收藏本站
《湖南师范大学》 2003年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

黑曲霉植酸酶菌株选育及其酶的分离纯化和性质研究

程海娜  
【摘要】: 植酸酶(phytase EC3.1.3.8)能水解植酸而显示出在饲料、食品、医药等领域有着广泛的应用前景,在高产菌种选育及其酶学性质成为重点研究领域,但目前植酸酶制剂因价格昂贵,难以推广应用。本项研究的目的筛选出产植酸酶菌株,优化其产酶条件,对其进行诱变,提高产酶量,并对植酸酶分离纯化和研究其酶学性质,以利发展微生物酶学研究和为大规模发酵生产廉价的植酸酶制剂奠定基础。 1.植酸酶菌株的筛选及产酶条件的研究 本项研究利用植酸酶的菌株能在筛选培养基上形成水解透明圈的特点而进行鉴定,通过初筛和复筛,得到一株产植酸酶较高的黑曲霉(Aspergillus niger)AN00101菌株。对该菌的产酶条件进行研究的结果表明:麸皮固体培养基的最适加水量为35%;30℃培养90~120 h之间产酶都比较高,在114 h酶活最高;在提取时不仅pH对酶得率有影响,而且不同提取液所要求的最适pH也不同,用乙酸缓冲液提取时,当pH为5.5、6.5时酶活较高,进行水提取时,在pH7.5时酶活最高;利用CaCl_2溶液进行提取的浓度达到3%时,酶活最高。经L_9(3~4)正交实验表明,硫酸铵和硫酸镁对产酶有显著的促进作用,适宜添加量分别为4.0%和0.3%;产酶条件优化后,酶活高达1.3×10~4 U/g。 2.产植酸酶黑曲霉菌株的诱变选育 在对黑曲霉AN01001进行紫外线诱变后,酶活最高的A333菌株比对照高出43%。随后用紫外线和LiCl复合诱变酶活提高不大。最后,用亚硝基胍对产酶较高的3个菌株诱变,经复筛后,N28和N118的酶活比黑曲霉AN01001高出47.5%和40.9%,比A199高出29.5%和23.7%,N28和N118经过5次连续传代后,产酶能力基本稳定。 3.植酸酶的分离纯化及其性质研究 黑曲霉ANO 1001经固体发酵,用缓冲液抽提后,经硫酸按沉淀, DEAE一纤维素离子交换层析,聚丙烯酞胺凝胶电泳和电洗脱等纯化 步骤获得的植酸酶,用SDS一PAGE检测为一条均一谱带,其分子量约 为78 KD。该酶反应的最适PH值为5.5,在pHZ一6之间都有较高的 酶活性,pH大于6时植酸酶的活性迅速下降,在pHZ一8之间的稳定 性很好,活性70%。当pH8时,酶迅速失活,其反应的最适温度 为55℃。植酸酶在90℃处理15和30 min,其残留的酶活为75.9 %和62.3%。当胰蛋白酶与植酸酶比例为0.1时,37℃处理120 min 后,植酸酶残留的活性基本保持在67%。Ca2+、Mg2+、Mn2+、A13+对 酶无显著影响,Zn2+、Cu2+对酶有强烈的抑制作用。
【学位授予单位】:湖南师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:Q939.9

手机知网App
【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 杨燕凌;沙莉;方金铜;;微生物植酸酶的研究与应用[J];武夷科学;2007年00期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 龙元;重组耐热植酸酶的分离纯化及其酶学性质研究[D];同济大学;2007年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 朱非,安志东,王健;亚硝基胍诱变选育林肯霉素高产菌株[J];氨基酸和生物资源;1999年02期
2 黄遵锡,章克昌,徐柔;植酸酶活测定不同方法的比较研究[J];饲料工业;1999年12期
3 王常高,干信,陈茂彬;Asp·ficuum NRRL3135植酸酶分子生物学研究[J];湖北工学院学报;1999年Z1期
4 黄炜,王淑军,陈静;用于饲料生产的植酸酶产生菌的筛选[J];淮海工学院学报(自然科学版);1999年01期
5 夏立秋,邹先琼,莫湘涛;苏云金杆菌4.0718菌株杀虫晶体65kD原毒素的质谱分析[J];激光生物学报;2001年04期
6 姚斌,张春义,王建华,范云六,史秀云,王亚茹,李淑敏;产植酸酶的黑曲霉菌株筛选及其植酸酶基因克隆[J];农业生物技术学报;1998年01期
