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花粉育性与长穗颈水稻抽穗性状的相关性研究及eui基因的克隆初探

贺安娜  
【摘要】:雄性不育水稻包颈是影响杂交种子生产的重要因素。隐性长穗颈(eui)基因具有减轻或完全解除雄性不育水稻包颈的作用。但具隐性长穗颈基因的光温敏核不育水稻因抽穗时期不同其包颈程度变化较大,为了揭示影响这类不育系包颈程度变化的原因,本文以培矮64S为对照,分析了隐性长穗颈光温敏核不育水稻花粉育性与穗颈节伸出剑叶叶鞘长度的关系;用ISSR分子标记分析了隐性长穗颈光温敏核不育水稻与对照DNA的差异;利用SSH技术对隐性长穗颈光温敏核不育水稻穗颈节间特异表达的cDNA片段进行了分析。主要研究结果如下: (1)在长日高温不育条件下,长穗颈光温敏核不育水稻穗颈节伸出剑叶叶鞘的长度与花药中不育花粉总量呈显著正相关;在短日、低温可育条件下,当花粉可染率为0.01%~10.00%时,穗颈节伸出剑叶叶鞘的长度与花粉可染率呈极显著正相关,当花粉可染率大于10.00%以后,穗颈节伸出长度与花粉可染率正相关的显著性逐渐降低。穗颈伸出长度的增加主要由第1节节问伸长所致。在28~20℃人工梯度温度条件下,长穗颈光温敏核不育水稻和光温敏核不育水稻培矮64S花粉可染率和花粉量变化规律相似,但长穗颈光温敏核不育水稻第1节节间长度增加的幅度明显大于培矮64S。 (2)选用37个ISSR引物对长穗颈光温敏核不育水稻与培矮64S进行了PCR扩增,扩增所显示的多态性条带未见差异。 (3)以培矮64S(PA)为对照群体,长穗颈光温敏核不育水稻(CX)为目标群体,进行抑制差减杂交。用经过PA cDNA差减的CX cDNA构建一个差减文库。该文库包含约130个独立的重组克隆,插入片段平均大小为185 bp左右。采用差减前的PA cDNA和CX cDNA以及正向/反向差减杂交后的cDNA为模板标记探针,对随机挑取的96个重组克隆进行差示筛选,结果筛选出与差减前的隐性长穗颈光温敏核不育水稻CX cDNA探针和正向差减的cDNA探针都有杂交信号的特异表


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