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《湖南师范大学》 2015年
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解淀粉芽胞杆菌X030抑菌与抗肿瘤活性研究

何浩  
【摘要】:芽胞杆菌分布广泛,易分离培养,生长周期短,繁殖速度快,在生长繁殖过程中产生的活性物具有抑菌、杀虫和抗肿瘤等生物功能。从全国各地采集的72份土样中筛选出339株芽胞杆菌,经抑菌与抗肿瘤活性检测,结合形态观察、生理生化特征和16S rRNA基因Blast同源序列比对分析,确定了一株高毒力解淀粉芽胞杆菌新菌株,命名为Bacillus amyloliquefaciens X030,简称BaX030(保藏号为CCTCC NO:M 2014159);通过多步分离纯化得到抑菌活性多肽和抗肿瘤活性小分子。BaX030发酵培养48 h,收集上清液,经蛋白纯化(AKTA Purifier10)分离,超高效液相色谱(Agilent 1290 Infinity)分析,高效液相色谱(Agilent 1260 Infinity)制备,得到纯的抑菌组分B2和抗肿瘤活性物BAH1,LC-MS/MS鉴定结果显示B2分子量大小为182.09Da,BAH1分子量大小为122.14 Da。经不同温度和pH处理上清液,用滤纸片法对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌等七种病菌进行抑菌实验;对峙培养法对辣椒尖胞炭疽病菌与枇杷炭疽病菌等六种植物病原真菌进行拮抗实验,结果显示:上清液对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及辣椒尖胞炭疽病菌、枇杷炭疽病菌等具有较好的抑制效果;且抑菌活性在常温、强酸和中性条件下最好,高温与强碱处理活性降低;BaX030与辣椒尖胞炭疽病菌对峙培养发现,随着培养时间推移孢子出现变黑、变小、变少、内含物释放和裂解现象;与植物病原菌对峙培养十天,形成环状包围圈,辣椒尖胞炭疽病菌与枇杷炭疽病菌菌丝变黑基本停止生长。BAH1(8μg/mL)分别作用于小鼠黑色素瘤细胞(B16)、人宫颈癌细胞(Hela)、人肝癌细胞(Hep-3B)和人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)。MTT数据显示,三种肿瘤细胞增殖受到明显抑制,且具有浓度依赖性,对HUVEC细胞增殖影响相对肿瘤细胞较小。倒置显微镜观察细胞形态;同时用Hochest33342、tubulin Alexa Fluor 488和Mito Tracker Red CMVRos对细胞进行免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜(Confocal)观察亚细胞结构,结果显示:处理组肿瘤细胞形态和结构都发生明显变化,出现细胞皱缩变圆,骨架破坏,细胞核形态不规则,线粒体裂解等现象,处理组HUVEC细胞与阴性对照相比变化不大。上述结果表明,BAH1对肿瘤细胞毒性强,能使细胞骨架和线粒体严重受损,而对正常细胞毒性相对较弱。
【学位授予单位】:湖南师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:Q939.9

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 陈海英;廖富蘋;林健荣;罗天宽;;拮抗细菌在植物病害防治中的应用及展望[J];安徽农业科学;2008年20期
2 郭婷;;天然抗肿瘤药物筛选方法的研究进展[J];生物技术世界;2014年09期
3 徐玲;王伟;魏鸿刚;沈国敏;李元广;;多粘类芽孢杆菌HY96-2对番茄青枯病的防治作用[J];中国生物防治;2006年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 鲁红学;周燚;;类芽孢杆菌在植物病害防治和环境治理中的应用研究进展[J];安徽农业科学;2008年30期
2 潘朝勃;莫贱友;李其利;郭堂勋;黄穗萍;韦继光;;拮抗细菌对芒果炭疽病生物防治研究进展[J];南方农业学报;2013年04期
3 黄明媛;顾文杰;张发宝;卢钰升;解开治;蒋瑞萍;;节杆菌YB6发酵滤液稳定性测定及其对盆栽番茄青枯病的防治效果[J];广东农业科学;2013年18期
4 张振粉;南志标;;甘肃省紫花苜蓿种带促生多粘类芽孢杆菌的分离与鉴定[J];草业学报;2014年05期
5 王希;刘佳;暴增海;马桂珍;王淑芳;;海洋多粘类芽孢杆菌L_1-9菌株对黄瓜的促生作用和诱导抗性研究[J];北方园艺;2014年21期
6 毕涛;刘群;王晓强;李向东;陈晓红;温亮;苏建东;杨举田;;烟草青枯病菌生防菌的筛选和鉴定[J];山东农业科学;2014年11期
7 杨自文;刘晓艳;曹春霞;;土传性病害的防治策略[J];湖北农业科学;2011年19期
8 冯杭;谭秀明;李艳嫦;曾冬根;刘琼光;;青枯病抗性不同的番茄土壤细菌生理群的数量变化[J];华南农业大学学报;2010年01期
