维甲酸和紫杉醇对肺癌细胞端粒酶活性的影响及其抗癌作用的研究

【摘要】： 前言 肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在许多国 家居恶性肿瘤之首。由于目前肺癌的病因和发病机理尚不完全清楚，使得 肺癌的治疗仍很棘手。目前肺癌的治疗已形成了包括手术、化疗以及放疗 在内的综合治疗体系。但即使如此，肺癌的预后仍较差。而化疗、放疗的 毒副作用较大，病人难以耐受，且特异性较低。因此寻找一个肿瘤细胞所 具备而又不存在于正常细胞的治疗靶子，是许多医学工作者一直探索的问 题，近年来发现端粒酶（Telomerase）与人类肿瘤（包括肺癌）之间关系 密切，使其成为近期生命科学领域研究的热点。 端粒对维持染色体的结构具有重要意义，端粒酶是维持肿瘤细胞无限 增殖与分裂所必须，作为恶性肿瘤的共同生物学标志，可望成为癌症治疗 的共同靶子。抑制端粒酶治疗将是一种切实有效、低毒副作用的抗肿瘤治 疗方法。 维甲酸（retinoic acid，RA）是迄今研究最多的细胞分化诱导剂之一， 文献报导，RA诱导早幼粒细胞白血病HL-6O细胞和大肠癌细胞时端粒酶 活性明显被抑制，癌细胞的增殖明显受阻。紫杉醇是目前非小细胞肺癌化 疗的一线药物，它通过促进微管的聚合，抑制解聚，使细胞的有丝分裂受 阻，从而阻止肿瘤细胞的增殖。RA、紫杉醇对肺癌细胞端粒酶活性有无影 响尚未见报导。二药联合用于肺癌的治疗亦未见报导。 目的本研究选用RA和紫杉醇作用于肺癌细胞，旨在探讨RA、紫杉醇对 肺癌细胞端粒酶活性的影D狗，同时探讨RA、紫杉醇单独及联合应用对体 外培养的肺癌细胞及裸鼠肺癌皮卜移怕痫的影响，并从端粒酶角度探讨RA 和紫杉醇的抗肿瘤机制及二者联用于临床的可能性。 方法 1．肺癌细胞活性及IC，。的检狈MTT法） 肺癌A549细胞培养1，3，5天后用酶标仪检测并打印吸光度A，。，，l；。 算细胞活力及细胞抑制率，找出 RA、紫杉醇第卜 3、5大的u扣门C，；；表 示抑制50％细胞生长的药物浓度人 2．RA及紫杉醇对肺癌细胞的欲向（体外实验） 根据MTT法测得的RA、紫杉醇的仁川，分别采用 40umol／L RA、20umol／L 紫杉醇及40umol／L RAo0umol／L紫杉醇处理肺癌细胞，培养3大后收集 细胞定量检测端粒酶活性，并用MTT法测定不同处理组细胞活力和细胞 抑制率。 3．RA及紫杉醇对裸鼠肺癌皮下移植瘤的影1响（体内实验） 荷肺腺癌A549皮下移植瘤雄性Bal儿裸鼠40只随机分为 5组，分 另腹腔注射生理盐水、溶剂、40mg／kg M、36mg／kg紫杉醇、40mg／kg RAo6mg呐紫杉醇。分别于接种时和停药24小时后称量鼠重，测量移棺 瘤长短径。按公式T—扩b0…为短径，b为长径广·算瘤体积。移梢瘤部分 用作HE染色常规病理学检查；部分用作端粒酶活性检测。 4．端粒酶定量检测 5．统计学方法：两组资料的均数比较用t检验，多组资料的均数比较用方 差分析。 结果 1．体外实验中趴、紫杉醇均能显著抑制肺癌细胞的生长，且呈时问和浓度 依赖性。40umol／L RA、20umol＊紫杉醇及 40umol／L RA＋20uuol＊紫杉 醇处理肺癌细胞3大后其细胞活力分别下降至46．55见48．10见13．04y （与对照组比较 Pm．01，二药联川组与 RA组、紫杉醇组比较 P州．of人 2 2．RA、紫杉醇均能有效抑制裸鼠肺癌皮下移权瘤的生扶。实验前各组痈体 积无差别。实验后各组比较：RA组u．66士I．57。勺、紫杉醇组伯 93 士2．21。m勺、合用组u．90I2．57。勺瘤体积均显著小于对照组门．15 士1．98皿）及溶齐对照组门．01士1．97＊）（p＜0．01），紫杉醇组及合 用组瘤体积小于 RA组u．01人 3．裸鼠体重在实验前无差别。实验后体重，RA组门．05士 1．349X紫杉 醇组门6．41土 1．539人合用组门．50士 1．419）减轻明显于对照组＊2．43 上 1．60P）、溶剂对照组（22．55士 1．56P）＊（0 01）。RA组、紫杉醇组和 合用组三组间鼠重无差别。 4．体外、体内实验中RA均能抑制肺癌细胞端粒酶活忖，而紫杉醇则无此 抑制作用。体外实验中RA组肺癌细胞端粒酶活件抑制率为％．93％卜勺 对照组比较P＜0．of），合用组为53．08％（－‘j对照组比较P＜0．01）。体内实 验中RA组肺癌皮下移植瘤细胞端粒酶活性抑制率为”．26％〔‘－）溶剂对 照组比较＊0．of），合用组为37．75％（与溶齐对照组比较＊0．01）。 结论 1．RA在体外、休内均能显著抑制肺癌细胞端粒腼活忖，而紫杉醇则对肺癌 细胞端粒酶活性无影【．他 二药联用对肺癌细胞端粒酶刀忖儿办同抑制作 用。 2．RA、紫杉醇在体外均能显著抑制肺癌细胞的生长，此抑制作川与药物呈 作用时间和浓度依赖性。RA与紫杉醇联用对体外培养的肺癌细胞的生氏 具有协同抑制作用。 3．RA抑制肺癌细胞端粒酶活性可能是其抗肿瘤效应的机制之一。紫杉醇则 不是通过抑制端粒酶活性而产生抗E。！J瘤效应。两种不同作川机制的药物 联用对体外肺癌细胞的生长有显著的协同抑制效应。 4．lth、紫杉醇均能显著抑制裸鼠

【关键词】：维甲酸 紫杉醇 肺肿瘤 端粒酶
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2000
【分类号】：R734.2
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