7 张玉臻,林学政,吴志宏,韩云峰;植酸酶高活性菌株的选育及酶性质的初步研究[J];山东大学学报(自然科学版);1997年04期
8 姚斌,袁铁铮,王元火,操时树,王亚茹,史秀云,范云六;来源于Bacillus subtilis的中性植酸酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达[J];生物工程学报;2001年01期
9 贝锦龙,陈庄,杨林,廖玲,王珣章,蒋宗勇;人工合成的黑曲霉NRRL3135菌株植酸酶基因在毕赤酵母系统中的高效表达[J];生物工程学报;2001年03期
10 冯怡,崔立斌,刘传暄,马清钧;人内皮抑素在毕赤酵母中的表达、纯化与生物功能研究[J];生物工程学报;2001年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 游银伟,汪天虹,岳寿松;海洋青霉(Penicilliumsp.)FS010441的形态学观察和产纤维素酶性质初步研究[J];山东农业科学;2005年01期
2 李瑞国;朱秀敏;杨慧;;不同萌发期绿豆芽蛋白质含量的测定及营养价值分析[J];山东农业科学;2011年01期
3 刘开泉;李玲;郭峰;;曲霉来源植酸酶基因phyA的克隆及原核表达[J];山东农业科学;2012年02期
4 葛宏华,孙莉宁,张其瑞;家蚕血淋巴蛋白的发育变化和BmLSP的纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2001年03期
5 孔小卫,李坤,江洪波;二甲亚砜对水稻浸种及苗期的后续效应研究[J];安徽大学学报(自然科学版);2002年03期
6 刘晓颖,丁毅;鸡脑P物质的制取及分析[J];安徽大学学报(自然科学版);2003年01期
7 朱华庆,陈飞,谢惠安,张萍;热击对水稻(O.sativaL.)叶绿素a,b及POR同功酶的效应[J];安徽大学学报(自然科学版);1998年04期
8 侯双菊;林超群;鲁坚;方红美;陈从贵;;黄精多糖提取工艺的试验研究[J];安徽化工;2006年04期
9 叶生梅;多菌联合固态发酵生产酒糟菌体蛋白饲料的实验研究[J];安徽机电学院学报;2001年04期
10 孔小卫;二甲亚砜(DMSO)对大豆萌发及幼苗期生理生化指标的影响[J];安徽机电学院学报;2002年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周亚军;康建波;刘妍菊;苏丹;马龙彪;;混合肉肌原纤维蛋白特性研究[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
2 郭丽;王娇娇;肖凯;;植物植酸酶的生化特征和转基因表达植酸酶的研究进展[A];作物逆境生理研究进展——中国作物生理第十次学术研讨会文集[C];2007年
3 龚加顺;胡小静;彭春秀;周红杰;;普洱茶及其原料多糖分子组成及光谱学特性研究[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第二卷)[C];2010年
4 赵祥杰;邝哲师;叶明强;罗国庆;肖更生;;一株蚕蛹壳几丁质降解菌的分离与初步鉴定[A];中南五省区蚕桑育种协作研讨会论文集[C];2009年
5 汤海鸥;李富伟;汪勇;;关于饲用酶制剂活性测定影响因素的分析[A];2008山东饲料科学技术交流大会论文集[C];2008年
6 李强;陈明;夏蕊蕊;张玉臻;;生物絮凝剂产生菌M-503的分离鉴定及絮凝特性研究[A];中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集[C];2005年
7 付加雷;宋长征;张更林;;壳聚糖/海藻酸钠微囊对干扰素-tau的控释作用[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年
8 任慧霞;赵雪;聂晓燕;;健脾止遗片有效成分对家兔膀胱明胶酶的影响[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年
9 邹莹;;硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的提取[A];第十二届山东省药剂学术会议论文集[C];2006年