9 陈勇;金晨钟;;植物青枯病的生物防治研究进展[J];湖南农业科学;2009年07期
10 陈丽园;詹凯;戚仁德;;蛋鸡粪生物防治有机肥研究进展[J];家畜生态学报;2011年06期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 李元广;魏鸿刚;罗远婵;沈国敏;李淑兰;李晓军;陈智旺;;防治植物土传病害的新型微生物肥料系列产品---多粘类芽孢杆菌细粒剂和可湿性粉剂的创制及其应用[A];2012新型肥料创制关键技术与新工艺、新设备交流研讨会论文集[C];2012年
2 李元广;魏鸿刚;罗远婵;沈国敏;李淑兰;李晓军;陈智旺;;防治植物土传病害的新型微生物肥料系列产品——多粘类芽孢杆菌细粒剂和可湿性粉剂的创制及其应用[A];2011新型肥料研发与新工艺、新设备研究应用研讨会论文集[C];2011年
3 何鸿洪;王涛;焦成;林纬;黎起秦;;番茄青枯病拮抗放线菌St-145菌株的鉴定[A];植物保护与现代农业——中国植物保护学会2007年学术年会论文集[C];2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵丽明;多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)SC2 fus基因簇的克隆与分析[D];山东农业大学;2010年
2 唐龙翔;二氧化氯和有机肥对黄瓜枯萎病的防治研究[D];山东农业大学;2010年
3 徐莹莹;几种经济作物根际拮抗细菌的多样性分析[D];山东农业大学;2011年
4 杜根平;几种杀菌剂与IBA混配对烟草青枯病的控制作用研究[D];西南大学;2011年
5 刘贯锋;芽胞杆菌分类学特征及其生防功能菌株筛选[D];福建农林大学;2011年
6 裴旭;向日葵黄萎病菌的遗传多样性研究[D];内蒙古农业大学;2011年
7 黄明媛;番茄青枯病拮抗菌筛选鉴定及发酵条件研究[D];东北农业大学;2011年
8 曲春鹤;辣椒根腐病拮抗细菌的筛选鉴定及其作用效果的初步研究[D];东北农业大学;2011年
9 朱文静;大豆生物种衣剂的研制与应用[D];南京农业大学;2011年
10 江欢欢;防治土传辣椒青枯病微生物有机肥研制与生物效应研究[D];南京农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 于淑池;徐亚茹;;拮抗细菌产生的活性物质及拮抗机理研究进展[J];承德职业学院学报;2006年01期
2 于淑池,张利平,王立安;拮抗细菌作为生物防治手段研究进展[J];河北农业科学;2004年01期
3 谢晶,葛绍荣,陶勇,高平,刘昆,刘世贵;多粘类芽孢杆菌BS04拮抗成分分离纯化及其特性[J];化学研究与应用;2004年06期
4 程亮,游春平,肖爱萍;拮抗细菌的研究进展[J];江西农业大学学报;2003年05期
5 王君明;崔瑛;;天然抗肿瘤药物筛选方法研究进展[J];时珍国医国药;2011年08期
6 丁延芹,杜秉海;玉米根际细菌中PGPR的筛选及初步鉴定[J];土壤肥料;2001年03期
7 陈晓斌,张炳欣;植物根围促生细菌(PGPR)作用机制的研究进展[J];微生物学杂志;2000年01期
8 姚乌兰,王云山,韩继刚,李潞滨,宋未;水稻生防菌株多粘类芽孢杆菌WY110抗菌蛋白的纯化及其基因克隆[J];遗传学报;2004年09期
9 顾琳娜;顾昊;;天然抗肿瘤药物筛选方法的研究进展[J];医药导报;2009年04期
10 朱育菁,刘波,林抗美,葛慈斌,肖荣凤;ANTI-8098A生物杀菌制剂在连作重病区对茄子青枯病的防效测定[J];中国植保导刊;2004年11期
【相似文献】
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1 刘笋;宋晓玲;黄倢;;坚强芽胞杆菌主要分泌蛋白的鉴定及其分泌性序列[J];微生物学报;2011年07期
2 马桂美;车建美;刘波;史怀;陈峥;;短短芽胞杆菌功能基因的研究及其应用[J];生物技术进展;2012年02期
3 高树德;王菊英;刘月华;王海;;炭疽及其主要类属芽胞杆菌表型鉴定方法的研究[J];军事医学科学院院刊;1985年01期
4 汤家铭,俞永富,姚菊芳;毛发状芽胞杆菌超微结构及其与病理的关系的观察[J];中国实验动物学杂志;1993年Z1期
5 鞠守勇;曹志林;李金山;;一株产纳豆激酶芽胞杆菌分离及鉴定[J];安徽农业科学;2014年13期
6 谭周进,周清明,肖启明,王跃强,王运生;芽胞杆菌B_(13)功能的初步研究[J];微生物学通报;2005年05期
7 张红英;杨霞;金钺;方丽云;赵旭阳;李金磊;崔保安;;鸡肠源芽胞杆菌的分离、鉴定和抗菌活性[J];中国微生态学杂志;2007年06期
8 袁金凤;陈雄;王永泽;王志;;鸡源益生芽胞杆菌的筛选[J];微生物学杂志;2008年06期
9 潘志针;刘波;史怀;陈峥;唐建阳;朱育菁;刘国红;刘丹莹;;芽胞杆菌菌种资源库信息管理系统研究[J];福建农业学报;2013年01期
