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《湖南中医药大学》 2005年
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鹅冰舒冠滴丸对血管内皮细胞脂质过氧化损伤保护作用研究

韩育明  
【摘要】: 第一部分鹅冰舒冠滴丸临床疗效观察及对冠心病心绞痛病人脂质过氧化指标的影响 鹅冰舒冠滴丸是导师程丑夫教授根据传统中医药理论和自身长期临床实践经验研制的治疗冠心病心绞痛的中药新药。本品有芳香通脉、益气豁痰、化瘀止痛的功效,适应于冠心病心绞痛阳气亏虚、痰瘀阻滞患者。临床研究采用随机双盲对照试验对本品种疗效进行研究观察确证,并对冠心病心绞痛病人脂质过氧化指标进行了观察,以了解鹅冰舒冠滴丸对冠心病心绞痛病人脂质过氧化指标的影响。 目的:确证鹅冰舒冠滴丸治疗冠心病心绞痛阳气亏虚、痰瘀阻滞证疗效,并了解其对冠心病心绞痛病人脂质过氧化指标的影响。 方法:临床研究采用随机分组、双盲双模拟、阳性药物平行对照试验方法,选择符合冠心病心绞痛临床诊断和中医阳气亏虚、痰瘀阻滞证诊断,且每周心绞痛发作≥2次患者为受试对象,阳性对照药物选择麝香保心丸,用药方法:试验组,鹅冰舒冠滴丸5丸/次,同时服用麝香保心丸模拟剂2丸/次,每日3次。餐后半小时服用;对照组,麝香保心丸2丸/次,同时服用鹅冰舒冠滴丸模拟剂5丸/次,每日3次。餐后半小时服用。试验性治疗一月后,客观评价其临床疗效。并观察血浆内皮素(ET-1)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性等指标治疗前后变化,分析其与疗效关系。 结果:试验结果,共观察87例患者,试验组45例,对照组42例,两组用药前资料无显著差异,分组均衡性良好,有可比性。鹅冰舒冠滴丸组(试验组)心绞痛疗效为显效26例(57.78%)、有效15例(33.33%),总有效率91.11%;心电图疗效显效14例(32.56%)、有效20例(46.51%),总有效率79.07%;中医证候疗效显效24例(53.33%)、有效18例(40.00%),总有效率93.33%,均高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。试验组硝酸甘油平均停减率高于对照组(69.25%,58.87%),但统计学分析组间差异无统计学意义(P=0.0708)。并发现治疗后随着病情好转,患者脂质过氧化反应的终产物丙二醛(MDA)浓度有显著降低,而氧自由基的主要清除剂超氧化物歧化酶(SOD)活性较治疗前显著升高(P<0.01),内皮细胞分泌的重要血管活性物质、反映内皮功能不全指标的内皮素(ET-1)也有显著降低。 结论:鹅冰舒冠滴丸对冠心病心绞痛有良好治疗作用,其对抗过氧化脂质及改善血管内皮细胞功能作用可能是临床疗效的作用机理之一。 第二部分鹅冰舒冠滴丸对ox-LDL所致血管内皮细胞损伤的保护作用研究 为进一步明确本品种对抗过氧化脂质对血管内皮细胞损伤的作用,采用现代细胞分子生物学,以细胞凋亡、内皮细胞分泌血管活性物质NO、ET、t-PA、PAI等为指标,进行了本品种对氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)所致培养血管内皮细胞损伤模型保护作用的研究。 目的:研究鹅冰舒冠滴丸对ox-LDL所致血管内皮细胞损伤的保护作用。 方法:采用MTT法检测鹅冰舒冠滴丸对体外培养人脐静脉内皮细胞株VEC-304的毒性作用,以细胞生长不受影响的最大浓度和这一浓度的1/2量作为的实验浓度。 根据文献报道,以终浓度200ug/ml的ox-LDL造成血管内皮细胞损伤模型,在造模前或造模同时加入鹅冰舒冠滴丸溶液作为处理因素,模拟临床使用鹅冰舒冠滴丸治疗冠心病心绞痛时对冠心病危险因素引起的内皮损伤的预防或治疗作用,检测内皮细胞凋亡情况及细胞培养上清液中NO、ET、t-PA、PAl-1等内皮细胞损伤指标,以了解鹅冰舒冠滴九对ox-LDL所致血管内皮细胞损伤的保护作用。 分组处理:将传代生长于12孔板的内皮细胞分为:①阴性对照组:用DMEM完全培养液(含10%小牛血清)37℃孵育24h;②模型组:用含终浓度200ug/ml的ox-LDL的DMEM完全培养液37℃孵育24h,造成细胞损伤、诱导凋亡;③鹅冰舒冠滴丸保护组:分别用含鹅冰舒冠滴丸1000ug/ml、500ug/ml的DMEM完全培养液培养2h后,加入终浓度为200ug/ml的ox-LDL孵育24h;④鹅冰舒冠滴丸试验组:分别以含鹅冰舒冠滴丸1000ug/ml、500ug╱ml及ox-LDL终浓度为200ug/ml的DMEM完全培养液孵育24h。 细胞凋亡检测采用荧光细胞染色法及流式细胞仪技术;NO测定采用硝酸还原酶法;内皮素(ET)测定采用放免法;Ⅰ型纤溶酶原抑制剂(PAl-1)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)检测采用发色底物法。 结果:荧光显微镜观察阴性对照组细胞染色质在核内分布均匀。ox-LDL作用24h后,可观察到早、中、晚期各种典型的凋亡细胞,细胞核染色质形成大小不同的凝聚块,溢裂断开分散到细胞质中并形成凋亡小体,呈现细胞凋亡时典型的染色质凝聚。鹅冰舒冠滴丸各组细胞凋亡明显减少。 经流式细胞仪检测阴性对照组VEC细胞凋亡率为1.67%。而模型组经200μg╱mlox-LDL诱导VEC细胞24h后,其凋亡率则明显上升,达到32.28%。G1期前出现亚G1峰,即凋亡峰(AP)。与模型组相比,鹅冰舒冠滴丸各组的凋亡率均明显下降(13.82%~17.43%,P<0.05),保护组凋亡率较试验组及更低(P<0.05),不同剂量间无显著性差异(P>0.05)。 细胞培养液中内皮细胞分泌血管活性物质检测结果,模型组NO、ET-1、PAI均有增高,而NO╱ET-1比、t-PA下降,鹅冰舒冠滴丸可在一定程度对抗ox-LDL所致NO、ET-1、PAI增高和NO/ET-1比、t-PA的下降,多数情况下保护组作用更为明显。 结论:鹅冰舒冠滴丸对氧化修饰低密度脂蛋白所致内皮细胞凋亡有明显保护作用,并能增加ox-LDL损伤条件下内皮细胞NO分泌量,降低内皮素,升高NO/ET-1比,改善内皮细胞损伤形成的促凝因素,初步证实了鹅冰舒冠滴丸对oxLDL所致内皮细胞损伤有较好保护作用,对冠心病治疗有积极意义。
【学位授予单位】:

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