10 张娟;赵利;魏丽;刘建涛;曾志将;;贮藏温度和时间对蜂王浆水溶性蛋白质的影响[A];中国养蜂学会蜜蜂饲养管理专业委员会第十三次学术研讨会论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐军;富苯丙氨酸碱性短肽的发现及其对蛋白质等电点和免疫交叉反应的影响[D];华南理工大学;2010年
2 陈义勇;桦褐孔菌多糖纯化、结构及其抗肿瘤机制研究[D];江南大学;2010年
3 田壮;食品中甾体激素残留免疫分析技术与方法研究[D];江南大学;2010年
4 钊倩倩;青霉植酸酶phyA基因的克隆、表达及蛋白性质的改良[D];山东大学;2010年
5 邵凌健;槐糖脂补料发酵及抗真菌、抗肿瘤活性的研究[D];山东大学;2010年
6 蔡维嘉;利用毕赤酵母系统的丙型肝炎病毒重组E1E2糖蛋白的表达、纯化和性质研究[D];武汉大学;2010年
7 迟雷;基于过程控制优化的重组大肠杆菌高密度发酵研究[D];西北大学;2011年
8 孙红男;苹果渣中多酚类物质的高压脉冲电场处理及其生物活性研究[D];北京林业大学;2011年
9 冯敏毅;壬基酚对雄性花背蟾蜍抱对、精子及早期发育的影响[D];兰州大学;2011年
10 董晓鹏;内皮抑素在肺腺癌中的表达及其对小鼠Lewis肺癌淋巴管生成和淋巴转移的影响[D];山东大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 周艳华;可溶性鸡蛋壳膜蛋白与多肽的制备及其抗氧化活性的研究[D];华中农业大学;2010年
2 陈若雯;高产胞外多糖乳酸乳杆菌的选育及其发酵条件的优化[D];华中农业大学;2010年
3 冷一非;嗜热链球菌抗噬菌体菌株的选育、培养及冻干发酵剂的研究[D];华中农业大学;2010年
4 申君;桃蚜的抗药性监测、杀虫剂的配方筛选及其增效生化机理的研究[D];华中农业大学;2010年
5 杜学敏;蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分组分的性质[D];河北大学;2007年
6 司武阳;磷脂酶A1产生菌的选育[D];安徽工程大学;2010年
7 刘辉;红曲霉发酵提高γ-氨基丁酸含量的研究[D];安徽工程大学;2010年
8 洪伟;酪蛋白中血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的研究[D];安徽工程大学;2010年
9 王美花;里氏木霉swollenin在米曲霉中的表达和纯化[D];浙江理工大学;2010年
10 魏巍;极低酸中稻壳水解特性及转化乙酰丙酸的实验研究[D];郑州大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘德忠;植酸酶产生菌的选育研究[J];饲料工业;1999年01期
2 郭松林,席峰;植酸酶营养学研究近况[J];国外畜牧学(猪与禽);2000年01期
3 张小霞,严卫星,徐海滨;外源蛋白质表达系统类型的研究进展[J];国外医学(卫生学分册);2004年04期
4 黄遵锡,章克昌,徐柔;微板法在植酸酶活测定过程中的应用[J];工业微生物;2000年02期
5 刘永海,李大力,杨成丽,石若夫,王世明,陆路德;植酸酶产生菌的筛选与酶纯化及其性质的研究[J];工业微生物;2004年02期
6 汪世华,吕茂洲,孙长春,彭利民,周林峰,王健,黎玲玲,李碧波;植酸酶的现状及其研究进展[J];广州食品工业科技;2002年01期
7 程辉彩,张丽萍,赵芊,王迎春,董超;植酸酶液体发酵条件及酶学性质的研究[J];河北省科学院学报;2002年03期
8 张勇,林东康;植酸酶的研究及其应用[J];河南畜牧兽医;2002年02期
9 姚斌,张春义,王建华,范云六;高效表达具有生物学活性的植酸酶的毕赤酵母[J];中国科学C辑:生命科学;1998年03期
10 李弘剑,陈震球,张毅,潘冬梅,何敏锐,张俊辉;工程菌JM-109-pTrcHis2A-phyA表达植酸酶的研究[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);2001年05期
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 杨合同;于雪云;魏艳丽;周红姿;宋莉璐;扈进冬;李纪顺;;多功能植病生防木霉的分离筛选与鉴定[J];山东科学;2009年05期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 田运佳;植酸酶生产过程主要影响因素研究[D];河北科技大学;2010年
