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《中山大学》 2012年
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免疫增强剂对凡纳滨对虾幼虾生长、免疫及抗应激的影响

张健  
【摘要】:本论文主要研究了六种免疫增强剂对凡纳滨对虾幼虾生长、免疫及抗应激能力的影响。本论文包括以下六个方面的内容: 1.通过8周的室内水族缸生长实验以及随后的急性应激实验,评估虾青素(Astaxanthin,AX)对凡纳滨对虾生长、免疫及抗缺氧应激能力的影响。实验虾初始体重为1.01±0.001g。虾青素的添加有效浓度分别为0、25、50、75、100、125、150mg kg-1饲料。共设7个处理组,每组设5个平行,每个水族缸放30尾虾苗,每天饲喂4次。生长实验结束后,对实验虾进行了1h的缺氧应激实验。结果表明:当AX添加量为125mg kg-1和150mg kg-1时,对虾的增重率(Weight Gain,WG)和特定生长率(Specific Growth Rate,SGR)显著高于空白对照组(P0.05)。同时,当AX添加量为125mg kg-1和150mg kg-1时,对虾血淋巴中的总抗氧化能力(TotalAntioxidant Status,TAS)显著高于空白对照组(P0.05),超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase,SOD)和过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性显著低于空白对照组(P0.05)。然而,各处理组对虾血淋巴中的谷草转氨酶(Aspartate Transaminase,AST)、谷丙转氨酶(Alanine Transaminase,ALT)活性无显著性差异(P0.05)。1h缺氧应激实验后,当AX添加量为75、100、125和150mg kg-1时,对虾的存活率显著高于空白对照组(P0.05)。与常氧状态相比,缺氧状态下各处理组缺氧诱导因子(Hypoxia-inducible factor alpha, HIF~(-1)α) mRNA的表达量显著下降(P0.05),但AX150mg kg~(~(-1))处理组的表达量仍高于空白对照组(P0.05);SOD mRNA的表达量显著下降(P0.05),但AX125mg kg~(-1)和150mg kg~(-1)处理组的表达量仍高于空白对照组(P0.05);CAT mRNA的表达量显著下降(P0.05),但AX100、125和150mg kg~(-1)处理组的表达量仍高于空白对照组(P0.05);然而,缺氧状态下各处理组热应激蛋白70(70-kDa heat-shock protein, Hsp70)mRNA表达量显著上升(P0.05),但AX150mg kg~(-1)处理组的表达量显著低于空白对照组(P0.05)。以上结果显示,在饲料中添加有效浓度为125mg kg~(-1)和150mg kg~(-1)的虾青素,可显著提高凡纳滨对虾的生长、免疫和抗低氧应激能力。 2.通过8周的室内水族缸生长实验以及随后的急性应激实验,评估壳聚糖(Chitosan)对凡纳滨对虾生长、免疫及抗氨氮应激能力的影响。实验虾初始体重为0.71±0.00g。壳聚糖的添加浓度分别为0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0和6.0g kg~(-1)饲料。共设7个处理组,每组设5个平行,每个水族缸放30尾虾苗,每天饲喂4次。生长实验结束后,对实验虾进行了总氨浓度为120mg L~(-1)的氨氮应激实验,持续时间为72h。结果表明:7个处理组的WG和SGR都无显著性差异(P0.05)。同时,当壳聚糖添加量为3.0g kg~(-1)时,对虾血淋巴中酚氧化酶(Phenoloxidase,PO)和溶菌酶(Lysozyme,LSZ)活性显著高于空白对照组(P0.05)。72h的氨氮应激实验后,除了壳聚糖2.0g kg~(-1)处理组外,其他壳聚糖添加组的存活率均显著高于空白对照组(P0.05)。以上结果显示,在饲料中添加壳聚糖,虽对凡纳滨对虾的生长无显著性的影响,但可显著性提高凡纳滨对虾的免疫能力,并增强凡纳滨对虾对氨氮应激的抵抗力,添加适宜浓度为3.0g kg~(-1)。 3.通过8周的室内水族缸生长实验以及随后的急性应激实验,评估果寡糖(Fructooligosaccharides,FOS)对凡纳滨对虾生长、免疫及抗氨氮应激能力的影响。实验虾初始体重为0.60±0.00g。果寡糖的添加浓度分别为0、0.5、1.0、1.5、2.0和2.5g kg~(-1)饲料。共设6个处理组,每组设4个平行,每个水族缸放30尾虾苗,每天饲喂4次。生长实验结束后,对实验虾进行了总氨浓度为120mg L~(-1)的氨氮应激实验,持续时间为60h。结果表明:当FOS添加量为0.5g kg~(-1)和1.0g kg~(-1)时,对虾的WG和SGR显著高于空白对照组(P0.05)。