收藏本站
《南华大学》 2013年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

胰岛素对人脐静脉内皮细胞HMGA1表达调控机理研究

陈灿  
【摘要】:目的:观察不同浓度的胰岛素对体外培养的人脐静脉内皮细胞HMGA1表达的影响,同时探讨PI3K信号通路和转录因子SP1在胰岛素调控内皮细胞HMGA1表达过程中的作用,以进一步阐明胰岛素与糖尿病相关性动脉粥样硬化之间的关系。 方法:以体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)为研究对象,研究了胰岛素对内皮细胞HMGA1表达的影响及相关机制。实验分为四部分:第一部分研究胰岛素对内皮细胞HMGA1表达的影响。量效研究:实验分为6组,即对照组(不含胎牛血清培养液)、10~(-11)、10~(-10)、10~(-9),10~(-8)及10~(-7)mol/L胰岛素组,处理内皮细胞24小时后,应用RT-PCR和免疫荧光法联合检测HMGA1表达。时效研究:实验亦分为6组,即以10~(-9)mol/L胰岛素分别处理内皮细胞0、2、4、8、16及24小时后,应用RT-PCR检测HMGA1表达。第二部分研究PI3K信号通路在胰岛素调控内皮细胞HMGA1表达过程中的作用。实验分为6组:即对照组(不含胎牛血清培养液)、胰岛素(10~(-9)mol/L)组、50μmol/L wortmanin+10~(-9)mol/L胰岛素组、100μmol/L wortmanin+10~(-9)mol/L胰岛素组、10μmol/L LY294002+10~(-9)mol/L胰岛素组及20μmol/L LY294002+10~(-9)mol/L胰岛素组。先以PI3K通路抑制剂作用内皮细胞2小时后,再加入10~(-9)mol/L胰岛素处理,应用RT-PCR和免疫荧光法联合观察内皮细胞HMGA1表达情况。第三部分研究胰岛素对内皮细胞HMGA1启动子活性的影响及机制。量效研究:实验分为6组,即pGL4.10组、对照组(不含胎牛血清胰岛素)、10~(-11)mol/L、10~(-10)mol/L、10~(-9)mol/L、10~(-8)mol/L及10~(-7)mol/L胰岛素组,处理转染了HMGA1启动子的内皮细胞24小时后,检测其活性的变化。最后观察相关PI3K抑制剂对胰岛素调控的HMGA1启动子活性的影响。HMGA1启动子活性的检测应用荧光素酶检测系统。第四部分研究转录因子SP1在胰岛素调控内皮细胞HMGA1表达过程中的作用。以不同浓度的胰岛素(10~(-11)mol/L~10~(-7)mol/L)处理内皮细胞,应用CHIP-PCR的方法观察转录因子SP1在胰岛素调节内皮细胞HMGA1表达中的作用。 结果:1)胰岛素对内皮细胞HMGA1表达的影响。量效研究,RT-PCR结果:与对照组相比,10~(-9)和10~(-8)胰岛素组内皮细胞的HMGA1mRNA的表达明显升高(分别为1.67和1.49倍),且以10~(-9)mol/L胰岛素组的升高幅度最为明显(p0.05);免疫荧光结果:与对照组相比,10~(-9)胰岛素组内皮细胞的HMGA1平均荧光强度明显升高(1.26倍),其它组升高不明显(p0.05)。时效研究:与0小时组相比,8和16小时胰岛素组内皮细胞的HMGA1mRNA的表达明显升高(分别为1.47和1.32倍),以8小时胰岛素组的升高幅度最为明显(p0.05)。2)PI3K信号通路在胰岛素调控内皮细胞HMGA1表达过程中的作用。RT-PCR和免疫荧光法联合检测显示:PI3K抑制剂Wortmannin(浓度分别为50及100μmol/L)对胰岛素诱导内皮细胞HMGA1mRNA转录的抑制作用均不明显(p0.05),但LY294002(浓度分别为10及20μmol/L)均能明显抑制胰岛素诱导的HMGA1mRNA转录(p0.05)。3)胰岛素对内皮细胞HMGA1启动子活性的影响及机制。量效研究结果:与对照组相比,10~(-11)、10~(-10)、10~(-9)、10~(-8)及10~(-7)mol/L胰岛素组HMGA1启动子活性均明显升高(分别为1.49、1.81、1.54、1.5和1.44倍),其中以10~(-10)mol/L浓度作用最为明显(p0.05)。时效研究结果:与对照组(0小时)相比,2、4、8小时胰岛素组内皮细胞的HMGA1启动子活性均明显升高(分别为1.24、1.45和1.78倍),其中8小时组上升最明显(p0.05)。PI3K抑制剂Wortmannin对胰岛素诱导的HMGA1启动子活性无明显抑制作用(p0.05),而LY294002能明显抑制胰岛素诱导的HMGA1启动子活性(p0.05)。4)转录因子SP1在胰岛素调控内皮细胞HMGA1表达过程中的作用。ChIP PCR结果表明,10~(-9)mol/L胰岛素处理组SP1与HMGA1启动子结合能力明显增强(p0.05),说明胰岛素可通过促进转录因子SP1与HMGA1的启动子结合而调节HMAG1的表达。 结论:1)PI3K/AKT信号途径参与调节胰岛素上调内皮细胞HMGA1表达。2)胰岛素可增强内皮细胞中转录因子SP1与HMGA1启动子区的结合能力。
