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《暨南大学》 2004年
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胎肝Sca-1~+细胞的横向分化和应用的实验研究

廖继东  
【摘要】:目的 探讨胎肝Sca-1~+细胞横向分化的能力、特点和在肾损伤修复中的作用。方法取14.5天C57BL/6j小鼠的胎肝,制成单细胞悬液;用快速PCR方法鉴定细胞的性别;收集雄性细胞,用MACS(magnetic cell sorting)技术分离雄性胎肝Sca-1~+(Stem Cell Antigen-1)细胞;用同样方法分离骨髓Sca-1~+细胞;将2×10~4的雄性胎肝Sca-1~+细胞移植给受致死量γ照射的同系成年雌性小鼠;2~6月后取受体小鼠的肾、肝、肺、胃和小肠组织,制作3-5μm石蜡切片;用原位杂交技术追踪Y染色体来确定细胞的来源,同时用特异性组织化学技术显示组织特征。为了研究胎肝Sca-1~+细胞修复能力,用甘油诱导小鼠急性肾功能衰竭(acute renal failure.ARF)的模型;3h后,腹膜下注射10μg/kg的G-CSF连续5天,监测血清肌酐和尿素氮水平以及肾组织病理形态。为了消除内源雌性干细胞的作用,用致死量射线清除小鼠体内造血干细胞,移植雄性胎肝Sca-1~+细胞,8周后雌性小鼠骨髓变为雄性骨髓;用甘油诱导小鼠急性肾功能衰竭,72h后再次输入2×10~4雄性胎肝Sca-1~+细胞,8周后制取受体肾组织切片。用原位杂交技术追踪Y染色体来确定细胞的来源,并计算横向分化的频率。最后,比较了胎肝和骨髓的Sca-1~+细胞向。肾组织细胞分化的频率。 结果 在移植雄性胎肝Sca-1~+细胞的雌性小鼠的肾、肝、肺、胃和小肠组织切片中出现雄性细胞,各组织雄性细胞的百分数分别为(4.5±0.5)%、(0.9±0.1)%、(1.9±0.6)%、(6.1±0.5)%和(7.61±2.3)%,呈现小肠>胃>肾>肺>肝的特征;肾组织切片中的雄性细胞分别为RCA~+、CYP_(1A2)~+、Vimentin~+、CD_(45)~-和F_(4/80)~-;急性肾损伤使雌性受体小鼠肾组织中的雄性细胞数增加(8.58±1.34)%,在肾小管周围出现成对排列的雄性细胞;雄性胎肝Sca-1~+细胞输注使急性肾组织损伤雌性受体小鼠肾脏组织中的雄性细胞增多(18.13±1.91)%,在肾小管周围出现成环状排列的雄性细胞;在急性肾功能衰竭的肾组织中,雄性细胞频率高于骨髓;结论 小鼠胎肝Sca-1~+细胞具有向肾、肝、肺、胃和小肠等组织细胞分化的潜力和修复损伤肾组织细胞的能力;小鼠胎肝Sca-1~+细胞向肾组织细胞分化的能力优于骨髓。
【学位授予单位】:暨南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R329.2

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