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《湖南师范大学》 2005年
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人类心脏发育候选基因hole和DAND5的克隆与功能研究

周军媚  
【摘要】:心脏是脊椎动物器官发生过程中最早形成的结构之一。心脏发育是一个复杂的过程,受一系列基因的精确调控。研究发现,某些基因在时空上的表达紊乱可导致先天性心脏病。目前心血管系统疾病已经成为威胁人类健康最大的两个敌人之一。鉴定在心脏发育过程中起调控作用的基因和分子途径,将促进人们从分子水平认识心脏发育和先天性心脏病发生的机制。MAPK信号传导途径是广泛存在于脊椎动物细胞调控的一种机制,许多转录因子是重要的MAPK靶分子。为了鉴定控制心脏发育和疾病发生的新基因,本研究从心脏cDNA文库中克隆了两个人类新基因Hole和DAND5。Hole基因位于14号染色体,Northern杂交结果表明其仅在心脏、骨骼肌、肝脏、胰腺中有表达,而在心脏的表达最强烈。通过构建增强型绿色荧光蛋白与hole融合基因的真核表达系统,转染COS-7细胞系,瞬时表达后荧光显微镜观察了它编码蛋白的活细胞定位及表达,表明hole蛋白主要在细胞膜和细胞质中表达,而且在细胞质中点缀着大小不一的点状荧光。DAND5基因位于19号染色体,属于DAN家族成员,已发现该家族成员能通过与骨形成蛋白(BMP)结合从而抑制其信号的传导。人类胚胎时期RT-PCR实验证明它在胚胎的各种组织中均有表达。利用GST表达系统,构建pGEX-4T-2-DAND5融合蛋白,通过IPTG诱导得到约48kDa的融合蛋白。构建真核表达载体pCMV-tag2C与DAND5的融合蛋白,转染COS-7细胞系,建立转基因的稳定表达细
【学位授予单位】:湖南师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q785

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【参考文献】
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【共引文献】
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