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《湖南师范大学》 2002年
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灰花纹鹅膏菌毒素毒理研究及解毒药物初探

刘建强  
【摘要】: 本论文运用反相高效液相色谱技术(RP-HPLC)、DNA琼脂糖凝胶电泳技术、苏木素-伊红(HE)染色技术、荧光染色技术、电镜技术、免疫组化技术(immunohistochemistry assay)和流式细胞术(flow cytometry,FCM)等对灰花纹鹅膏粗毒液和α-鹅膏毒肽(α-amanitin)的毒理、解毒药物进行了较深入的研究,取得的结果如下: 1.利用反相高效液相色谱技术,分离纯化了几种主要的鹅膏毒素,测定了鹅膏菌中毒患者的体液中毒素的代谢情况,发现在患者的血液与尿液中有痕量的鹅膏毒素存在。 2.运用苏木素-伊红(HE)染色技术,发现受毒处理的鼠肝细胞核染色质浓聚,边集,产生凋亡小体,细胞连接开始丧失,表现出凋亡特征。肝细胞有再生现象。凋亡、坏死细胞的数目随处理时间的延长而增多。 3.对受毒小鼠肝细胞悬液进行吖啶橙(AO)、AO与溴化乙啶(EB)共染、Hoechst33258荧光染色,发现受毒处理后小鼠肝细胞表现出核固缩、核碎块等凋亡特征。 4.在透射电镜下观察受毒小鼠的肝细胞超微结构,发现细胞核染色质浓聚,甚至成半月形分布于核膜下;线粒体、内质网、核膜等结构完整,但线粒体内嵴不清晰,电子密度增大;细胞内出现凋亡小体;细胞内有空泡现象。 5.在琼脂糖电泳凝胶上,经鹅膏菌粗毒素处理的小鼠肝细胞表现出细胞凋亡的典型特征-DNA“梯形带”现象,而且该现象与毒素作用存在量效和时效的关系,说明鹅膏菌粗毒素可诱导小鼠肝细胞凋亡。a-鹅膏毒肽处理同样可诱导小鼠肝细胞出现DNA“梯形带”现象,有时效关系,并发现毒素处理后的死亡小鼠亦存在该现象,说明a-鹅膏毒肽对鼠肝的毒害早期为诱发细胞凋亡,晚期为坏死与凋亡 灰花纹鹅青菌毒素毒理研究及解毒药物的初探’刘建强 同存。 6.运用SABC免疫组化技术,对受毒小鼠肝细胞内的凋亡蛋白 Bcl一2、Bax进行了检测,发现灰花纹鹅膏菌粗毒液和a一鹅膏毒肤处 理的的小鼠肝细胞内Bcl一2、Bax均有阳性表达,早期Bcl一2的表达 较Bax强,后期则两者表达量均下降。 7.对a一鹅膏毒肤处理的小鼠肝细胞悬液进行流式细胞术(FcM) 分析,发现a一鹅膏毒肤可诱导细胞周期的G,期停滞,且c,期的DNA 相对含量随时间延长而呈缓慢下降趋势。 8.以小鼠为实验对象,检验了乌族与紫灵芝提取液对鹅膏毒素 中毒的解毒效果,证明乌蔗提取液没有解除该毒害的作用,紫灵芝提 取液有一定的解毒效果。
【学位授予单位】:湖南师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R99

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