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《湖南师范大学》 2007年
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鼠肝质膜蛋白质组方法学研究

魏颖娟  
【摘要】: 本文以鼠肝质膜为研究对象,旨在优化提取、纯化以及鉴定质膜蛋白质的方法。主要进行了两个方面的实验:(1)纯化鼠肝质膜蛋白质方法学研究;(2)肝质膜蛋白质组研究中染色方法比较及优化。 第一方面的实验以鼠肝为材料,采用两步蔗糖密度梯度离心法纯化质膜,用扫描电镜分析检测质膜纯度,1DE、2DE分离质膜蛋白质,且PDQuest软件分析图谱。从不同纯化步骤得到的膜蛋白质的电泳图谱中找出82个不同的蛋白质点,然后对其进行酶解和质谱分析,最后共鉴定到56个蛋白质,其中有43个是在PDQuest软件中定义为2倍差异的点。从蛋白质定位信息中可以看出其中有35个2倍差异的点,是定位于质膜上的蛋白质;另外7个2倍差异点,5个为线粒体蛋白、2个为过氧化物酶体蛋白。此外13个无明显差异的蛋白质点由于定位信息不明确,推测为质膜与其它细胞器共定位的蛋白质。以上结果说明两步蔗糖密度梯度提取有利于质膜蛋白的富集。 然后探索了几种新方法(双水相,高盐高pH结合双水相,双水相结合蔗糖密度梯度)对质膜蛋白质进行了富集。研究结果表明:高盐高pH结合双水相,以及双水相结合蔗糖密度梯度的方法都能较好地富集整合膜蛋白质,其中双水相结合蔗糖密度梯度的方法又优于高盐高pH结合双水相处理。将所提取的蛋白质用1DE-PAGE分离,ESI-Q-TOF质谱鉴定。鉴定的结果表明双水相和蔗糖密度梯度离心作为两种不同的提取及纯化质膜的方法的结合使用,可以进一步纯化质膜得到更好的分离效果。 为了提高组织细胞质膜的纯度,研究中还摸索使用了一种新的亲和法纯化组织质膜。即用抗体磁珠免疫亲和分离纯化C57小鼠肝脏质膜的方法。与密度梯度离心法相比,质膜富集了3倍左右,线粒体减少了约2倍。同时比较了四种亲和提取方式,优化了样品、磁珠以及抗体之间量的比例。研究鉴定的质膜或质膜相关蛋白质的比例明显高于使用其它方法得到的质膜蛋白质的比例。 第二方面,对鼠肝质膜蛋白质组进行了5种染色方法的比较实验,发现荧光染色的质谱鉴定准确性高于快速银染法,快速银染法又高于普通银染法。考染中G-250的效果比R-350好,且背景低、快速。对考染后切取了高丰度蛋白质点后的胶块进行快速银染,既可以提高鉴定的准确性又可以不丢失低丰度的蛋白质。
【学位授予单位】:湖南师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q51

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前8条
1 詹显全,陈主初;蛋白质组中蛋白质鉴定技术的研究近况[J];国外医学(分子生物学分册);2002年03期
2 罗琛;刘筠;;人工诱导草鱼和鲫鱼雌核发育的研究[J];湖南师范大学自然科学学报;1991年02期
3 万晶宏,贺福初;蛋白质组技术的研究进展[J];科学通报;1999年09期
4 曾嵘,俞利荣,邵晓霞,夏其昌;电喷雾离子阱质谱法鉴定人肝癌细胞双向凝胶电泳胶内蛋白质[J];科学通报;2000年06期
5 成海平,钱小红;蛋白质组研究的技术体系及其进展[J];生物化学与生物物理进展;2000年06期
6 俞利荣,曾嵘,夏其昌;蛋白质组研究技术及其进展[J];生命的化学;1998年06期
7 丁达夫,盛泉虎,解涛;蛋白质组信息学[J];生命的化学;1998年06期
8 曹锐,张丽军,聂松,王贤纯,梁宋平;多维色谱-串联质谱联用技术分离和鉴定小鼠肝脏质膜蛋白质[J];中国生物化学与分子生物学报;2005年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 程果;李学军;乔志刚;石灵;彭新亮;;冷休克诱导黄河鲇(Silurus asotus)二倍体雌核发育[J];安徽农业科学;2008年23期
2 刘文海;;鱼类人工雌核发育的研究进展[J];安徽农业科学;2008年35期
3 徐鑫;郑明珠;刘景圣;;林蛙输卵管糖蛋白的纯化方法研究[J];安徽农业科学;2010年11期
4 陈成勋;王晓梅;樊振中;戴伟;王欣;;革胡子鲶体表粘液抗菌肽的分离与纯化及抑菌活性研究[J];安徽农业科学;2010年26期