同时,当FOS添加量为1.0g kg~(-1)时,对虾血淋巴的PO酶和碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,AKP)活性显著高于空白对照组(P0.05);当FOS添加量为1.0、1.5、2.0、2.5g kg~(-1)时,对虾血淋巴的酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,ACP)活性显著高于空白对照组(P0.05)。60h氨氮应激实验后,所有添加FOS的处理组对虾的存活率显著高于空白对照组(P0.05)。以上结果显示,在饲料中添加果寡糖,可显著提高凡纳滨对虾的生长、免疫和抗氨氮应激的抵抗力,添加适宜浓度为1.0g kg~(-1)。 4.通过8周的室内水泥池生长实验以及随后的急性应激实验,评估甘露寡糖(Mannan Oligosaccharide,MOS)对凡纳滨对虾生长、免疫及抗氨氮应激能力的影响。实验虾初始体重为2.52±0.01g。甘露寡糖的添加有效浓度分别为0、0.12、0.24、0.48、0.72和0.96g kg~(-1)饲料。共设6个处理组,每组设6个平行,每个水泥池放30尾虾苗,每天饲喂4次。生长实验结束后,对实验虾进行了总氨浓度为160mg L~(-1)的氨氮应激实验,持续时间为24h。结果表明:当MOS添加量为0.24、0.48、0.72和0.96g kg~(-1)时,对虾的WG和SGR显著高于空白对照组(P0.05),其中以MOS添加量为0.24g kg~(-1)时,对虾的WG和SGR最高。对虾肠道的电镜检测结果显示,所有添加MOS的处理组对虾的上皮细胞绒毛密度显著高于空白对照组(P0.05);当MOS添加量为0.24、0.48、0.72和0.96g kg~(-1)时,对虾的上皮细胞绒毛长度也显著高于空白对照组(P0.05)。24h氨氮应激实验后,当MOS添加量为0.24、0.48、0.72和0.96g kg~(-1)时,对虾的存活率显著高于空白对照组(P0.05),其中以MOS添加量为0.48g kg~(-1)时存活率最高。氨氮应激实验0-24h检测的PO酶和SOD酶活性,结果显示;0h时,MOS添加量为0.48g kg~(-1)时,对虾的PO酶活性显著高于空白对照组(P0.05)。MOS添加量为0.48、0.72和0.96g kg~(-1)时,对虾的SOD酶活性显著高于空白对照组(P0.05)。其中,MOS添加量为0.48g kg~(-1)时,对虾的SOD酶活性最高。24h后,与0h相比,所有处理组的PO酶活性显著降低(P0.05)。但MOS添加量为0.48g kg~(-1)处理组对虾的PO酶活性仍显著高于空白对照组(P0.05);所有处理组的SOD酶活性也显著降低(P0.05),但各处理组之间无显著性差异(P0.05)。以上所有结果显示,在饲料中添加甘露寡糖,可显著提高凡纳滨对虾的生长、免疫和抗氨氮应激的抵抗力,添加适宜浓度为0.24-0.48g kg~(-1)。 5.通过8周的室内水族缸生长实验以及随后的急性应激实验,评估β-葡聚糖(β-glucan)对凡纳滨对虾生长、免疫及抗氨氮应激能力的影响。实验虾初始体重为1.00±0.00g。将β-葡聚糖的不同浓度和不同投喂方式结合,设置1个对照组和6个处理组,分别为:(1)对照组:基础饲料每天投喂;(2)处理组1:0.3g kg~(-1)β-葡聚糖每天投喂;(3)处理组2:0.6g kg~(-1)β-葡聚糖每天投喂;(4)处理组3:0.9g kg~(~(-1))β-葡聚糖每天投喂;(5)处理组4:基础饲料5d+0.3g kg~(-1)β-葡聚糖投喂2d;(6)处理组5:基础饲料5d+0.6g kg~(-1)β-葡聚糖投喂2d;(7)处理组6:基础饲料5d+0.9g kg~(-1)β-葡聚糖投喂2d。每个处理组各设5个平行,每个水族缸放30尾虾苗。实验期间每天投喂4次。生长实验结束后,对实验虾进行了总氨浓度为160mg L~(-1)的氨氮应激实验,持续时间为24h。结果表明:间隔投喂β-葡聚糖的处理组4、处理组5和处理组6对虾的WG和SGR显著高于对照组(P0.05)。生长实验结束后,处理组5和处理组6对虾肝胰腺的PO酶mRNA表达量显著高于对照组(P0.05)。所有β-葡聚糖处理组对虾肝胰腺的SOD酶mRNA表达量显著高于对照组(P0.05)。对照组与6个β-葡聚糖处理组对虾肝胰腺的LSZ mRNA表达水平无显著性差异(P0.05)。所有β-葡聚糖处理组对虾肝胰腺的脂多糖和葡聚糖结合蛋白(lipopolysaccharide-and β~(-1),3-glucan binding protein,LGBP) mRNA表达量显著高于对照组(P0.05);同时,在所有β-葡聚糖处理组中,处理组2、处理组3、处理组4、处理组5和处理组6对虾肝胰腺的LGBP mRNA表达量显著高于处理组1(P0.05)。24h氨氮应激实验后,虾的存活率以间隔投喂β-葡聚糖的处理组4、处理组5和处理组6显著高于对照组(P0.05)。其中,在处理组1-处理组6中,间隔投喂β-葡聚糖的处理组5和处理组6的存活率显著高于每天投喂β-葡聚糖的处理组1、处理组2和处理组3(P0.05)。