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《暨南大学》 2014年
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1,25二羟维生素D3对穿透性角膜移植小鼠T淋巴细胞的实验研究

崔裕波  
【摘要】:目的 本研究旨在探讨1,25二羟维生素D3对穿透性角膜移植联合皮肤移植模型小鼠免疫排斥反应的影响,进一步探讨1,25二羟维生素D3对小鼠免疫系统T淋巴细胞的调节作用。 方法 实验以C57BL/6小鼠为受体,以Balb/c小鼠为供体,按照完全随机分组设计将实验分成对照组、移植组和干预组。建立小鼠穿透性角膜移植联合皮肤移植的动物模型,干预组小鼠隔日腹腔注射溶解于1,25二羟维生素D3的花生油,剂量为10ng,移植组和对照组小鼠隔日腹腔注射同等剂量的生理盐水。手术后每天在裂隙灯下观察角膜植片的情况,肉眼下观察皮肤植片的情况。 在移植术后的第13天,取三组小鼠外周血,行流式检测外周血中γδT淋巴细胞和CD4+CD25+调节性T淋巴细胞的差异性,探讨1,25二羟维生素D3对这两种细胞的调节作用。 移植术后第13天,称重后处死三组小鼠,然后取三组小鼠的脾脏,称重后计算脾脏/体重百分比,然后用淋巴细胞分离液获取脾脏淋巴细胞,采用Trizol法提取淋巴细胞总RNA后进行逆转录过程,然后进行荧光定量聚合酶链反应,观察三组小鼠脾脏淋巴细胞中Th1相关的细胞因子IFN-γmRNA和IL-2mRNA,Th2相关的IL-10mRNA,Th17相关的IL-17AmRNA的表达的差异性,推断1,25二羟维生素D3对各种细胞因子的调节作用。 统计学分析:所有的实验数据均以均数±标准差来表示,应用SPSS19.0进行方差分析,P>0.05认为差异无统计学意义,P<0.05则认为差异有统计学意义。 结果 1,25二羟维生素D3干预组小鼠的角膜植片和皮肤植片的生存时间较移植组要长,移植物小鼠的外周血中γδT细胞的比例明显高于对照组和干预组,干预组小鼠γδT细胞的比例高于对照组,1,25二羟维生素D3对小鼠外周血的γδT细胞具有一定的下调作用,移植组小鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞明显低于对照组和干预组,干预组小鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的比例高于对照组,1,25二羟维生素D3对CD4+CD25+调节性T细胞具有一定的上调的作用。就脾脏淋巴细胞而言,移植组Th1相关的IFN-γmRNA和IL-2mRNA的表达高于对照组和干预组,干预组高于对照组,移植组Th17相关的IL-17AmRNA的表达高于对照组和干预组,干预组高于对照组,干预组Th2相关的IL-10mRNA的表达高于移植组和对照组,干预组高于移植组,三组之间的差异具有统计学意义。1,25二羟维生素D3可以下调脾脏淋巴细胞中Th1相关的IFN-γmRNA和IL-2mRNA的表达,下调Th17相关的IL-17AmRNA的表达,上调Th2相关的IL-10mRNA的表达。 结论 这些结果说明1,25二羟维生素D3可能对小鼠同种异体角膜移植的免疫排斥反应具有抑制作用,通过上调对免疫排斥反应具有抑制作用的CD4+CD25+调节性T细胞的数量,下调对免疫排斥反应具有促进作用的γδT细胞的比例。1,25二羟维生素D3对促进炎症反应相关的细胞因子IFN-γmRNA、IL-2mRNA和IL-17AmRNA的表达具有抑制作用,1,25二羟维生素D3对抑制炎症反应相关的细胞因子IL-10mRNA的表达具有上调作用。
【学位授予单位】:暨南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R779.65

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