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《暨南大学》 2011年
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人参皂甙Rb1对小鼠免疫细胞行为影响和脑缺血再灌注损伤小鼠的免疫调节作用

吕梦捷  
【摘要】:目的: 研究人参皂甙Rb1对T细胞、巨噬细胞和小胶质细胞行为的影响及其对缺血再灌注小鼠损伤的免疫学效应,并探讨其作用机制。 方法: 1.体外实验:研究人参皂甙Rbl对小鼠T淋巴细胞、巨噬细胞和小胶质细胞行为的影响,并探讨其在免疫调节中的作用机理。分离制备小鼠淋巴结细胞悬液,利用流式细胞术检测Rb1对刀豆蛋白A (concanavalin, Con A)的诱导的T淋巴细胞活化抗原CD3+/CD69+、CD4+/CD25+表达的影响;羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, CFDA-SE)染色法结合流式细胞术检测T淋巴细胞增殖率;用碘化丙锭(propidium iodide, PI)/DiOC6(3)双染法测定双氧水(H202)诱导的T淋巴细胞凋亡的情况;流式细胞术(FCM)检测Rb1对巨噬细胞吞噬直径1μm微球的影响;Griess法检测脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌—氧化氮(nitric oxide, NO)情况;使用Cytometric Bead Array (CBA)检测Rbl对LPS刺激巨噬细胞分泌细胞因子的影响。利用激光共聚焦显微和流式细胞仪检测Rbl对ION诱导的小胶质细胞的Ca2+稳态和ROS释放的影响。 2.体内实验:评价人参皂甙Rbl对脑缺血再灌注(MCAO/R)损伤小鼠的影响,并初步研究Rb1对MCAO/R模型小鼠的T淋巴细胞的保护机制。以线栓法建立Balb/c小鼠脑缺血再灌注模型,观察Rbl对模型小鼠的脑坏死面积、寿命、胸腺指数、脾脏指数的影响;通过线粒体膜电位的检测Rb1对地塞米松(DEX)诱导的细胞凋亡的抑制作用;体外检测Rb1对以刀豆蛋白A (Con A)刺激MCAO/R模型小鼠淋巴结来源的淋巴细胞的早期活化,通过MTT法分析Rb1对模型小鼠淋巴细胞增殖的影响,并检测血液中中性粒细胞内活性氧(ROS)的分泌情况。 结果: 1.终浓度为5、10、20μmol/L的Rb1对Con A刺激的调节T细胞(Treg)的表达具有促进作用,而CD3+/CD69+的表达明显下调(P0.01);对Con A刺激的T淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用(P0.05),且呈剂量依赖性;显著抑制H2O2诱导的淋巴细胞的凋亡进程(P0.05)。Rb1对巨噬细胞的吞噬功能具有促进作用,明显抑制LPS诱导的吞噬作用(P0.05);Rb1能抑制巨噬细胞NO的产生(P0.01);调节LPS诱导的细胞因子的产生。Rb1可抑制ION诱导的Ca2+内流和ROS的产生(P0.05)。 2.人参皂甙Rb1能够明显减少MCAO/R模型小鼠的脑坏死面积的比例;并能够抑制MCAO/R损伤模型小鼠的胸腺和脾脏的萎缩(P0.05);能够明显延长MCAO/R模型小鼠的寿命。体外实验结果表明,MCAO/R组小鼠相对于Normal组淋巴细胞的活化率降低、增殖不明显;而DEX诱导的淋巴细胞的凋亡和外周血中ROS水平,MCAO/R组与Normal组相比有显著升高;Rb1治疗组则有很大改善,与Normal组、Sham组相近。 结论: 人参皂甙Rb1在一定浓度范围内对小鼠淋巴细胞的体外活化及增殖均具有明显的抑制作用,对小鼠腹腔巨噬细胞和小胶质细胞的功能均有明显的调节作用,并且对脑缺血再灌注损伤小鼠具有显著的保护作用。
【学位授予单位】:暨南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285.5

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【参考文献】
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