5 梁拥军;孙向军;史东杰;苏建通;杨璞;孙砚胜;张欣;;用团头鲂精子诱导红白锦鲤雌核发育研究[J];安徽农业科学;2010年29期
6 王存;王晓梅;季延滨;徐敏;戴伟;潘宝平;;磷酸盐缓冲液的浓度和pH对革胡子鲶肠道抗菌蛋白/肽分级盐析的影响[J];安徽农业科学;2011年28期
7 陈主初;肿瘤蛋白质组学的研究进展[J];癌症;2004年02期
8 吴晓英,李萃,肖志强,李建玲,冯雪萍,易红,李茂玉,陈主初;人支气管上皮组织癌变各阶段2-DE图谱及差异分析[J];癌症;2004年05期
9 朱红;曾亮;袁君;申良方;肖志强;;中晚期宫颈癌同期放化疗敏感性相关蛋白的筛选[J];癌症;2008年04期
10 宫霞;王兰芳;郭本恒;;新型抗高血压活性肽GAP-A的一级结构及生理活性研究[J];氨基酸和生物资源;2009年03期
中国重要会议论文全文数据库 前9条
1 谢圣高;李刚;王立轩;宁勇;原厚;青山俊文;;飞行质谱法测定血清脑硫苷脂[A];中医药生物化学与分子生物学通讯[C];2008年
2 肖志强;;肿瘤蛋白质组学的研究进展[A];湖南省生理科学学会2004年度学术年会论文摘要汇编[C];2004年
3 钟伯雄;张金卫;;蛋白质组研究[A];中国蚕学会第三届青年学术研讨会暨浙江省第二届青年学术论坛——蚕桑分论坛论文集(上册)[C];2001年
4 颜海燕;钟伯雄;沈飞英;陆云翀;;家蚕胚胎蛋白质双向电泳样品制备方法探讨[A];中国蚕学会第三届青年学术研讨会暨浙江省第二届青年学术论坛——蚕桑分论坛论文集(上册)[C];2001年
5 吴超群;;蛋白质组学简介(Proteomics)[A];全国中西医结合血液病学术研讨会、浙江省中西医结合学会血液病专业委员会成立大会首次学术年会暨继续教育学习班论文汇编[C];2006年
6 沃兴德;;科研标书的写作方法与思路[A];浙江省中西医结合学会心血管病专业委员会换届、第五次学术年会暨省级继续教育学习班资料汇编[C];2005年
7 沃兴德;卢德赵;施孟如;李毅;唐利华;沃立科;;温补肾阳药对激素依赖性肾阳虚动物治疗前后肝线粒体蛋白质组影响的研究[A];浙江省生物化学与分子生物学学术交流会论文集[C];2005年
8 金光亮;;论证候基因组学和证候蛋白质组学[A];2002中医药博士论坛——中医药的继承、创新与发展[C];2002年
9 郑伟文;刘波;;生物信息学与药用植物研究[A];全国中药材GAP研究与应用学术研讨会会议论文汇编[C];2004年
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1 成广雷;国内外种子科学与产业发展比较研究[D];山东农业大学;2009年
2 赵洪岩;采用非标记定量技术对变形链球菌耐氟菌株的差异蛋白质组学研究[D];吉林大学;2011年
3 唐建;DPPⅣ酶抑制减轻大鼠肺移植缺血再灌注损伤的差异蛋白组学研究[D];华中科技大学;2011年
4 郑伟;骨巨细胞瘤发病与复发机制的比较蛋白质组学研究[D];第二军医大学;2011年
5 王立鹏;特征提取及分类算法在膜蛋白分类预测问题中的应用[D];兰州理工大学;2010年
6 孟艳艳;一氧化氮对棉花叶片衰老过程中抗氧化物酶及叶片蛋白质组的影响[D];中国农业科学院;2011年
7 何文锦;灰木相思无菌培养体系的建立与寒胁迫蛋白质组学的研究[D];福建农林大学;2007年
8 张虹;雌核发育草鱼群体的建立及其主要生物学特性研究[D];湖南师范大学;2011年
9 吴星烨;RNA干扰结肠癌细胞HIF1-α基因的蛋白质组学分析[D];重庆医科大学;2011年
10 胡中华;异氟烷麻醉后老龄大鼠海马突触体比较蛋白质组学研究[D];中南大学;2011年
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1 谢进;抗鹅膏肽的全合成及其活性测定[D];中南林业科技大学;2009年
2 王琦;免疫抑制剂Fk506对乳腺肿瘤细胞株的体外作用研究[D];浙江理工大学;2010年
3 赵丹丹;磷胁迫下油菜幼苗叶片的蛋白质组学初步研究[D];郑州大学;2010年
4 阮崇美;山羊精子蛋白质组学技术体系优化及冻融前后精子差异蛋白分析[D];安徽农业大学;2010年
5 蒲媛媛;白菜型冬油菜抗寒性的生理特性与蛋白质组的电泳分析[D];甘肃农业大学;2010年
6 邹成林;壳寡糖对甘蔗干旱胁迫下生理生化及蛋白质差异表达的影响[D];广西民族大学;2010年