【学位授予单位】:南华大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R587.1

手机知网App
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 杜航;刘保林;;葛根素干预血管内膜胰岛素抵抗的应用前景[J];海峡药学;2011年08期
2 连欣;薛耀明;朱波;陆雯;刘宁;;低糖诱导人脐静脉内皮细胞一氧化氮与活性氧变化的研究[J];热带医学杂志;2011年09期
3 杨秀红;陈树春;宋光耀;;高脂饮食诱导胰岛素抵抗大鼠血清Apelin与VCAM-1的关系[J];山东医药;2011年16期
4 庞谊;唐晶;陈敏;董振红;;高压氧辅助治疗对糖尿病足溃疡患者血清胰岛素样生长因子-1的影响[J];中国医药指南;2012年08期
5 张宏;胡向东;钱林学;;血管回声跟踪技术的研究进展与展望[J];中华临床医师杂志(电子版);2010年12期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 廖明松;邓旦;梁燕;陶杰;陈重;赖小今;;2型糖尿病患者颈动脉内-中膜超声研究[A];2011'中国西部声学学术交流会论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 钱令波;黄酮类对实验性糖尿病心血管改变的干预研究[D];浙江大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 张琳;斑点追踪技术在评价2型糖尿病患者右心功能中的应用研究[D];第四军医大学;2011年
2 连欣;葡萄糖再灌注对人脐静脉内皮细胞氧化损伤及其机制研究[D];南方医科大学;2011年
3 邹靓;伴有糖尿病的冠心病患者桡动脉形态学及内皮功能研究[D];南京医科大学;2012年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郭瑜健;胰岛素抵抗与缺血性脑血管病[J];国外医学.脑血管疾病分册;1998年01期
2 李海玲,宋远民,周乃胜;老年高血压患者的胰岛素抵抗及硝苯地平干预的影响[J];心血管康复医学杂志;1998年01期
3 支忠继,康胜群,李英;Ⅱ型糖尿病中胰岛素抵抗与血脂异常的关系[J];现代中西医结合杂志;1999年08期
4 李光伟,姜亚云,杨文英,郑辉,王金平,肖建中,胡泽溪,胡英华,潘孝仁;胰岛素抵抗及胰岛素分泌对2型糖尿病预防干预效果的影响──糖尿病预防干预策略探讨[J];中国糖尿病杂志;1999年03期
5 赵铁耘,李贵星,黄亨建,李秀钧,周国跃;2型糖尿病患者血清FFA变化与胰岛素抵抗关系的探讨[J];华西医科大学学报;2000年02期
6 占伊扬!210029,钱卫冲!210029,王海燕!210029;原发性高血压患者血管紧张素转换酶基因多态性与胰岛素抵抗的关系[J];临床荟萃;2000年02期
7 刘见桥,黄艳仪;胰岛素抵抗与妊高征[J];广州医药;2000年06期
8 郭莹,殷跃,田立芬;老年人血尿酸与胰岛素抵抗关系探讨[J];黑龙江医学;2000年05期
9 崔永生,韩宗超,李斌;高血压心脑血管危险事件与胰岛素抵抗的关系[J];内科急危重症杂志;2000年01期
10 管义祥,缪永华,曹桂龙;颅脑损伤急性期胰岛素抵抗及临床观察[J];伤残医学杂志;2000年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 雷红伟;陆付耳;董慧;徐丽君;黄召谊;汪健红;;染料木苷改善HepG2细胞中FFAs诱导的胰岛素抵抗[A];内分泌代谢病中西医结合研究——临床与基础[C];2010年
2 褚晓蕾;杨风英;牛燕媚;傅力;;饮食干预对胰岛素抵抗小鼠骨骼肌泛素—蛋白酶体系统信号通路相关蛋白影响的研究[A];2011年中国生理学会运动生理学专业委员会会议暨“运动与骨骼肌”学术研讨会论文集[C];2011年
3 刘倩;叶菲;陶荣亚;贺伊博;刘峻瑒;田金英;;大黄酸改善小鼠胰岛素抵抗的实验研究[A];中国中西医结合学会微循环2009学术大会会议指南及论文摘要[C];2009年
4 戴小良;左艳;史锋;王行宽;范金茹;李水晴;;滋生青阳片改善胰岛素抵抗及逆转高血压左室肥厚的临床研究[A];中医理论临床应用学术研讨会论文集[C];2007年
5 李伟珍;李伟;吴金雨;刘立宾;王林;赵惠玲;吕建新;;高脂诱导胰岛抵抗大鼠模型肝脏microRNA表达谱分析[A];遗传学与社会可持续发展——2010中国青年遗传学家论坛论文摘要汇编[C];2010年
