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《暨南大学》 2018年
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生长分化因子11对脂肪干细胞成脂分化及脂肪代谢的影响

刘俊伟  
【摘要】:目的:生长分化因子11(GDF11)作为一个新发现的生长分化因子,在胚胎发育以及抗衰老方面具有重要作用,但其对肥胖及肥胖相关性疾病的影响仍然未知。因此本研究通过构建CHO细胞GDF11表达系统,分离纯化获得GDF11蛋白,并进一步探究了其对脂肪干细胞增殖分化以及脂肪代谢的影响,为GDF11在肥胖及肥胖相关性疾病中的潜在应用提供理论依据。方法:1、利用基因工程技术构建pcDNA3.1~+-KSH-DHFR-GDF11质粒。2、通过转染构建CHO细胞GDF11表达系统,并通过镍柱纯化系统分离纯化GDF11蛋白。3、利用CCK8法检测GDF11对脂肪干细胞增殖的影响,利用油红O染色和q-PCR检测GDF11对脂肪干细胞成脂分化的影响。4、利用油红O染色、甘油三酯检测、甘油检测等探究GDF11对脂肪代谢的影响。结果:1、通过菌落PCR、双酶切和测序证明成功构建了pcDNA3.1~+-KSH-DHFR-GDF11质粒。2、通过SDS-PAGE电泳表明成功获得了GDF11蛋白。3、GDF11能促进脂肪干细胞的增殖,并抑制其成脂分化。4、GDF11抑制脂肪细胞中的脂肪合成代谢,并且通过PKA和BMP通路促进脂肪细胞中的脂肪分解代谢。结论:1、成功表达纯化了GDF11蛋白。2、GDF11促进脂肪干细胞的增殖。3、GDF11抑制脂肪干细胞成脂分化。4、GDF11抑制脂肪细胞中的脂肪合成代谢,促进脂肪分解代谢,从而减少了脂肪细胞内甘油三酯的含量。
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