氨氮应激实验0-24h检测的PO酶、SOD酶和LSZ酶活性结果显示:0h时,间隔投喂β-葡聚糖的处理组5和处理组6对虾的PO酶活性显著高于对照组(P0.05);所有β-葡聚糖处理组对虾的SOD酶活性显著高于对照组(P0.05);对照组和所有β-葡聚糖处理组对虾的溶菌酶活性无显著性差异(P0.05)。24h时,与0h相比,对照组和所有β-葡聚糖处理组对虾的PO酶活性显著降低(P0.05)。但处理组6对虾的PO酶活性仍显著高于对照组(P0.05);对照组和所有β-葡聚糖处理组对虾的SOD酶活性无显著性变化,且各处理组之间无显著性差异(P0.05);处理组4、处理组5和处理组6对虾的溶菌酶活性显著提高(P0.05),且24h时,处理组2、处理组3、处理组4、处理组5和处理组6对虾的溶菌酶活性显著高于对照组(P0.05)。以上所有结果显示,在饲料中添加有效浓度为0.3-0.9g kg~(-1)β-葡聚糖,并采用投喂2d,间隔5d的方法可显著提高凡纳滨对虾的生长、免疫和抗氨氮应激的抵抗力。 6.通过8周的室内水泥池生长实验以及随后的急性缺氧实验,评估壳聚糖锌(Chitosan-Zn)对凡纳滨对虾生长、免疫及抗缺氧应激能力的影响。实验虾初始体重为1.49±0.01g。壳聚糖锌的添加浓度分别为25、50和100mg kg~(-1)饲料,并设置空白对照组和3000mg kg~(-1)壳聚糖组。共设5个处理组,每组设5个平行,每个水泥池放40尾虾苗,每天饲喂4次。生长实验结束后,对实验虾进行了缺氧应激实验,持续时间为6h。结果表明:5个处理组的WG和SGR都无显著性差异(P0.05)。添加壳聚糖3000mg kg~(-1)和添加壳聚糖锌100mg kg~(-1)两个处理组对虾的PO酶活性显著高于空白对照组(P0.05);对虾的SOD酶活性各处理组无显著性差异(P0.05);对虾的LSZ酶活性以添加壳聚糖3000mg kg~(-1)和添加壳聚糖锌100mgkg~(-1)两个处理组较高,与空白对照组有显著性差异(P0.05)。添加壳聚糖3000mgkg~(-1)和添加壳聚糖锌100mg kg~(-1)两个处理组对虾肝胰腺的PO酶mRNA表达量显著高于空白对照组(P0.05);添加壳聚糖锌100mg kg~(-1)处理组对虾肝胰腺的SOD酶mRNA表达量显著高于空白对照组(P0.05);对虾肝胰腺的LSZ mRNA表达量以添加壳聚糖3000mg kg~(-1)、壳聚糖锌50mg kg~(-1)和壳聚糖锌100mg kg~(-1)三个处理组较高,并与空白对照组有显著性差异(P0.05)。6h缺氧应激后,添加壳聚糖锌100mg kg~(-1)处理组对虾的存活率显著高于空白对照组(P0.05),与其他各处理组无显著性差异(P0.05)。以上所有结果显示,饲料中添加100mg kg~(-1)的壳聚糖锌虽然不能显著提高凡纳滨对虾生长的效率,但能显著提高凡纳滨对虾血淋巴PO酶和LSZ酶的活性,以及肝胰腺PO、SOD和LSZ mRNA的表达水平,进而提高凡纳滨对虾对缺氧应激的抵抗力,提高成活率。
【学位授予单位】:中山大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S963

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【参考文献】
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10 彭敏;陈晓汉;曾地刚;马宁;李咏梅;;凡纳滨对虾α-淀粉酶基因的SNPs检测[J];水产科学;2008年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘小龙;杨林;习欠云;汪元梅;江青艳;张永亮;;凡纳滨对虾过氧化物还原酶基因的克隆和鉴定[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
2 杨利艳;曹文红;吉宏武;章超桦;;超低温速冻凡纳滨对虾的保水工艺研究[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
3 丁兆坤;辛文伦;陈秀荔;肖群平;陈晓汉;;凡纳滨对虾亲环素A基因的克隆及表达[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
4 张晓军;张同武;赵翠;张兵;柳承璋;李富花;胡松年;相建海;;凡纳滨对虾基因组的初步分析[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
5 刘小龙;杨林;习欠云;熊接华;江青艳;张永亮;;复合植物多糖对凡纳滨对虾免疫及抗氧化功能的影响[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
6 曹平;黄翔鹄;李长玲;;颤藻对凡纳滨对虾生长和免疫相关酶活力的影响[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
