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《暨南大学》 2000年
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银环蛇毒素若干组分诱导人慢性粒细胞白血病K562肿瘤细胞的凋亡研究

陈勇  
【摘要】: 目的:确定银环蛇毒素是否能诱导慢性粒细胞白血病K562肿瘤细胞的凋 亡,以及查找出银环蛇粗毒中使K562细胞凋亡的毒素组份,并确定其最佳细胞 杀伤时间范围和毒素浓度,从而为白血病的理论研究和治疗提供新的工具,同时 为蛇毒的开发利用提供理论基础。 方法:本卖验采用羧甲基纤维素C-52阳离子交换层析将银环蛇粗毒进行了 若干毒素组分的分离纯化,并以流式细胞术定量分析为主,以倒置显微镜、MTT 比色法、荧光显微镜等多种定性分析为辅,首次对银环蛇粗毒及其若干组分蛋白 对人慢性粒细胞白血病K562肿瘤细胞的细胞杀伤作用和凋亡诱导情况进行了研 究。 结果:在MTT比色分析中,银环蛇粗毒在浓度为8×10~4ng/ml以下时处理细胞 24、48和72小时,K562细胞的吸光度和存活率与空白对照组相接近,都较高,而 在浓度为8×10~5ng/ml时,K562细胞的吸光度和存活率急剧下降,5μg/mL CHX阳 性对照组的K562细胞由于诱导细胞凋亡也导致细胞吸光度和存活率急剧下降; 银环蛇粗毒在浓度为8×10~3ng/ml以下时处理细胞96和120小时,K562细胞的 吸光度和存活率与空白对照组也相似,都非常低,而在浓度为8×10~4ng/ml时却 急剧上升,在浓度8×10~5ng/ml时又下降到空白对照组水平,5μg/mL CHX阳性 对照组K562细胞的吸光度和存活率也与空白对照组细胞相似。 用倒置显微镜可观察到,引起细胞吸光度和存活率急剧下降的细胞组培养 液中几乎没有完整的细胞,均为细胞碎片;在荧光显微镜观察中,处理8小时的 CHX阳性对照组和处理24小时的8×10~5ng/ml第Ⅵ峰显示明显的细胞凋亡特征, 即出现凋亡小体,而不同作用时间和不同浓度的银环蛇粗毒及其第Ⅳ峰、Ⅶ峰和 Ⅷ峰均未发现凋亡现象。 暨南人学颀士学位论文 中文摘要 ,._ -进一步的流式细胞仪的检测亦有相似的结果.只有在处理 8小时的 CHX阳 性对照组和处理 24。】、时的瞰为 8 x 10’ng加l的第*峰的 DM含量分布组方图 中,二倍体峰前出现一个亚G;细胞群,即凋亡细胞群;在处理24小时的浓度为 8 xlo’"g/ml的银环蛇粗毒的mA含量分布中虽然没出现亚=邯峰,但从图中 回 可明显看出,与空白对照组相比,其DNA含量大的细胞数量明显减少,而 DNA 含量小的细胞数量大大增加,即 DNA含量分布组方图中的二倍体峰在X轴上往前 移了. 结论:(1)银环蛇粗毒对人任性粒细胞白血病“62肿瘤细胞有杀伤或生长 抑制作用,且存在时间和剂量依赖关系,约 8 x 10’ng加l浓度的银环蛇粗毒在处 理K562细胞约24小时时对该种细胞有非常强的杀伤作用;(2)银环蛇粗毒的这 t。。,b,。。t,。。。,,。。,、,。-。。。。。。。,、。。。。-。。。。L-,。 回 种杀伤作用,由子其成分的复杂性而很难确定其原因是否为细胞凋亡所致,也许 是某种毒素成分的细胞凋亡诱导程序还没来得及启动,细胞已被其它的毒素组分 所杀伤,固而无法检测到细胞凋亡现象;(3)本实验所分离的若干银环蛇毒组分 门V峰、VI峰、yll峰和Yll降)中,只有占粗毒组分约2.2%的第*峰有明显的细 胞凋亡作用,而占粗毒组分分别为 14.4儿 3.7%和 7.2加的*峰、yll峰和*降均未 发现细胞凋亡现象.H)肌源性突触后神经毒素a仑TX是银环蛇粗毒第*峰的 主要成分,亡不能诱导K562细胞凋亡.(5)第*峰的主要成分是a-BTX、。-BTX 和一种分子量约为20kDa 的蛋白质等,所以,细胞凋亡因子很可能是除a-BTX 以外的其它某种或多种成分.
【学位授予单位】:暨南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2000
【分类号】:Q255

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【参考文献】
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