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《湖南师范大学》 2005年
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磁敏性羟基微球的构建及在固定青霉素酰化酶中的应用

王卫  
【摘要】:固定化酶可以提高酶的稳定性并增加酶的使用次数,以及易与产物和底物分离等优点而被广泛深入的研究。但目前常用的固定化方法在制备固定化酶时酶活损失较大,限制了固定化酶的产业化应用。本文针对目前固定化酶方法的不足之处提出了相应解决方法,并通过对用于固定酶的磁敏性载体及固定化过程进行了深入细致研究,取得有益的成果。 本文采用悬浮聚合法合成了一系列以磁性Fe_3O_4为核心的甲基丙烯酸羟乙酯-苯乙烯共聚球状磁性微球,经环氧氯丙烷活化,制备活化度达到1600μmol/g,粒径为120~200μm的微球。通过对不同交联度的活化微球进行固定化青霉素酰化酶实验,发现交联度30%的微球固定化酶效果最优,并进一步对固定化青霉素酰化酶的条件进行了研究,得到了较好的固定化参数:给酶量为2000U/g(干载体),反应时间为24h,反应温度35℃,pH为8.0。在此条件下进行酶固定化,固定化酶活性为782.2U/g(干载体),固定化效率88.72%,活性回收率为33.63%;水解青霉素G钾盐的最适温度为45℃,最适PH为8.5;固定化酶的储存和操作稳定性良好。除此之外,测定了酶促反应的动力学常数:溶液酶和固定化酶的米氏常数,分别为1.188×10~(-5)mol/L和5.879×10~(-4)mol/L,苯乙酸的竞争性抑制常数为2.685×10~(-4)mol/L。应用苯乙酸作为酶定向化固定试剂,使酶固定化过程中活性回收比同等条件下不加苯乙酸的提高8.35%。 通过研究,最终获得了一种磁敏性、高性能的青霉素酰化酶载体和应用酶竞争性抑制剂作为酶定向化固定的方法,不仅有一定的理论意义,而且拥有巨大的经济价值,降低固定化青霉素酰化酶的生产成本将大力促进我国β-内酰胺类抗生素的产业发展。
【学位授予单位】:湖南师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q814

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