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《湖南师范大学》 2005年
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苏云金杆菌4.0718新菌株与库斯塔克亚种HD-1菌株杀虫晶体蛋白的蛋白质组研究

宋晟  
【摘要】:本室选育的苏云金杆菌4.0718新菌株与库斯塔克亚种HD-1比较,杀虫谱相似,但毒力更强,在生产应用中表现出高效、快速的杀虫特点。为了比较研究苏云金杆菌4.0718新菌株与库斯塔克亚种HD-1的杀虫晶体蛋白,了解杀虫晶体蛋白与杀虫活性之间的内在联系以及深入研究杀虫晶体蛋白的结构功能关系。根据苏云金杆菌杀虫晶体蛋白疏水性强含二硫键多的特性,设计了五种裂解液,并对上样量、聚焦时间等相关技术进行了比较研究和条件优化,获得了分辨率重复性较好的双向电泳银染图谱。结果显示,蛋白点主要分布在等电点4-7,分子量10-130 kDa的区域。运用PDQUEST软件对扫描后的Bt 4.0718和HD-1的2-DE图谱进行斑点检测,斑点匹配和量化,分别检测到122±9个和126±11个蛋白质斑点数,其中两者有64个蛋白质斑点相互匹配,发现8个蛋白质斑点只在HD-1的2-DE图谱中检测到,6个蛋白质斑点只在Bt 4.0718的2-DE图谱中检测到,有11个蛋白质斑点在含量上有显著变化,初步反映了它们在毒力以及杀虫谱上的相似性和差异性。对部分蛋白质斑点测定胶内酶解后的肽质量指纹图谱,MASCOT软件查询SWISS-PROT数据库,获知苏云金杆菌4.0718菌株与库斯塔克亚种HD-1菌株的杀虫晶体蛋白中均含有对鳞翅目幼虫有高毒力的蛋白Cry1Ac和对鳞翅目和双翅目幼虫都有毒力的蛋白Cry2Aa。其中Bt 4.0718表达的Cry1Ac含量较HD-1高,而HD-1表达的Cry2Aa含量较Bt 4.0718高,这两种杀虫晶体蛋白在量上的差异与菌株杀虫活性密切相关。结合CPHmodles,Ds ViewerProTrial和Swiss-PdbViewer软件分析Cry1Ac毒性核心片段发现Cry1Ac与Cry1Aa的毒性核心片段空间结构基本一致,但在Domain Ⅱ loop2、Domain Ⅲ(~(486)IHFPSTS~(492))处存在显著差异,说明两者与中肠受体蛋白结合的亲和力不同,导致其在杀虫毒力上的差异。
【学位授予单位】:湖南师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S482.3

【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 付祖姣;苏云金芽胞杆菌4.0718新菌株功能基因组的研究和高效杀虫工程菌的构建[D];湖南师范大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 李小辉;苏云金杆菌4.0718新菌株不同生长时期的蛋白质组研究[D];湖南师范大学;2008年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前1条
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中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【二级参考文献】
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【相似文献】
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