2 付余英;植酸水解及其产物的分离研究[D];四川师范大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 蒋守群,吴天星;植酸酶的研究进展[J];动物营养学报;1999年03期
2 徐建雄,崔立,陈鲁勇,李光良,吴菊华;不同磷水平日粮添加植酸酶对猪生产性能的影响[J];饲料工业;1998年11期
3 Калан Э.З.;陈智超;;林可霉素及其药用剂型[J];国外药学(抗生素分册);1986年03期
4 姚斌,张春义,王建华,范云六;高效表达具有生物学活性的植酸酶的毕赤酵母[J];中国科学C辑:生命科学;1998年03期
5 姚斌,张春义,王建华,范云六,史秀云,王亚茹,李淑敏;产植酸酶的黑曲霉菌株筛选及其植酸酶基因克隆[J];农业生物技术学报;1998年01期
6 郑常文,刘惠侠,董长江,唐宏力,郑念新;米曲霉(Aspergillus oryzae)植酸酶的分离纯化及性质研究[J];四川大学学报(自然科学版);1993年02期
7 姚斌,范云六;植酸酶的分子生物学与基因工程[J];生物工程学报;2000年01期
8 张若寒;植酸酶活性的检测方法[J];中国饲料;1997年05期
9 苏晓鸥,霍启光;植酸酶在肉鸡饲料中的应用[J];中国饲料;1998年06期
10 王正凯,杨智辉,吴光剑;植酸酶在斑点叉尾回饲料中的应用[J];中国饲料;1998年11期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王红宁,谢晶,吴琦,刘世贵,陈惠;黑曲霉N25株产植酸酶及酶促反应条件研究[J];生物技术;2003年03期
2 陈红歌,苗雪霞,张世敏,贾新成;植酸酶高产菌株的诱变选育[J];微生物学通报;1997年05期
3 李弘剑,陈震球,张毅,潘冬梅,何敏锐,张俊辉;工程菌JM-109-pTrcHis2A-phyA表达植酸酶的研究[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);2001年05期
4 陈惠,王红宁,谢晶;黑曲霉N25植酸酶的分离纯化及酶学性质研究[J];四川农业大学学报;2001年01期
5 杨焰,程海娜,陈宇,夏立秋;产植酸酶黑曲霉菌株的诱变选育[J];湖南师范大学自然科学学报;2004年03期
6 彭益强,贺淹才,全成恒,苏丽政;用原生质体诱变选育高植酸酶活的黑曲霉变异株[J];微生物学杂志;2002年05期
7 王喆;宋丽;石星明;倪宏波;徐春厚;;黑曲霉3928植酸酶phyA基因PCR扩增条件的优化[J];黑龙江畜牧兽医;2007年10期
8 杨平平,王燕,史宝军,邵蔚蓝,陶文沂;黑曲霉496-1菌株植酸酶的分离纯化及酶学性质[J];食品与生物技术;2003年05期
9 王红宁,吴琦,刘世贵,谢晶,马孟根;黑曲霉N25植酸酶phyA基因的克隆及序列分析[J];微生物学报;2001年03期
10 李秀珍;薄泉;杨平平;王燕;;利用原生质体诱变筛选植酸酶高产菌株[J];饲料工业;2007年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王红宁;吴琦;谢晶;陈惠;;黑曲霉N25(中国株)植酸酶phyA基因的PCR、克隆及其序列分析[A];西部大开发 科教先行与可持续发展——中国科协2000年学术年会文集[C];2000年
2 陈惠;赵海霞;王红宁;吴琦;邹立扣;倪燕;;改造稀有密码子提高植酸酶在毕赤酵母中的表达量[A];第七届全国酶学学术讨论会论文摘要集[C];2004年
3 董淑丽;李晓丽;文凤云;李银聚;李文巧;;植酸酶对肉鸡血液和肝脏脂类物质含量的影响[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
4 易中华;王晓霞;计成;马秋刚;;植酸酶和复合酶对肉鸡生产性能及氮、磷利用的影响[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会——第九届学术研讨会论文集[C];2004年
5 张立秀;张克英;陈代文;;纤维分解酶和植酸酶对不同种类和来源饲料养分利用率的影响[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会——第九届学术研讨会论文集[C];2004年