7 白羽嘉;阿魏化学成分对阿魏侧耳菌丝生长及蛋白质表达的研究[D];新疆农业大学;2010年
8 宋涛;奶牛血液红细胞抗菌肽的分离与纯化[D];河南科技学院;2010年
9 王蕾;肝细粒棘球蚴周围纤维囊壁形成机制的初步探索[D];石河子大学;2010年
10 李倩;大肠杆菌苹果酸脱氢酶基因mdh克隆、高效表达及酶学性质研究[D];江南大学;2010年
【二级参考文献】
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1 张素艳,王静,卞利萍,许云敏,王洪海,杨芃原;微柱高效液相色谱-质谱/质谱快速鉴定混合蛋白质新方法[J];高等学校化学学报;2002年07期
2 万晶宏,贺福初;蛋白质组技术的研究进展[J];科学通报;1999年09期
3 俞利荣,王楠,吴高德,徐永华,夏其昌;人肝癌细胞系BEL-7404和正常肝细胞系L-02表达的蛋白质组双向凝胶电泳分析[J];科学通报;2000年02期
4 丁达夫,盛泉虎,解涛;蛋白质组信息学[J];生命的化学;1998年06期
5 谢玲,应万涛,张开泰,项小琼,钱小红,王玉芝,吴德昌;双向电泳和肽质量指纹谱技术鉴定支气管上皮细胞恶性转化相关蛋白质ANX1-human[J];中国生物化学与分子生物学报;2000年05期
6 谢锦云,李小兰,陈平,曹梦林,陈良碧,梁宋平;温敏核不育水稻花药蛋白质组初步分析[J];中国生物化学与分子生物学报;2003年02期
7 王贤纯,范春明,唐新科,陈平,梁宋平;牛血清白蛋白胰蛋白酶酶解产物的色谱-质谱联用分析及其三种数据库搜寻鉴定方法的比较[J];中国生物化学与分子生物学报;2004年03期
【相似文献】
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1 李颖;汝少国;邴欣;;美国红鱼卵黄原蛋白的分离纯化及电泳性质鉴定[J];应用与环境生物学报;2007年01期
2 陈浩,陈于红,朱德煦,刘建宁;重组蛋白质纯化技术[J];中国生物工程杂志;2002年05期
3 李彧娜;石贵阳;王武;王正祥;;Rhizopus microsporus var. chinensis生淀粉糖化酶的分离纯化及酶学性质[J];应用与环境生物学报;2010年05期
4 韩继刚,康明,刘平芳,王安利,叶寅,田波;利用聚乙二醇(PEG8000)纯化小球藻病毒FJ-1[J];微生物学报;2000年05期
5 贾伟章,孙晓凤,郭琼林;养殖乌鳢类立克次体分离纯化的初步研究[J];水生生物学报;2004年04期
6 何生根,黄学林,傅家瑞;豇豆幼叶多胺氧化酶的分离纯化[J];中山大学学报(自然科学版);1999年05期
7 陈松,吴敬音,沈新莲,张荣铣,黄骏麒;苏云金杆菌HD-73杀虫蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备[J];江苏农业学报;1999年04期
8 唐亚雄,赵建,丁诗华,刘世贵,杨志荣;产气肠杆菌几丁质酶的分离纯化及性质研究[J];微生物学报;2001年01期
9 薛勇,张长铠,刘涛;洋葱伯克霍尔德氏菌产邻苯二酚2,3-双加氧酶的研究[J];生命科学研究;2003年02期
10 任国梅,陈孜,黎婉玲,谭见容;高质量木瓜蛋白酶纯化工艺研制探讨[J];药物生物技术;1997年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨明俊;杨庆尧;杨晓彤;;纳豆激酶的研究进展[A];第六届全国药用植物和植物药学术研讨会论文集[C];2006年
2 谭荣荣;龚自明;刘明炎;毛迎新;;灰茶尺蠖核型多角体病毒多克隆抗体的制备及检测效果分析[A];中国茶叶科技创新与产业发展学术研讨会论文集[C];2009年
3 王利民;秦贵信;;三种亲和层析体系纯化大豆凝集素的比较研究[A];动物营养与饲料研究——第五届全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2006年
4 黄恩毅;陈伟;杨力;杨恬;;免疫磁珠法纯化大鼠CD34~+毛囊干细胞[A];中国细胞生物学学会第九次会员代表大会暨青年学术大会论文摘要集[C];2007年
5 沈奇;顾龚平;张卫明;吴国荣;;植物绿原酸的研究动态[A];中医药现代化与科技创新高层论坛暨第二届金陵名医论坛论文集[C];2007年