6 刘倩琦;申飞飞;谢雯;石星;倪世宁;顾威;朱子阳;;IGF-1干预对宫内发育迟缓后胰岛素抵抗的保护作用[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编(上册)[C];2010年
7 张传科;;中医药对老年糖尿病胰岛素抵抗的认识[A];中国重汽科协获奖学术论文选编(2002-2003)[C];2004年
8 韩玉麒;王吉影;袁学宇;程晓芸;盛春君;吴超群;;伴胰岛素抵抗的肥胖者脂肪组织的蛋白质组学研究[A];中国蛋白质组学第三届学术大会论文摘要[C];2005年
9 吕圭源;刘赛月;;中药抗胰岛素抵抗研究进展[A];浙江省2005年中药学术年会论文集[C];2005年
10 朱大龙;胡云;沈山梅;徐小华;童国玉;;急性时相血清淀粉样蛋白A与2型糖尿病患者胰岛素抵抗的关系[A];2006年中华医学会糖尿病分会第十次全国糖尿病学术会议论文集[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 衣晓峰;2型糖尿病动物模型成模率逾85%[N];健康报;2005年
2 张家庆 (教授);适度锻炼身体改善胰岛素抵抗[N];上海中医药报;2003年
3 成枫;“青钱柳”可改善胰岛素抵抗[N];中国中医药报;2006年
4 赵振爱;中药可改善糖尿病胰岛素抵抗[N];中国中医药报;2007年
5 傅敏端;你知道胰岛素抵抗吗[N];家庭医生报;2008年
6 第一军医大学珠江医院内分泌科 刘宏;糖尿病和胰岛素抵抗[N];中国老年报;2003年
7 第一军医大学珠江医院内分泌科 刘宏;糖尿病和胰岛素抵抗[N];科技日报;2003年
8 副主任医师 韩咏霞;为何妊娠期妇女易发胰岛素抵抗[N];保健时报;2006年
9 刘士敬刘红虹;肝源性糖尿病患者宜早用胰岛素[N];家庭医生报;2007年
10 湘雅二医院 陈化;胰岛素抵抗:糖尿病、心血管疾病的重要危险因素[N];大众卫生报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 朱伟;摄食抑制因子NUCB2/Nesfatin-1对机体胰岛素敏感性的影响[D];重庆医科大学;2011年
2 王雪云;Beganatide对实验性糖尿病的治疗作用及机制研究[D];吉林大学;2010年
3 付方明;新诊断标准下糖尿病前期人群代谢状况及胰岛素抵抗与胰岛功能研究[D];山东大学;2010年
4 范征;己糖-6-磷酸脱氢酶和11β-羟基类固醇脱氢酶1的相互调节在2型糖尿病发病机制中的作用[D];吉林大学;2011年
5 李宏亮;代谢综合征内皮细胞胰岛素抵抗分子机理研究[D];四川大学;2005年
6 李全民;1.胰岛素抵抗大鼠G-6-Pase、GK、UCPs基因表达和干预研究 2.PPARα基因变异与2型糖尿病家系血脂的关系[D];重庆医科大学;2003年
7 付雪艳;西洋参治疗大鼠胰岛素抵抗活性部位筛选及作用机理研究[D];黑龙江中医药大学;2006年
8 张梁;针刺对胰岛素抵抗模型大鼠干预的信号转导机制研究[D];广州中医药大学;2010年
9 高丹;NADPH氧化酶3源性活性氧在游离脂肪酸诱导的肝脏胰岛素抵抗发生中的作用机理研究[D];北京协和医学院;2009年
10 伍游雅;益气养阴,活血通腑法对代谢综合征患者外周胰岛素抵抗的影响[D];广州中医药大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈灿;胰岛素对人脐静脉内皮细胞HMGA1表达调控机理研究[D];南华大学;2013年
2 赵增宇;红活麻总黄酮的制备及防治T2DM-IR作用研究[D];华中科技大学;2009年
3 李梅;针刺调节胰岛素抵抗模型大鼠IRS-1、IRS-2和GLUT4的实验研究[D];广州中医药大学;2011年
4 胡淑鸾;不同浓度葡萄糖、胰岛素对兔视网膜Müller细胞糖原合成代谢的影响[D];福建医科大学;2011年
5 武力勇;心室重塑患者瘦素抵抗与胰岛素抵抗的相关性研究[D];昆明医学院;2010年
6 何颖;2型糖尿病肾病患者血清PON-1、氧化应激、胰岛素抵抗关系研究[D];广西医科大学;2010年
7 冯召岚;金智达胶囊对2型糖尿病脑病大鼠海马胰岛素信号通路的影响[D];大连医科大学;2010年
8 杜海侠;心脏瓣膜置换术围术期瘦素与胰岛素抵抗[D];福建医科大学;2010年
9 张亚辉;大黄素对非酒精性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗及瘦素作用的实验研究[D];中南大学;2010年
10 赵静;栀子豉汤改善Ⅱ型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的机制研究[D];河北医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026