7 杨世平;吴灶和;简纪常;;沼泽生红冬孢酵母对凡纳滨对虾抗氧化相关基因表达的影响[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
8 管越强;王慧春;康现江;;虾青素对凡纳滨对虾的免疫防护和抗氧化酶基因转录的影响[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
9 曾名湧;郭红;刘尊英;曾惠;朱素芹;;凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)腐败变质与优势腐败菌群体感应研究[A];2010年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨华南地区农产品加工产学研研讨会论文摘要集[C];2010年
10 李桂英;宋晓玲;孙艳;;饲料中益生菌对凡纳滨对虾部分免疫酶活的影响[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 吴凡;“低盐养殖凡纳滨对虾食味劣化及调控”通过鉴定[N];中国渔业报;2010年
2 缪翼;“低盐凡纳滨对虾饲料风味改良剂”获国家专利[N];中国渔业报;2010年
3 ;水产原良种新增13品[N];中国渔业报;2011年
4 记者 侯小健;海南应建全国水产苗种南繁基地[N];海南日报;2009年
5 乐亭县乐亭镇东南小区建设楼3栋中门201号 谢洪来;可预防对虾病的养殖池[N];河北科技报;2002年
6 实习生 赵会 记者 刘敏;北京地铁塌方 我市四民工遇险[N];眉山日报;2007年
7 记者 靖九江;H2S在肾血管性高血压中发挥作用[N];中国医药报;2006年
8 本报记者 王静 实习生 董姣;有股钻劲儿工人也能成专家[N];石家庄日报;2006年
9 记者 杨鹏元;全市劳动部门:以政风热线抓维权[N];武威日报;2006年
10 辽宁省大连水产学院 杜佳垠;养殖大菱鲆亲鱼催产技术[N];中国畜牧水产报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张健;免疫增强剂对凡纳滨对虾幼虾生长、免疫及抗应激的影响[D];中山大学;2012年
2 段妍;凡纳滨对虾游泳行为生理生态学实验研究[D];中国海洋大学;2012年
3 张莹;凡纳滨对虾和中华绒螯蟹免疫相关因子功能及应用的初步研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
4 刘晓华;谷胱甘肽对凡纳滨对虾抗氧化防御的调控机理[D];华中农业大学;2010年
5 郜卫华;长期低盐胁迫诱导凡纳滨对虾肝胰腺差异表达基因的分析和鉴定[D];中国海洋大学;2012年
6 侯纯强;水中钙浓度对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)蜕皮和生长的影响及生理生态学机制[D];中国海洋大学;2011年
7 夏西超;KK-42对凡纳滨对虾生长发育相关基因时空表达的影响[D];河南师范大学;2011年
8 李喜莲;凡纳滨对虾肌肉组织中体重调控相关基因的筛选、克隆鉴定及功能研究[D];西北农林科技大学;2011年
9 郭彪;光照和温度波动对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)蜕皮和生长的影响及机制的初步研究[D];中国海洋大学;2010年
10 罗展;凡纳滨对虾两种C-型凝集素的基因克隆和功能研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈淑湘;不同冷藏条件对凡纳滨对虾品质的影响[D];海南大学;2012年
2 刘晓敏;发酵制备腺苷甲硫氨酸及其对凡纳滨对虾的应激保护[D];广东海洋大学;2010年
3 王亮;凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)冰温气调保鲜技术的研究[D];中国海洋大学;2010年
4 朱现晔;凡纳滨对虾血细胞免疫抑制剂的筛选与免疫调控作用的研究[D];中国海洋大学;2011年
5 池岸英;凡纳滨对虾微波蒸煮参数优化及风味成分分析[D];广东海洋大学;2012年
6 张新节;三种水环境下,饲料钾对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长和生理特性的影响[D];广东海洋大学;2011年
7 曾雯娉;凡纳滨对虾幼虾对赖氨酸、蛋氨酸、精氨酸和苯丙氨酸需要量的研究[D];广东海洋大学;2012年
8 杨长明;凡纳滨对虾人工授精与生长发育研究[D];西北农林科技大学;2010年
9 韦振娜;凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)对植物蛋白源的利用研究[D];广东海洋大学;2010年
10 冉维亮;环境因子对凡纳滨对虾性别分化的影响[D];广东海洋大学;2010年
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