6 姜洪峰;钱俊青;;甲壳素废水絮凝物中虾青素提取纯化[A];首届长三角科技论坛——长三角生物医药发展论坛论文集[C];2004年
7 彭黎;梁宋平;;一种新型虎纹毒素的表达纯化及功能探索[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要集[C];2007年
8 黄进;;转基因马铃薯表达体系中人白细胞介素-12的纯化及生物学活性的鉴定[A];第九届西南三省一市生物化学与分子生物学学术交流会论文集[C];2008年
9 英伟;陆文清;龚利敏;;枯草芽孢杆菌MA139抗菌蛋白纯化及其部分特性研究[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
10 彭黎;梁宋平;;一种新型虎纹毒素的表达纯化及功能探索[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 季英德;吕志国;纯化火车站悄悄改民营 [N];中国商报;2002年
2 高祥森;民间资本搭上火车[N];经理日报;2002年
3 江南大学纺织服装学院 王树根;毛混纺产品的染色最新动态———毛涤篇[N];中国纺织报;2006年
4 符壮才 刘嫦玉;细菌鞭毛镀银染色有新方法[N];健康报;2006年
5 记者孙覆海 通讯员 高祥森 周立勋;山东首家民营火车站投运[N];工人日报;2002年
6 孙有为;植物染料推广正当时[N];中国化工报;2002年
7 兰州市公安局刑警支队技术大队 李敏;使用“502”胶提取光滑纸张上的指纹[N];甘肃法制报;2005年
8 陆旭升;浙师大博士为金华经济建设大显身手[N];金华日报;2008年
9 张中桥;脑脊液细胞学检查有助于疾病早期确诊[N];保健时报;2005年
10 彼洋;开发保护少数民族传统文化[N];中国社会科学院院报;2005年
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1 李强;放射状土壤杆菌M-503产生物絮凝剂的制备、纯化及应用研究[D];山东大学;2005年
2 徐境羚;马鹿精子膜蛋白纯化与理化性质分析[D];东北林业大学;2007年
3 马翠丽;天花粉蛋白新有效组分的纯化、一级结构及免疫调节和抗肿瘤活性研究[D];吉林大学;2008年
4 王敏炜;碳纳米管的制备及负载非晶态NiB合金的催化性能的研究[D];华南理工大学;2003年
5 陈静;嗜热毛壳菌热稳定糖化酶纯化及其编码基因的克隆与表达[D];山东农业大学;2006年
6 朱洁;乳酸链球菌素耐药菌株的筛选和耐药机理研究[D];浙江大学;2009年
7 于金刚;碳纳米管的化学修饰及对甲磺酸帕珠沙星的缓释研究[D];中南大学;2008年
8 惠明;枯草芽孢杆菌B53的分离鉴定及产聚γ-谷氨酸的研究[D];中国农业大学;2005年
9 胡志明;血管内皮细胞生长因子的制备及其治疗股骨头坏死的实验研究[D];第一军医大学;2005年
10 张玉芹;亚硝胺生物降解与硝酸还原酶的纯化及其编码基因的克隆[D];山东农业大学;2006年
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1 魏颖娟;鼠肝质膜蛋白质组方法学研究[D];湖南师范大学;2007年
2 陈晖;脂肪酶高产菌株筛选、产酶条件优化及脂肪酶大量纯化研究[D];华中科技大学;2005年
3 刘娜;茁酶多糖生产菌的复合诱变筛选及发酵条件研究[D];吉林农业大学;2005年
4 张红静;超滤法提取与纯化香菇多糖[D];天津大学;2006年
5 宋影;Armillariella tabescens EJLY2098β-甘露聚糖酶47K的生产、纯化及性质与79K(P2)的基因克隆[D];暨南大学;2007年
6 王建波;玉米花粉多糖的提取纯化及生物活性的研究[D];山东师范大学;2005年
7 陈文芳;重组人白细胞介素18的纯化、复性及其生物活性检测[D];山东大学;2005年
8 卢明艳;越橘原生质体分离纯化研究[D];吉林农业大学;2006年
9 崔富昌;米曲霉植酸酶的分离纯化、性质研究及其基因的克隆[D];山东大学;2006年
10 付博;狂犬病疫苗与蟾皮提取液联合应用预防狂犬病效果的研究[D];吉林大学;2007年
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