10 胡桂萍;贾宪波;刘波;尤民生;;芽胞杆菌菌体蛋白提取方法的比较[J];生物技术通讯;2013年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 戴经元;罗曦霞;詹学明;王波;喻子牛;;灭蚊芽胞杆菌的筛选[A];杀虫微生物[C];1992年
2 丁轲;余祖华;程相朝;张春杰;闫文朝;赵战勤;王臣;王天奇;;高产淀粉酶芽胞杆菌的选育和酶学性质研究[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(上册)[C];2010年
3 刘波;;芽胞杆菌研究与应用[A];第四届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会论文集[C];2012年
4 徐凯;Simon Rayner;胡晓敏;袁志明;;几株近缘球形芽胞杆菌的全基因组比较分析[A];2013年湖北省暨武汉微生物学会会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2013年
5 丁轲;余祖华;程相朝;张春杰;闫文朝;赵战勤;王臣;王天奇;;猪源高产蛋白酶芽胞杆菌的分离、鉴定及益生特性研究[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(上册)[C];2010年
6 车建美;刘波;林海云;苏明星;;龙眼微生物保鲜功能菌短短芽胞杆菌保鲜活性物质生理生化特性分析[A];第三届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会会议论文摘要集[C];2011年
7 丁轲;余祖华;程相朝;张春杰;王天奇;赵战勤;王臣;闫文朝;;猪源高产蛋白酶芽胞杆菌的分离、鉴定及益生特性研究[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会论文集[C];2010年
8 赵妮;谢作蓉;胡晓敏;袁志明;;球形芽胞杆菌C3-41芽胞外壁蛋白的鉴定[A];2012年鄂粤微生物学学术年会——湖北省暨武汉微生物学会成立六十年庆祝大会论文集[C];2012年
9 王子璇;林营志;刘国红;朱育菁;刘波;;新疆土壤标本中芽胞杆菌的种类及其分布特征[A];第三届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会会议论文摘要集[C];2011年
10 赵妮;胡晓敏;袁志明;;球形芽胞杆菌C3-41芽胞外壁蛋白的鉴定[A];2013年湖北省暨武汉微生物学会会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2013年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 陈传武;饲用益生芽胞杆菌制剂通过鉴定[N];中国化工报;2009年
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1 韩蓓;球形芽胞杆菌糖酵解途径及其相关酶的研究[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2007年
2 苏斐;基于多组学的凝结芽胞杆菌优良工业发酵特性的分子机制研究[D];上海交通大学;2014年
3 李洪涛;防控小麦禾谷孢囊线虫病芽胞杆菌筛选及生防机制研究[D];中国农业大学;2015年
4 车建美;短短芽胞杆菌(Brevibacillus brevis)对龙眼保鲜机理的研究[D];福建农林大学;2011年
5 杨汉博;地衣芽胞杆菌BL15和BL19对黄鸡的营养、微生态效应研究[D];四川农业大学;2002年
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1 宋敏;抗根结线虫芽胞杆菌的分离、筛选和鉴定[D];海南大学;2015年
2 赵志国;枯草芽胞杆菌施用对粉蕉根际微生物群落组成的影响[D];华中农业大学;2015年
3 李静;解淀粉芽胞杆菌对乳鼠感染轮状病毒防治作用研究[D];吉林农业大学;2015年
4 何浩;解淀粉芽胞杆菌X030抑菌与抗肿瘤活性研究[D];湖南师范大学;2015年
5 田潇娜;台湾地区芽胞杆菌种类多样性研究[D];福建农林大学;2013年
6 马桂美;短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX胞内物质分离鉴定及SOD基因克隆表达[D];福建农林大学;2013年
7 刘贯锋;芽胞杆菌分类学特征及其生防功能菌株筛选[D];福建农林大学;2011年
8 王子旋;芽胞杆菌脂肪酸生物标记测定条件的异质性研究[D];福建农林大学;2012年
9 魏姗姗;猪源益生芽胞杆菌的分离筛选及部分性质研究[D];吉林农业大学;2014年
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