照组(p<0.01或p<0.05)。CHD血瘀证家系组ET含量、NO含量、NO/ET与健康对照组比较有显著性差异(p<0.01),与CHD非血瘀证家系组相比差异无显著性意义(p>0.05)。 2.CHD血瘀证家系患者血浆ATⅢ浓度明显低于CHD非血瘀证家系组和健康对照组,GMP-140含量、PAI活性明显高于CHD非血瘀证家系组和健康对照组(p<0.05~0.01),tPA的活性明显低于健康对照组(P<0.01),与CHD非血瘀证家系组无差异。 3.ACE基因I/D多态性对ET/NO的影响:CHD血瘀证家系组、CHD非血瘀家系组、健康对照组ACE基因3个基因型ET/NO值呈现Ⅱ→ID→DD的递增趋势。DD型比Ⅱ型ET/NO值显著增高(p<0.0 5或<0.01)。 4.FⅦ基因多态性与血浆FⅦ活性(FⅦc)的关系:其中M1M1基因型的FⅦc含量呈CHD血瘀证家系组>CHD非血瘀证家系组>健康对照组呈递减趋势;而M1M2基因型相反。 5.PAI-1基因多态性与PAI-1的活性关系:PAI-1的活性与CA拷贝数呈高度负相关,拷贝数越少,PAI-1活性越高;其中以血瘀证PAI-1活性更高,冠心病血瘀证家系组CA重复拷贝数N<20的例数明显高于非血瘀证组。 结论: 1.冠心病血瘀证家系存在血管舒缩功能紊乱,表现为血管持续痉挛状态。 2.冠心病血瘀证家系存在凝血、抗凝血及纤溶系统等功能紊乱,表现为血栓前高凝状态。 3.血瘀证家系组ACE基因对ET/NO值表明DD型比Ⅱ型明显升高,可能是ACE引起冠状动脉痉挛的又一重要作用机制。 4.血瘀证家系组FⅦ基因M1M1基因型与血浆FⅦ活性(FⅦc)密切相关。 5.PAI-1基因的CA重复拷贝数在血瘀证家系中与血浆PAI-1活性呈负相关。 6.冠心病家系血瘀证的形成与脂质代谢紊乱、凝血机制的异常、血管内皮细胞的损伤密切相关。
【学位授予单位】:湖南中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R259

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