6 尹清强;韩彪;康相涛;;植酸酶基因在酵母菌中的高效表达[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会——第九届学术研讨会论文集[C];2004年
7 曾东;张洪;倪学勤;;产植酸酶乳酸杆菌对肉仔鸡生长性能和粪磷排出量的影响[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(上册)[C];2010年
8 田河;许云贺;刘海武;;植酸酶对蛋鸡不同产蛋阶段生产性能的影响[A];第四届全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2002年
9 王修启;;植酸酶在养猪生产中的应用[A];第三届全国饲料营养学术研讨会论文集[C];1998年
10 刘丽达;倪学勤;曾东;;双歧杆菌植酸酶的研究进展[A];第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集(上册)[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 速合;动物佳肴 植酸酶[N];科技日报;2002年
2 蔡忠仁 叶子;二代高效植酸酶抢得市场先机[N];中国化工报;2009年
3 李晓岩;植酸酶创下1200万元转让天价[N];中国化工报;2004年
4 王坚毅;植酸酶——值得大力推广的酶制剂[N];中国畜牧水产报;2001年
5 周进;饲料行业应推广植酸酶[N];中国乡镇企业报;2002年
6 本报记者 施铭;云南植酸酶生产技术国际领先[N];云南日报;2002年
7 ;饲料中添加植酸酶的优点[N];中国畜牧水产报;2000年
8 浙江省农业科学院 许尧兴;畜禽饲料中使用植酸酶应持慎重态度[N];中国畜牧报;2004年
9 冯志华;猪鸡日粮中添加植酸酶的经济效益[N];中国畜牧报;2003年
10 秀平;新型耐高温植酸酶在上海面世[N];中国渔业报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 彭远义;植酸酶产生菌的选育及高表达工程菌的构建研究[D];西南农业大学;2004年
2 吴琦;枯草芽孢杆菌植酸酶phyC基因的克隆及其表达研究[D];四川大学;2004年
3 王敏;植酸酶PHYA的高效表达及二硫键的功能分析[D];山东农业大学;2008年
4 朱连勤;不同的日粮磷水平下蛋用鸡生长、骨骼发育产蛋性能以及植酸酶应用效果的研究[D];中国农业大学;2004年
5 卢敏;降低糙米中抗营养因子植酸含量的途径及作用机理的研究[D];吉林大学;2006年
6 张铁鹰;植酸酶体外消化评定技术的研究[D];中国农业科学院;2002年
7 邓近平;生长猪植酸酶磷当量及其与日粮结构关系的研究[D];湖南农业大学;2007年
8 高晓蓉;无载体无标记转植酸酶基因大豆的获得[D];大连理工大学;2007年
9 韩进诚;1α-OH D_3和植酸酶对肉鸡磷代谢的影响及肠道NaPi-IIb基因表达调控[D];西北农林科技大学;2008年
10 朱忠珂;固态发酵植酸酶、溶菌酶对肉仔鸡及仔猪的应用研究[D];西北农林科技大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张卫兵;高产植酸酶菌株的选育和培养条件的研究[D];西北大学;2004年
2 程海娜;黑曲霉植酸酶菌株选育及其酶的分离纯化和性质研究[D];湖南师范大学;2003年
3 于新芬;黑曲霉N25植酸酶phyA基因玉米表达载体的构建[D];四川农业大学;2003年
4 彭益强;植酸酶高产菌株的诱变选育和融合筛选[D];华侨大学;2002年
5 李秀珍;植酸梅高产菌株的选育及酶的分离纯化和性质研究[D];山东轻工业学院;2007年
6 曾艳;植酸酶对生长猪生长性能及氮利用的研究[D];湖南农业大学;2004年
7 赵述淼;烟熏曲霉植酸酶基因phyA的克隆及其在毕赤酵母中的表达[D];华中农业大学;2004年
8 罗燕;黑曲霉N25抗性突变菌株的筛选及植酸酶phyA基因表达片段的序列分析[D];四川农业大学;2001年
9 李春明;几种微生物植酸酶的分离纯化及其酶学性质研究[D];西南农业大学;2005年
10 胡勇;枯草芽孢杆菌植酸酶的性质研究及产酶基因的克隆和序列分析[D];四川农业大学;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026