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《湖南师范大学》 2004年
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SiO_2微球与离子螯合微球的制备及应用于固定木瓜蛋白酶研究

程凡亮  
【摘要】:固定化酶可以提高酶的稳定性并增加酶的使用次数,以及易于与 产物和底物分离等优点而被广泛深入的研究。但目前常用的固定化方 法在制备固定化酶时酶活损失较大,且载体常常不可重复使用或载体 的再生操作复杂,限制了固定化酶的产业化应用。本文针对目前固定 化酶方法的不足之处提出了相应对策并对新的酶固定化方法和载体 进行了探索。 本文选用木瓜蛋白酶作为固定化对象,木瓜蛋白酶是一种来源广 泛的巯醇类植物蛋白酶,在食品、轻纺、医学等领域有着广泛的应用, 木瓜蛋白酶在酶动力学和结构学上都已得到了深入的研究,因此很适 合作为评测酶固定化方法效率的模式酶。 采用正硅酸乙酯与N-(β-氨乙基)一氨丙基三乙氧基硅烷在油包 水形成的微胶囊中同步水解的方法,一步法制备了氨基化的二氧化硅 颗粒,这种颗粒大小均匀,氨基含量和颗粒大小可控,氨基含量高达 5. 6mmol/g。此颗粒经戊二醛处理后,采用共价法固定木瓜蛋白酶, 固定化最适pH6. 5,最佳给酶量为15mg/g载体,固定化酶的最适反应 温度为70℃,最适反应pH为6. 5,固定化酶热稳定性,pH耐受性, 贮存稳定性都明显高于游离酶,表明此颗粒可作为一种优良的酶固定 化载体。 本文采用了反相悬浮包埋合成磁性琼脂糖微球,采用悬浮聚合法 合成苯乙烯一甲基丙烯酸羟乙酯,经环氧氯丙烷和亚氨基二乙酸处理 使微球带上螯合基团,经吸附铜离子或镍离子后用于固定化木瓜蛋白 酶。实验的初步结果显示,磁性琼脂糖微球可用于固定化木瓜蛋白酶, 并且经洗脱液洗脱,酶可以从载体上洗脱下来,载体经再吸附金属离 子后可以再生,并可用于再次固定化木瓜蛋白酶,载体重复使用3次 后酶活仍达首次时的90%。初步实验结果表离子螯合载体可用于固定 化木瓜蛋白酶,并作为可再生载体经多次使用。
【学位授予单位】:湖南师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:Q814.2

【引证文献】
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【同被引文献】
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